【關鍵詞】 效價；比濁法；乙酰螺旋黴素
Content determination of acetylspiramycin tablets
by turbidimetric method
Liu Ying and Cui Chunying
ABSTRACT Objective To establish a turbidimetric method for the content determination of acetylspiramycin tablets. Method The test organism was Staphylococcus aureus. Adjust the bacterial suspension of Staphylococcus aureus inoculation with about 0.5%ratio， at ℃ for 3.5～4.5 hours. Results The linear range was
KEY WORDS Potency; Turbidimetric method; Acetylspiramycin tablets
乙酰螺旋黴素是螺旋黴素乙酰化衍生物，屬半合成大環內酯抗生素，是單乙酰螺旋黴素II、單乙酰螺旋黴素III與雙乙酰螺旋黴素II、雙乙酰螺旋黴素III四個組分為主的混合物，毒性低，不良反應小，較廣泛有效地應用於金葡菌、鏈球菌、肺炎杆菌、大腸埃希菌、淋球菌等引起的感染［1］。
因乙酰螺旋黴素為多組分抗生素，一般的化學分析方法或高效液相色譜法均無法測定其含量，雖有文獻［2，3］報道可用紫外分光光度法測定乙酰螺旋黴素製劑的含量，但紫外分光光度法專屬性差，測定結果誤差較大。對乙酰螺旋黴素及其製劑的含量測定，中國藥典2005年版［4］采用管碟法測定其效價，但管碟法操作繁雜、耗費時間慢長，影響因素多，且需有經驗的實驗人員才能得到理想的結果，同時由於乙酰螺旋黴素是多組分，容易導致雙圈現象，使重現性差。比濁法是一種快速、方便、經濟的測定抗生素含量的方法，中國藥典2005年版微生物檢定法新增濁度法測定慶大黴素效價［5］。國內正在研製微生物比濁法測定儀，我們應用該測定儀在線自動測定乙酰螺旋黴素效價，減少了多種實驗影響因素，節省了大量人力勞動，4h即可得到實驗結果。
1 儀器與試劑
1.1 儀器
TU1901紫外分光光度計，北京普析通用公司；CZB1抗生素光度測量儀，北京潮聲公司；WBS100微生物比濁法測定儀與ZY300多功能微生物自動測量分析儀均是北京先驅威鋒技術開發公司生產；BP211D天平，Mettler公司。1.2 菌株、樣品、培養基與試劑
金葡菌CMCC26003、大腸埃希菌 CMCC44103與肺炎克雷伯菌CMCC46117均由中國藥品生物製品檢定所提供。
乙酰螺旋黴素標準品由中國藥品生物製品檢定所提供。乙酰螺旋黴素片為河南天方藥業股份有限公司生產；乙酰螺旋黴素片為石藥集團藥業有限責任公司生產。
營養瓊脂培養基與抗生素檢定培養基III均為北京奧博星生物技術有限責任公司生產；0.9%氯化鈉溶液和磷酸鹽緩衝溶液均按中國藥典2005年版二部附錄［5］配製。
2 效價測定
2.1 管碟法
按中國藥典2005年版二部方法［4］測定。
2.2 比濁法
含菌培養基的配製 取金葡菌新鮮斜麵培養物，接種於營養瓊脂培養基小斜麵上，置35～37℃培養18～20h，用0.9%氯化鈉溶液洗下菌苔，並用0.9%氯化鈉溶液稀釋，使其在650nm波長處的吸光度約為1.0。取菌液約5ml加至培養基100ml中，搖勻，為含菌培養基。
溶液的配製
標準品溶液 精密稱取乙酰螺旋黴素標準品適量，加乙醇溶解後，加滅菌水稀釋至
供試品溶液 精密稱取研細後的乙酰螺旋黴素片適量，加乙醇溶解後，加滅菌水稀釋至
