【摘要】 目的觀察白假絲酵母菌標準菌株（CCCMC1a、ATCC 14053）與臨床分離菌株（C1-1，C1-2，C1-3 ，C1-4）對小鼠與家兔的致病情況，並探討不同菌株對動物致病性與莢膜厚薄的關係。方法小鼠及健康成年家兔按上述菌株不同分為CCCMC1a，ATCC 14053， C1-1，C1-2， C1-3 ，C1-4共6組，每組小鼠20隻，家兔12隻；將實驗菌種沙保氏瓊脂36 h培養物用生理鹽水配成約含1×109個/ ml的菌懸液，家兔耳緣靜脈注射，1～1.5 ml /隻；對BALB/c小鼠腹腔注射，0.5 ml /隻，於注射後6 h開始密切觀察動物的反應，連續觀察7 d，記錄動物發病情況：發病天數、死亡天數及死亡動物數、動物死亡率、存活動物數等，比較不同菌株對動物的致病性。待實驗動物死亡後，分別取家兔腎組織印片及小鼠腹腔液塗片進行Hiss莢膜染色鏡檢，用顯微測微計測量莢膜層的厚度，各菌株隨機計數40個酵母細胞的莢膜層的厚度值，取各菌株莢膜層厚度的均值進行比較，並且與菌株的動物致病性相聯係，觀察是否具有一定的規律性。結果C1-2和C1-4相對於C1-1，C1-3，CCCMC1a，ATCC 14053來說，具有很強的動物致病性。標準菌株和臨床分離菌株在家兔及小白鼠體內均可形成莢膜，莢膜層的厚度可因不同菌株和不同動物體內形成而有顯著差異，P＜0.01或P＜0.05。結果顯示，兔腎感染灶的菌細胞較小鼠腹腔內菌細胞的莢膜明顯寬厚，C1-1，C1-2， C1-3 ，C1-4組的兔腎感染灶的菌細胞及鼠腹腔內菌細胞的莢膜比CCCMC1a，ATCC 14053明顯寬厚，其中對動物高致病性的C1-2和 C1-4的兔腎感染灶的菌細胞及鼠腹腔內菌細胞的莢膜最為寬厚。結論C1-2和C1-4具有很強的動物致病性，它們的莢膜與其它菌株相比較也更寬厚。莢膜可能是白假絲酵母菌的毒力因子，莢膜的寬厚與動物的致病性有著密切的聯係。
【關鍵詞】 白假絲酵母菌 標準菌株 臨床菌株 致病性 莢膜
Abstract:ObjectiveTo observe the pathogenicity of the standard strain(CCCMCIa ATCC14053)and the clinical isolation strain (C1-1 C1-2 C1-3 C1-4)of candida albicans in mice and rabbits, and to study the relatiorship between it and the thickness of the capsule.Methods120 BALB/c mice and 72 rabbits were divided equally into six groups. The strains smeared on sabourand ager medium for 36h were diluted into the bacterial solution of 1×109/ml by physiological saline.1ml-1.5ml of this solution was injected in a rabbit's verge vein of ear,and 0.5ml in a mouse abdominal cavity. The animals were observed and recorded for 7d. After the episoded, the animals were dissected and the thickness of capsule was observed by Hiss capsule stain, and surveyed by microscopic surveying instrument. The thickness of a speciman's average capsule defined by the average thickness of 40 sacccharomycetic cell was compared with the others. ResultsCompared with C1-1，C1-3，CCCMC1a，ATCC 14053，C1-2 and C1-4 had strong pathogenicity to animals. Capsular structure's distinct borderline could be seen in the yeast-like cells on the smear from the the standard strain and the clinical isolation strain, infected mouse and rabbit tissues (P<0.01 or P<0.05) . But the formation of the capsule was apparently related to animals and the strain specimen. Results showed that the thickness of the capsule in rabbit was larger than that in mouse.The thickness of the capsule in rabbits and in mouse of C1-1，C1-2，C1-3 ，C1-4 were larger than that of CCCMC1a, ATCC 14053. C1-2 and C1-4 which had high pathogenicity had the largest capsule.ConclusionThe pathogenicity of candida albicans is related to the thickness of the capsule.
