不同配方培養基對小刺猴頭子實體多糖含量的影響

【摘要】  目的：考察不同配方培養基對小刺猴頭子實體多糖含量的影響。方法：選擇木屑、玉米芯以及麥麩皮為主要原料組成3種不同配方。結果：以78%玉米芯為主的配方，小刺猴頭子實體多糖含量較高，不同配方之間多糖含量比較有顯著差異。結論：該結果為進一步的製劑開發提供了很好的理論依據。

【關鍵詞】  小刺猴頭 培養基 多糖 含量

　　小刺猴頭菌Hericium caput-medusae(Bull.expr)pers.係多孔菌目猴頭菌科真菌，具有與猴頭菌相類似的藥理作用及臨床功效［1-4］。目前已有以小刺猴頭發酵浸膏為原料治療慢性胃炎的製劑應用於臨床［5］。我們在以前研究的基礎上，對小刺猴頭子實體多糖在化學結構，藥理作用等方麵進行了係統的研究。結果表明：小刺猴頭子實體多糖可明顯抑製胃竇及胃體粘膜的萎縮變薄，增加胃蛋白酶消化活性，降低血清胃泌素含量。而對於小刺猴頭菌不同配方培養基對多糖含量的影響則未見報道。為使小刺猴頭子實體的栽培工作規範化以及質量可控，我們對此進行了研究分析，現報道如下：

　　1  材料與方法

　　1.1  供試菌種  小刺猴頭79001菌株由本所藥用真菌研究室提供，母種采用PDA培養基，原種用棉籽殼培養基，1200紫外分光光度計，試劑均為分析純。

　　1.2  培養基配方  試驗設3個培養基配方，各配方原料組成見表1,每個配方3次平行試驗，含量測定結果用均值±標準差表示，采用組間t檢驗判斷差異的顯著性，統計軟件SPSS11.0。

　　表1  不同培養基配方原料組成（略）

　　1.3  栽培方法  選新鮮、無黴、無蟲的培養基原料，按配方稱重，清水浸泡24h，瀝水後加輔料充分拌勻，使含水量為65%-70%，聚丙烯袋裝料，126℃滅菌1.5h，無菌操作接種，20-24℃下發菌，定期觀察菌絲生長及汙染情況，當菌絲體生長到袋料的1/2-2/3時，移入14-24℃的出菇間，常規管理出菇，子實體成熟後及時采收。

　　1.4  多糖含量測定  3.5二硝基水楊酸比色法［6］

　　1.4.1  對照品溶液的製備  精密稱取105℃幹燥至恒重的葡萄糖對照品適量，加水製成每ml含1mg的溶液。

　　1.4.2  標準曲線的製備  精密量取葡萄糖對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6ml，分別置於25ml量瓶中，加水補至2.0ml，分別精密加入3.5—二硝基水楊酸試液1.5ml混勻，以2ml蒸餾水和1.5ml 3.5-二硝基水楊酸混合試劑為空白，沸水浴5min,冷卻至室溫，再分別加入21.5ml蒸餾水，搖勻。於520nm波長處比色，經線性回歸得回歸方程：A=1.0200C-0.0740 (r=0.9999，n=3)。結果顯示含量在0.2mg-1.6mg範圍內線性關係良好。

　　1.4.3  供試品溶液的製備［7］  取1、2、3號配方小刺猴頭子實體幹燥粉末各10g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水100ml，加熱回流提取1h，離心，如此重複提取1次，離心液合並，濃縮後移至100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取4ml，加乙醇20ml，攪拌，離心，沉澱加水溶解，置50ml量瓶中，稀釋至刻度。

　1.4.4  精密度試驗  取對照品溶液，重複測定5次，RSD為0.15%。

　　1.4.5  穩定性試驗  取供試品溶液，間隔一定時間，在8h內測定5次，RSD為1.46%,表明供試品溶液在8h內穩定性良好。

　　1.4.6  重現性試驗  取同一批號小刺猴頭子實體5份，分別製備供試品溶液，測定吸光度，RSD為1.35%，表明樣品重現性良好。

　　1.4.7  加樣回收率試驗  取已知含量的樣品供試液3份，每份精密加入一定量的葡萄糖對照品，依法測定，結果見表2。

　　表2  加樣回收率測定（略）

　　1.5  測定方法

　　1.5.1  總糖的測定  精密吸取供試品溶液2ml置25ml量瓶中，加6N鹽酸8ml，置沸水浴中加熱30min，冷卻至室溫，加一滴酚酞指示劑，用20%氫氧化鈉中和至微紅色，加蒸餾水至刻度，搖勻、過濾。精密吸取1ml按標準曲線項下方法測定，根據測得的吸光度值，按回歸方程計算含量。

　　1.5.2  還原糖的測定  精密量取供試品溶液5ml置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得。精密量取1ml按標準曲線項下方法測定，根據回歸方程計算含量。多糖含量(%)按總糖含量(%)減去還原糖含量(%)計算。

　　2  結果與分析

　　2.1  多糖測定結果  不同配方培養基得到的小刺猴頭子實體多糖測定結果，見表3。

　　表3  不同配方培養基多糖測定結果（略）

　　注：與1號配方比較**P＜0.01；與3號配方比較△P＜0.05，△△P＜0.01。
    　　
　　以上結果表明，2號配方無論是從粗多糖重、多糖的百分含量以及多糖重方麵與1號和3號相比均差異顯著，因此選擇2號配方為小刺猴頭子實體栽培的基礎配方。此結論尚需在進一步的規模化生產中通過大樣本來加以驗證，以便為有關製劑的進一步開發打下良好基礎。

　　3  討論
    　　
　　以玉米芯為主料的培養基，小刺猴頭菌發菌快，菌絲潔白、粗壯、濃密，生長迅速，子實體形狀優良，生物轉化率高，更重要的是其有效成分多糖含量高。　　

　　玉米芯富含纖維素，為小刺猴頭菌提供了充足的碳源，且其持水性強，通氣性好，有利於菌絲生長，尤其是玉米芯質地較為疏鬆，更利於菌絲體分解、轉化和吸收。　　

　　玉米芯來源豐富，價格低廉，且此法可消耗大量農副產品，一舉多得。

【參考文獻】
  　　［1］李 悅,陳 岩.複方猴頭衝劑治療慢性胃炎114例療效分析［J］.山東醫藥,1994,34(9):62.

　　［2］楊振領.自擬益中清熱活血湯加猴頭菌片治療萎縮性胃炎54例［J］.南京中醫藥大學學報,1996,12(3):51.

　　［3］夏爾寧,樊邦耘,陳瓊華.猴頭多糖的提取分離,理化分析及生物活性的初步研究［J］.南京藥學院學報,1986,17(2):129.

　　［4］唐選訓.聯用黃連素、維酶素、猴菇菌治療慢性萎縮性胃炎37例療效觀察［J］.廣西醫學,1995,17(4):355.

　　［5］舒建國.胃樂新衝劑治療慢性胃炎200例療效觀察［J］.安徽醫科大學學報,1989,(4).

　　［6］張惟傑.糖複合物生化研究技術［M］.2版.杭州:浙江大學出版社,1999:10.

　　［7］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典［M］.北京:化學工業出版社,2005:57.

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