培養與測定 分別精密吸取實驗用標準品溶液和供試品溶液各1.0ml，加入滅菌培養管中，再加入含菌培養基9.0ml，置抗生素比濁法測量儀內，於℃培養。另取稀釋溶劑1.0ml，空白培養基9.0ml，混勻，作為空白對照；再取稀釋溶劑1.0ml，含菌培養基9.0ml，混勻，作為陽性對照。儀器在線於530nm波長處測定各管金葡菌對數生長期內不同培養時間下的吸光度或濁度。根據量反應平行線原理［6］計算供試品的效價值。
3 結果
3.1 測定條件的選擇
實驗菌的選擇由於乙酰螺旋黴素適用於革蘭陽性菌如金葡菌、鏈球菌、肺炎杆菌、大腸埃希菌等，根據其抗菌作用與中國藥典2005年版常用的效價測定用菌株，初步選擇大腸埃希菌、金葡菌與肺炎克雷伯菌為實驗用菌株，進行進一步的篩選。
繪製菌株在不同抗生素濃度的生長曲線，根據生長曲線及在不同抗生素濃度下菌液吸光度值的變化，發現大腸埃希菌對乙酰螺旋黴素不敏感，對不同濃度的乙酰螺旋黴素，培養後菌液吸光度值相差很小，菌株生長曲線無明顯地對數生長期，不適用。乙酰螺旋黴素對肺炎克雷伯菌抑製作用較強，對不同濃度的乙酰螺旋黴素，培養後菌液吸光度值差值較小，且菌生長緩慢，也不適用。金葡菌對乙酰螺旋黴素敏感，對不同濃度的乙酰螺旋黴素，培養後菌液吸光度值差值較合適，菌株生長曲線有較好地對數生長期，可以選擇。
圖1 金葡菌的生長曲線
實驗菌濃度的選擇 按含菌培養基的配製方法，加入不同體積的菌液2.0～8.0ml至培養基100ml中，結果顯示菌液濃度太低時，細菌生長受抗生素抑製，生長時間達4h，吸光度值仍達不到0.2；菌液濃度太高時，吸光度值很快超過0.7，且由於培養基中含菌量太多，菌本身互相抑製，導致菌生長雜亂，偏離平行較差；最終選擇菌液濃度為0.5%左右，此時菌生長良好，有明顯地對數生長期，吸光度一般為0.3～0.7，偏離平行良好。
3.2 線性與範圍
精密吸取實驗用貯備溶液適量，分別用磷酸鹽緩衝溶液稀釋至下列濃度：1.2～31
A=-0.9514ogC+1.4662 r=0.9995
3.3 測定方法
標準曲線法 標準品溶液的濃度分別為6.4、8.0、10.0、12.5和
二劑量法 標準品溶液與供試品溶液的高低濃度分別為8.0和
照中國藥典2005年版二部附錄與
3.4 準確度
精密稱取乙酰螺旋黴素標準品適量，按乙酰螺旋黴素片處方加入輔料，照供試品溶液的稀釋方法稀釋至實驗濃度，作為供試品溶液。標準品溶液的配製同上，劑量為80%、100%、120%的平均回收率為100.7%，RSD=1.4%，在效價測定範圍內，回收率良好。
3.5 精密度
實驗用標準品溶液的配製同2.2，同時也用作供試品溶液，按標準曲線法重複測定6次，測定值分別為98.64%、101.33%、99.51%、102.29%、101.14%和102.50%，RSD=1.5%，在效價測定範圍內，該方法精密度良好。
3.6 測定樣品
用兩個廠家不同測定原理的儀器對3批乙酰螺旋黴素片進行測定並與管碟法結果進行比較，結果無顯著性差異。
4 討論
比濁法較管碟法有明顯優點，操作方便、快速，可信限率低，尤其是儀器在線自動測量，使結果更準確，精密度更好，值得推廣應用，對醫院和企業檢測半成品能縮短檢測時間，提高工作效率。
文獻［6，7］報道，在比濁法實驗中，pH7.0是培養 表1 乙酰螺旋黴素片的比濁法與管碟法效價測定WBS100微生物比濁法測定儀采用的是新型半導體檢測器，CZB1抗生素光度測量儀采用的是光電倍增管，兩者采集透過光的原理有差別，但測定的都是光的透過率，最後換算為吸光度，兩者測定原理不同，但由於效價測定是與標準品同時測定，所以都可達到測定抗生素供試品效價的目的。兩種儀器均為我國正在研製中的比濁法測定儀器，硬件與軟件均正處在完善的過程中，隨著時間的推移，硬件與軟件都會更加成熟。
【參考文獻】
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