摘 要 進行了大扶康、大蒜素、大蒜油注射液抗深部真菌藥效學的研究，采用沙氏培養基倍比稀釋法觀察不同接菌量、不同培養時間對藥物最小抑菌濃度(MIC)、最小殺菌濃度(MBC)的影響.用1×105 cfu//mL的接菌量，測定了大扶康、大蒜素、大蒜油注射液對65株(臨床分離和標準菌株)深部真菌的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90.結果顯示大扶康對白色念珠菌、熱帶念珠菌和新型隱球菌有較好的抑製作用，而對其它真菌無抑製作用和殺滅作用.大蒜素、大蒜油注射液對所有真菌均有抑、殺作用，說明他們具有廣譜抑、殺真菌的作用特點.提示：臨床在不明確的嚴重真菌感染時，可聯合用藥.
Abstract A study on the pharmacodynetics of diflucan,allitridi,and the garlic oil injection against system fungi was carried out.The influence of fungi concentrations and incubation time on minimal inhibitory concentrations(MICs) and minimal bactericidal concentrations(MBCs)was observed by the double dilution method with sabourand agar.MICs and MBCs of them were determined by inoculation 1×105 cfu/mL for 65 species of fungi (clinic and standerd).Diflucan was effective in vitro against Candida albicans,Candida tropicalis and Cryptococcus neoformans while it was no use for other fungi.Allitridi and the garlic oil injection were effective against all these fungi in experiments.It was noted that when the severe infection was not definite it might increase the therapeutic effect with combination of the two drugs.
Key words Diflucan injection；allitridi injection;garlic oil injection;the minimal inhibitory concentration(MIC);the minimal bactericidal concentration(MBC)
近年來，隨著抗生素的不斷開發和廣泛應用，細菌耐藥性及院內感染不斷上升，真菌發病率大大增加.大扶康、大蒜素、大蒜油注射液是臨床普遍使用和受歡迎的抗真菌藥，但對深部真菌抑殺效果的廣譜性研究不多〔1〕，特別是對青黴菌、申克氏孢子絲菌等MIC、MBC的研究未見報道.本文就3種藥物對臨床可見6個屬的8種65株深部真菌的抑菌、殺菌作用進行了對比實驗.
1 實驗材料
1.1 菌種
白色念珠菌14珠、熱帶念株菌10珠、類星形念珠菌4株、新型隱球菌10株、青黴菌10株、毛黴菌4株、煙曲菌3株、申克氏孢子絲菌10株，由南京皮膚病研究所真菌室、沈陽軍區總醫院檢驗科提供.
1.2 藥物
大蒜素注射液、大蒜油注射液(沈陽軍區總醫院藥劑科)；大扶康注射液9008602(美國輝瑞公司).
1.3 培養基
沙氏瓊脂(SDA)培養基：1%蛋白腖、1%葡萄糖、2.2%瓊脂、0.5%氯化鈉、蒸餾水配製，調整pH為5.0～6.0，高壓滅菌後備用.
2 方法與結果
2.1 真菌接種量的確定
用沙氏瓊脂培養基將大蒜油注射液倍比稀釋為100 μg/mL至3.1 μg/mL 6個濃度，移入平皿中，從每屬中隨機選取1株，用生理鹽水以鏡檢計數方式配成1×107 cfu/mL、1×106 cfu/mL、1×105 cfu/mL、1×104 cfu/mL 4種濃度的菌懸液，分別接種於含不同藥物梯度的沙氏培養基中.另做不含藥物的培養基，接種菌懸液，作為生長菌的空白對照.於
2.2 體外培養時間-MIC曲線
將大蒜油注射液倍比稀釋為100 μg/mL至3.1 μg/mL 6個濃度，移入平皿和試管，從每屬中重新隨機選取1株，分別接種105 cfu/mL的菌懸液.同時做不含藥物的培養基接種菌懸液，作空白對照.於
體外培養時間-MIC曲線顯示：藥物的MIC，在溫度、接種量相同時，隨著培養時間的延長而增大並趨於穩定.為了得到穩定的MIC，熱帶念珠菌、毛黴菌、煙曲菌至少需培養4 d，新型隱球菌、青黴菌、申克氏孢子絲菌分別需培養5、6、7 d.