Key words:Candida albicans; Standard strain; Clinical isolation strain ; Pathogenicity ; Capsule
白假絲酵母菌S. albicans，俗稱白色念珠菌Candida albicans，是假絲酵母菌屬（Saccharomyces）中最常見的病原菌。新近報告臨床標本中分離的真菌以白色念珠菌為主,占45.3%［1］。真菌感染在化療相關性腹瀉中占重要地位［2］，也為AIDS病人並發感染的常見致病菌［3］。過去認為其不具有莢膜［4］。馬廉蘭等［5，6］從女性性病患者的陰道分泌物中分離到多株菌株具有莢膜結構。有關白假絲酵母菌的致病因素，現認為白假絲酵母菌的芽管及形成的假菌絲是其重要的致病物質［7，8］。莢膜與該菌的毒力是否有關未見報道，本文就白假絲酵母菌不同菌株對動物的致病性及與莢膜的關係作初步的探討。
1 材料與方法
設計：以實驗動物為觀察對象的對照實驗。
單位：一所醫學院的病原生物學教研室。
1.1 材料
由中科院真菌菌種保藏中心(南京)提供中央標準菌株（菌號CCCMC1a）；由北大醫院真菌菌種保藏中心 (北京)提供國際標準菌株（菌號 ATCC 14053）；由馬廉蘭課題組從性病門診病人陰道分泌物中分離培養4株臨床菌株，參照 “深部感染真菌及其檢驗方法”［9］進行鑒定，作出芽試驗、玉米瓊脂培養、糖發酵試驗等初步鑒定，並經中科院真菌菌種保藏中心（南京）鑒定為白假絲酵母菌，暫行自編菌號為：C1-1，C1-2，C1-3 ，C1-4。由中山大學動物實驗中心提供BALB/c小鼠120隻，雌雄各半，18～22 g，平均(20.0±1.2) g。由贛南醫學院動物實驗中心提供健康成年家兔72隻，2～2.5 kg，平均（2.3±0.25）kg。按上述菌株不同將實驗動物隨機分為6組：CCCMC1a，ATCC 14053， C1-1，C1-2，C1-3 ，C1-4共6組，每組小鼠20隻，家兔12隻。
1.2 方法
將實驗菌種沙保氏瓊脂36 h培養物用生理鹽水配成約含1×109個/ ml的菌懸液，家兔耳緣靜脈注射，1 ml/隻，同時用BALB/c小鼠腹腔注射，0.5 ml/隻；於注射後6 h開始密切觀察動物的反應，連續觀察7 d，記錄動物發病情況：發病天數、死亡天數及死亡動物數、動物死亡率、存活動物數等。莢膜觀察：待實驗動物死亡後，分別取家兔腎組織印片及小鼠腹腔液塗片進行Hiss莢膜染色鏡檢，用顯微測微計測量莢膜層的厚度，各菌株隨機計數40個酵母細胞的莢膜層的厚度值，取各菌株莢膜層厚度的均值進行比較。
2 結果
C1-2和C1-4相對於C1-1，C1-3，CCCMC1a，ATCC 14053來說，發病天數和死亡天數短，動物死亡率高，具有很強的動物致病性（見表1）。四株臨床分離菌株在家兔及小白鼠體內均可形成莢膜，但莢膜層的厚度可因不同動物體內形成而有顯著差異（P＜0.01或P＜0.05）。兔腎感染灶的菌細胞較小鼠腹腔內菌細胞的莢膜明顯寬厚，C1-1，C1-2， C1-3，C1-4組的兔腎感染灶的菌細胞及鼠腹腔內菌細胞的莢膜比CCCMC1a，ATCC 14053明顯寬厚，其中對動物高致病性的C1-2，C1-4的兔鼠菌細胞的莢膜最為寬厚。結果見表2。表1 注射後7 d內動物發病情況（略）表2 實驗菌在家兔與小鼠體內莢膜厚度的比較（略）
3 討論
某些細菌及真菌具有莢膜，因莢膜可抵抗吞噬細胞的吞噬作用，因此具有莢膜的菌一般毒力較強。馬廉蘭等［5］從女性性病患者的陰道分泌物中分離到多株白假絲酵母菌菌株具有莢膜結構。該菌株莢膜是否與該菌的假菌絲一樣也與毒力有關，是否莢膜越厚毒力越強，本次白假絲酵母菌的動物致病性實驗結果與莢膜觀察結果初步驗證了這一規律。
不同菌株對動物的致病性不同，這與很多因素有關，本文僅就與莢膜的厚度關係進行分析。在對動物的致病性實驗中，C1-2組和C1-4組的動物發病天數和死亡天數短，動物死亡數多，因此C1-2和C1-4菌株對動物的致病性相對於C1-1，C1-3，CCCMC1a，ATCC 14053菌株來說比較強，而在其後的菌液塗片莢膜觀察中，發現對比C1-1，C1-3，CCCMC1a，ATCC 14053菌株的莢膜厚度，C1-2和C1-4菌株的莢膜最為寬厚。這一結果提示，莢膜是該臨床分離菌株的毒力成分，莢膜越厚的菌，毒力越強。關於這一規律還需作進一步的探討。
作者：王小麗，馬廉蘭，劉誌春，鍾有添，謝水祥，曹鎬祿《時珍國醫國藥》
【參考文獻】
［1］許曉文.院內150例真菌感染及耐藥性分析［J］.中國微生態學雜誌，2005，17（2）：141.
［2］薑之馨， 邱立華，王華慶，等.去甲萬古黴素改善化療相關性腹瀉患者生活質量的作用［J］.中國臨床康複，2003，7（29）：3986.
［3］錢利生.人類免疫缺陷病毒［A］.周正任，醫學微生物學，第6版［M］.北京：人民衛生出版社, 2003： 323.
［4］譚世熹. 白色念珠菌的鑒定［A］. 上海市立醫學化驗所.實用臨床檢驗［M］.上海：上海科學技術出版社, 1965：689.
［5］馬廉蘭，鍾有添，曾祥鳳,等.臨床分離一株具有莢膜的白假絲酵母菌［J］.中山大學學報（醫學科學版）2005，26（4）：封2.
［6］馬廉蘭，謝水祥，曾祥鳳.4株具有莢膜的白假絲酵母菌的分離與鑒定［J］.微生物學通報,2006,33(4)：27
［7］Rodrigues A G, Mardli P A, Pina-Vaz C, et al. Infect Dis Obstet Gynecol［J］.1999, 7(5)：222.
［8］Lanco M T, Blanco J, Sanchez-Benito R, et al. Microbiol［J］.1997, 89(358)：23.
［9］呂乃群.深部感染真菌及其檢驗方法［A］.李影林.中華醫學檢驗全書，下卷，第1版［M］.北京：人民衛生出版社，1996：1995.
上一篇：臨床分離鑒定435株念珠菌及藥敏結果分析
下一篇：血清芽管實驗檢測白假絲酵母菌的藥物敏感性
