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包裝飲用水中糞便性鏈球菌之檢驗



錄入時間:2010-11-19 9:49:23 來源:百度

     本檢驗方法適用於包裝飲用水(包括已包裝礦泉水)中糞便性鏈球菌(Fecal Streptococci)之檢驗。

器具及材料:

1、幹熱滅菌器:玻璃用具等之滅菌用,其內部中心溫度能達170℃以上,並維持

     該溫度1小時以上者。


2
、高壓滅菌釜:培養基及稀釋液等不能幹熱滅菌之材料及用具等之滅菌用,

     常以121℃( 15 1b/in2,1kg/cm2或一大氣壓)滅菌15分鍾以上。


3
、培養皿:內徑50mm85mm,深度約為12mm14mm,內外麵應平坦,

      無氣泡,刮傷或其它缺點                            

4、吸管:通常使用者為10ml1ml,應有0.1 ml之刻度。 

5、培養箱:能維持內部溫差在±1℃以內者。

6、水浴:能維持水溫溫差在±1.℃以內者。


7
、薄膜過濾裝置:可放置薄膜過濾之漏鬥及真空固定支架基座,漏鬥應具無菌性

       或可滅菌性。


8
、濾膜孔徑0.45um化纖維過濾薄膜(水質檢驗用有格子,已滅菌)或同極品,

       適用於薄膜過濾裝置者。
 

培養基:

 1.KF鏈球菌洋菜培養基(KF Streptococcus agar              

蛋白(Proteose peptone 10g
酵母抽出物(Yeast extract 10g
氯化鈉(NaCl 5g
三偶氮鈉(Sodium azide NaN3 0.4g
甘油磷酸鈉(Sodiumglycerophosphate 10g
麥芽糖(Maltose 20g
乳糖(Lactose 1g
臭甲酚紫(Bromcresol purple 0.015g
洋菜(agar 20g
蒸餾水 1000ml 

秤取各成分(或適量之商業製品)溶於蒸餾水或去離子水中,

             加熱溶解洋菜,待完全溶解後,繼續加熱5分鍾,冷卻至50℃

             60℃,加1ml1%氯化三酚基雙偶氮(2,3,5-triphenylterazoliumchloride

             最後pH值為7.20.2,分裝於培養皿中。

 
2.
牛膽汁七葉靈洋菜培養基(Bile esculin agar          

牛肉抽出物(Beef extract 3g
蛋白(Peptone 5g
七葉靈(Esculin 1g
牛膽汁(Oxgall 40g
檸檬酸鐵(Ferric citrate 0.5g
洋菜(agar 15g
蒸餾水 1000ml            

       秤取各成分(或適量之商業製品)溶於蒸餾水中或去離子水中,

       加熱至沸騰並使完全溶解後,於121℃15分鍾,最後pH值為6.60.2

             分裝於培養皿中。

3.腦心浸出液(Brain-heart infusion,BHI 

牛腦浸出物(Calf brain infusion 200g
牛心浸出物(Beef heart infusion 250g
蛋白(Protepose Peptone 10g
葡萄糖(Dextrose 2g
氯化鈉(NaCl 5g
磷酸氫二鈉(Na2HPO4 2.5g
蒸餾水 1000ml            

 秤取各成分(或適量之商業製品)溶於蒸餾水或去離子水中,加熱使完全溶解後,分裝於試管中,於121℃15分鍾,最後值為7.40.2


試劑

1.30%過氧化氫試劑

2.革蘭氏染色液(Gram,s stain solution:

革蘭氏染色液組包括哈克氏結晶紫液(Hucker,s crystal violet),革蘭氏碘液,革蘭氏脫色劑及革蘭氏複染液(Safranin

取樣:用以滅菌之容器或無菌袋盛取水樣品,取檢體量為100ml,若汙染情形嚴重時,則可采10ml每一檢體至少做二重複。

過濾:以減壓過濾方式,將檢體過濾之孔徑為0.45 um 濾膜上。

培養:經第2.4節過濾後之薄膜,取出放置在置有KF鏈球菌洋菜培養基之培養皿上,倒置,放入培養箱,在35℃培養48小時。

計數:經培養後,觀察有否菌落生成,若有按紅或粉紅之菌落,是為典型菌落,挑選35個典型菌落進行確認試驗,照確認試驗所得之結果一確定之比例計算出糞便性鏈球菌之估計值,以CFU/100ml表示。

 

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