Tab.1 The influence of the fungi concentration on MIC(μg/mL)of the garilic oil injection
|
Species |
Fugni concentration/cfu．mL-1 | |||
|
1×107 |
1×106 |
1×105 |
1×104 | |
|
Candida albicans |
12.5 |
6.2 |
6.2 |
3.1 |
|
Cryptococcus neoforman |
50 |
25 |
12.5 |
6.2 |
|
Penicillium |
25 |
12.5 |
12.5 |
3.1 |
|
Mucor |
＞100 |
100 |
100 |
50 |
|
Aspergillus fumigatus |
100 |
50 |
25 |
25 |
|
Sporothrix schenckii |
25 |
12.5 |
6.2 |
3.1 |
2.3 沙氏瓊脂培養基法測定MIC
用沙氏瓊脂培養基以倍比稀釋法將大蒜素、大蒜油、大扶康分別配製成100 μg/mL至0.8 μg/mL的8個濃度的藥物梯度，移入平皿和試管中，用生理鹽水把各真菌菌株以鏡檢計數方式配成1×105 cfu/mL的菌懸液，熱帶念珠菌、新型隱球菌、申克氏孢子絲菌接種於平皿培養基中；青黴菌、毛黴菌接種於試管斜麵培養基中.另做不含藥物的培養基接種菌懸液，作空白對照.樣品於
Tab.2 The MICs(μg/mL) of allitridi,garlic oil and diflucan against pathogenic fungi
|
Species |
Allitridi |
Garilic oil |
Diflucan | ||||||
|
MIC ragen |
MIC50 |
MIC90 |
MIC ragen |
MIC50 |
MIC90 |
MIC ragen |
MIC50 |
MIC90 | |
|
Candida albicans(14) |
3.1～25 |
6.2 |
25 |
3.1～25 |
6.2 |
25 |
0.8～6.2 |
3.1 |
6.2 |
|
Candida tropicalis(10) |
6.2～25 |
12.5 |
25 |
25～50 |
25 |
50 |
25～50 |
25 |
50 |
|
Candida stellatoidea(4) |
25～100 |
/ |
/ |
25～100 |
/ |
/ |
100～＞100 |
/ |
/ |
|
Crytococcus neoformans(10) |
12.5～25 |
25 |
25 |
6.2～50 |
25 |
50 |
6.2～50 |
25 |
50 |
|
Penicillium(10) |
6.2～25 |
12.5 |
25 |
6.2～50 |
25 |
50 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Mucor(4) |
25～50 |
/ |
/ |
25～100 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Aspergillus fumigatus(3) |
25～100 |
/ |
/ |
25～50 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Sprothrix schenckii(10) |
6.2～25 |
25 |
25 |
3.1～25 |
25 |
25 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
2.4 沙氏瓊脂培養基法測定MBC
以倍比稀釋法將大蒜素、大蒜油、大扶康三種藥物分別稀釋為100 μg/mL至3.1 μg/mL 6個濃度，接種濃度為1×105 cfu/mL的菌懸液，同時做空白對照，置
|
Species |
Allitridi |
Garilic oil |
Diflucan | ||||||
|
MBC ragen |
MBC50 |
MBC90 |
MBC ragen |
MBC50 |
MBC90 |
MBC ragen |
MBC50 |
MBC90 | |
|
Candida albicans(14) |
12.5～50 |
25 |
25 |
12.5～50 |
25 |
50 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Candida tropicalis(10) |
25～100 |
25 |
100 |
25～100 |
50 |
100 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Candids stellatoidea(4) |
50～100 |
/ |
/ |
50～100 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Crytococcus neoformans(10) |
25～100 |
50 |
100 |
25～100 |
100 |
100 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Penicillium(10) |
25～100 |
50 |
100 |
6.2～100 |
50 |
100 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Mucor(4) |
50～＞100 |
/ |
/ |
50～＞100 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Aspergillus fumigatus(3) |
50～100 |
/ |
/ |
25～100 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Sporothrix schenckii(10) |
12.5～50 |
25 |
50 |
6.2～50 |
25 |
50 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
3 討論 藥物的MIC、MBC在培養溫度相同時，與接種菌懸液的濃度、培養時間有關，應選擇適當的接菌量和達到準確穩定的MIC、MBC觀察時間.
大扶康對白色念珠菌有較強的抑製作用，但對臨床分離的類星形念珠菌卻無作用，說明這種菌株對大扶康不敏感，對熱帶念珠菌、新型隱球菌也有較好的抑製作用〔2〕，對其他真菌無抑製作用，並且MBC＞100 μg/mL.大扶康是通過影響細胞P450固醇合成酶，破壞真菌細胞膜而抑製真菌的生長.大蒜素、大蒜油對真菌的作用機理雖尚不清楚，但對本試驗的65株深部真菌都有不同程度的抑製、殺滅作用，說明他們具有廣譜的抑真菌和殺真菌作用，為臨床使用大蒜素、大蒜油及製劑提供了依據.大蒜油含有多種有效成分，其中含量較高的為二烯丙基三硫化物( CH2CH —CH2—S—S—S—CH2— CHCH2 )〔5〕，即大蒜素.提示，臨床在不明確何種真菌的嚴重感染情況下，大扶康、大蒜素或大蒜油注射液合用，可發揮藥物的各自作用特點，得到較好療效.
作者：顏鳴 戴華
作者：沈陽軍區總醫院
參考文獻
1 唐整，李榮玲，王端禮，等.5-FC、二性黴素B、大蒜素、中藥對煙曲黴的抑菌試驗.中皮膚科雜誌，1986，19(6)：335～336
2 戴自英.實用抗菌藥物學.上海：上海科學技術出版社，1992.252～253
3 郎彝江，張光遠.大蒜有效成分的研究.中草藥，1981，12(1)：4～5
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