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臨床酵母樣真菌快速鑒定及藥敏實驗方法的研究



錄入時間:2010-12-15 9:30:09 來源:中國論文下載中心

 

 [摘  要] 目的:建立一種臨床酵母樣真菌快速鑒定和藥敏試驗方法。方法:采用珠海麗拓公司生產的真菌分離鑒定檢測試劑盒,對臨床感染真菌標本和酵母樣真菌標準菌株進行鑒定,並與法國梅裏埃真菌鑒定係統進行對照。結果:6株酵母樣真菌標準菌株鑒定符合率為100%,115株臨床標本兩種試劑鑒定符合率為92.55%,藥敏結果顯示臨床標本對咪唑類抗真菌藥物出現較高的耐藥性,值得臨床重視。結論:本研究所采用方法操作簡便,特異性較好,便於臨床酵母樣真菌標本的常規鑒定。

    [關鍵詞] 酵母樣真菌;快速鑒定;藥敏試驗

    在臨床上,由於廣泛使用抗生素、免疫抑製藥物及開展移植手術等因素,致使真菌感染越來越多。而各種抗真菌藥物的濫用,更加劇了真菌感染的複發和增加了治療的難度。近年來的研究發現造成真菌感染的大部分是酵母樣真菌。因此,對臨床上建立快速酵母樣真菌分離培養、鑒定和藥敏試驗顯得尤為重要[1]。目前,臨床真菌分離培養、鑒定和藥敏試驗大多分開進行,要花較多的時間和人力物力,影響臨床診斷。為此,筆者對酵母樣真菌的快速分離培養、鑒定和藥敏試驗同時進行的方法學進行了探討研究,報告如下。

    1  材料與方法

    1.1  材料

    1.1.1  真菌標準菌株  6株分別是:白色念珠菌1株(編號為CMIDC.1c),熱帶念珠菌1株(編號為CMIDC.2a),光滑念珠菌1株(編號為CMIDY.10),克柔念珠菌1株(編號為CMIDY.6c),季爾蒙念珠菌(編號為CMIDC.5b),新生隱球菌(編號為CMIDD.2b),購自中國醫學科學院皮膚病研究所(南京)。

    1.1.2  臨床標本  20032月至20052月,在本院門診和住院病人中采集。

    1.1.3  對照用API20C鑒定係統  采用法國生物梅裏埃產品。

    1.1.4  真菌分離、鑒定檢測試劑盒,購自珠海市麗拓發展有限公司。

    1.2  方法

    1.2.1  標準菌株製備  在無菌條件下從真菌標準菌株保存斜麵中,用巴氏接種環接種到改良的沙氏瓊脂平板上,30 培養24 h~48 h,再轉種活化一代備用。

    1.2.2  臨床標本的準備  把標本先接種到改良的沙氏瓊脂培養基中,30 培養24 h~48 h,再轉接活化一代後備用。

    1.2.3  菌型鑒定  從製備好的標準菌株和臨床標本分離平板中,分別挑取1~3個直徑大於1 mm擬似菌落,加入到鑒定培養基中,混勻。分別取150 μl加入到檢測板的A2~A5B1~B5鑒別微孔中。

1.2.4  藥敏試驗  從混有菌落的鑒定培養基中取100 μl菌懸液,加入到藥敏培養基中,混勻後分別取150 μl加入到檢測板的A6~A12B6~B12微孔中。

    1.2.5  結果判斷  將檢測板放入濕盒中,30 培養20 h~24 h,B1孔出現明顯渾濁時,各微孔加入顯色液1滴(B5孔除外),繼續培養2 h~4 h觀察結果,結果判讀參照說明書。

    1.2.6  API20C操作按說明書進行。

    2  結果

    2.1  標準菌株鑒定結果  兩種試劑對6株標準菌株檢測完全一致,見表1

    酵母樣真菌標準菌株的鑒定結果菌株(略)

    3  討論

該實驗方法集真菌藥敏和鑒定於一體,較傳統的藥敏和鑒定方法節省時間在24 h以上,有利於臨床早期判斷,早期治療的原則。本研究發現在真菌藥敏和鑒定中,標準菌株及臨床標本分離株的活化和接種量對結果有一定的影響。菌株活化以二代左右為宜,以便獲得生長力旺盛的純菌落,同時發現鑒定實驗的接種量在104 cfu/ml~105 cfu/ml為宜。藥敏試驗接種量應控製在103 cfu/ml左右,過高、過低接種量都不利於結果判斷。在藥敏試驗中發現臨床感染真菌對咪唑類抗生素出現較多的耐藥性[2],提示與近期臨床上大量使用該類抗生素而引起耐藥菌株增加有關,值得臨床注意。近年來,真菌感染特別是酵母類真菌感染明顯增加。隨著抗真菌藥物數量的增多和耐藥真菌的出現,臨床上迫切需要對真菌進行鑒定和藥敏實驗[2]。在國內現有產品中,還沒有把真菌鑒定和藥敏試驗在一個檢測板上,同時進行快速檢測試劑盒,本實驗采用試劑是利用真菌的特殊生化反應和酶反應,用活細胞線粒體酶特征顯色劑,對真菌進行快速鑒定和藥敏試驗,改變了過去通過觀察濁度來判斷結果的方法,顯色反應鮮明,操作簡便,判斷準確,是一種比較先進的技術方法,值得推廣[4]。

作者:肖晉《實用醫技雜誌》

    參考文獻:

1  王文莉,鄭瑋清,李若瑜,等.采用NCCLS M27A方案微量法檢測念珠菌對抗真菌藥物的敏感性[J.中國檢驗醫學雜誌,2001242):107108.   
   
2  王慧.243株真菌感染菌株的耐藥性分析[J.山東醫藥,20041820):5051.   

3  劉先寧.眼部常見酵母樣菌的快速鑒別及藥敏實驗方法的建立[J.現代檢驗醫學雜誌,2003182):3435.

4  Tellier R, Krajden M, Grlgorie WGA, et al.Innovative endpoint determination system for antifungal susceptibility testing of yeastsJ. Antimicrob Agents Chemother, 1992, 36(8):16191625.

 

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