細菌內毒素檢查法檢測注射用鹽酸大觀黴素中細菌內毒素的研究

注射用鹽酸大觀黴素（Spectinmycin Hydrochliride for injection，SHI）又稱淋必治，臨床上主要用於淋球菌等感染，其內毒素檢測現行標準采用家兔熱原法（衛生部藥品標準1994年），操作費時，成本高。美國藥典^［1］采用細菌內毒素檢查法（簡稱內毒素法），國內尚未見報道采用此法。為此筆者考察了采用內毒素檢查法的可行性並與家兔法進行了比較，結果滿意，現報道如下。

1　實驗材料

　　鱟試劑TAL（湛江安度斯生物有限公司，經靈敏度複核合格）；細菌內毒素工作標準品（中國藥品生物製品檢定所，批號9603，規格60EU／支）；注射用鹽酸大觀黴素（普強蘇州製藥有限公司）；細菌內毒素檢查用水（簡稱水，湛江安度斯生物有限公司，內毒素含量＜0.0015 EU／ml）。

2　方法與結果

2.1　SHI細菌內毒素限值（L）的確定
　　SHI的熱原劑量（M）：M＝75 mg／ml、1ml／kg，致熱反應閾值（K）為5 EU／kg，則L＝K／M＝0.067 EU／mg或5.0 EU／ml（以75 mg／ml的溶液計）。
2.2　最大非抑製濃度測定
　　將SHI用水配製成75 mg／ml的溶液，再作10、20、40、80、160倍稀釋，得到樣品的濃度係列記為Sw；另製備一同樣濃度係列的樣品溶液，但在製備時加入內毒素，使每一濃度的樣品溶液中都含有0.25 EU／ml濃度的內毒素記此係列為SE。選用靈敏度λb為0.125 EU／ml的TAL，分別與SW和SE兩個係列反應，結果（見表1）。表明SHI在上述稀釋倍數時對內毒素檢查均無抑製作用。

表1　最大非抑製濃度測定 TAL（批號960811Bλ＝0.125 EU／ml）

2.3　SHI的幹擾試驗
　　取3批經熱原檢查合格的SHI，分別用水製成75 mg／ml的溶液後，再作40倍稀釋，用這些樣品液分別依法試驗^［2］，結果（見表2）。鱟試劑在水和SHI溶液中的靈敏度均在0.5λb～2λb範圍內，表明樣品無幹擾作用。

表2　幹擾試驗（λ＝0.125 EU／ml）

2.4　家兔法與內毒素法的比較：家兔法的劑量見2.1項下，內毒素法取家兔法項下的溶液用水按1∶40稀釋，用λ＝0.125 EU／ml的TAL進行試驗，共檢測27批，結果兩法全部合格，符合率100％。

3　討　論

3.1　美國藥典規定SHI的L值為0.09 EU／mg（是以SHI的淨含量計），本文求出的L值為0.067 EU／mg（是以SHI的重量計），經實際含量換算本文的L值為0.1 EU／mg，二者基本一致。
3.2　試驗表明，用內毒素法取代家兔熱原法檢測SHI細菌內毒素是可行的，且經濟、簡便、快速。

作者單位：江蘇省蘇州市藥品檢驗所

參考文獻
1　USP XXIII，1995∶1434
2　中華人民共和國藥典，二部附錄，1995；76

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