【摘要】 目的探討金銀花水提物對雙歧杆菌、乳酸杆菌體外生長的作用。方法製備金銀花水提物濃度為50%，25%，12.5%，6.25%，3.125%，2%，1.0625%的BL肉湯和MRS液體培養基；取兩歧雙歧杆菌Bif1101和保加利亞乳酸杆菌標準株懸液在藥物培養液中生長後接種到平板，作平板菌落計數；不同培養時間點測定稀釋10倍後含不同濃度金銀花水提物的細菌培養液和對照組細菌培養液的吸光度（A）值，計算各培養基吸光度增加值（D A）；測定細菌培養液20，24 h 時的pH值。結果當金銀花水提物濃度＜6.25％時，則顯著高於對照組；金銀花水提物濃度＞6.25%，則顯著低於對照組；乳酸杆菌培養液和雙歧杆菌培養液20，24 h的D A分別在金銀花水提物濃度≤6.25%和≤3.125%時高於對照組；金銀花水提物濃度＜6.25%時，則pH值顯著低於對照組；而金銀花水提物濃度＞6.25%時則相反。結論低濃度金銀花水提物可以促進雙歧杆菌、乳酸杆菌在體外的生長。高濃度金銀花水提物則抑製雙歧杆菌、乳酸杆菌在體外的生長。
【關鍵詞】 金銀花； 雙歧杆菌； 乳酸杆菌； 雙歧因子； 益生菌
雙歧杆菌和乳酸杆菌是胃腸道正常微生物區係中的重要有益菌並與宿主終生伴隨，發揮營養、免疫調節、生物屏障、維持腸道菌群平衡等重要作用［1］。臨床上發現應用雙歧杆菌、乳酸杆菌可以調節機體免疫、輔助治療或預防嚴重感染、多種胃腸道炎症、過敏性疾病［2，3］。而現代藥理學的研究發現［4，5］許多中藥和植物含有促進雙歧杆菌、乳酸杆菌生長的成分。現代微生態學研究表明［6］含有多糖類的中藥多具有雙歧因子(bifidus factor, BF)作用，可促進雙歧杆菌、乳酸杆菌的生長。金銀花性寒味甘，其水溶劑提取物含有葡萄糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖等多糖類物質［7］。本實驗對金銀花水提物在體外對雙歧杆菌、乳酸杆菌生長作用進行了研究。
1 材料
1.1 藥物來源金銀花購自貴州省中藥材公司，經重慶醫科大學藥學係生藥教研室鑒定為黃褐毛忍冬。取生藥
1.2 菌種來源兩歧雙歧杆菌Bif1101 (Bifidobacterium bifium)、保加利亞乳酸杆菌(Lactobacillus bulgraticus)由重慶醫科大學檢驗係臨床微生物學教研室提供。
1.3 培養基BS培養基、 LBS培養基、 BL肉湯培養基和 MRS液體培養基均自製。
2 方法
2.1 藥物液體培養基的製備將BL肉湯和MRS液體培養液稀釋為金銀花水提物濃度為50%，25%，12.5%，6.25%，3.125%，2%，1.062 5%的藥物液體培養基。將不同濃度金銀花水提物BL肉湯和MRS培養液的pH值分別調至7.22，6.25，5 ml/管分裝，每一濃度12管。同時以5 ml/管無金銀花水提物的BL肉湯和MRS液體培養液各12管（ pH值分別調至7.22，6.25）作為對照組。
2.2 菌液的製備兩歧雙歧杆菌Bif1101和保加利亞乳酸杆菌經庖肉基複活後，各取一定的純菌液分別接種於5 ml BL 肉湯和5 ml MRS液體培養基中，
2.3 指標
2.4 統計學處理采用SAS 8.1統計分析軟件包。實驗結果以±s表示，各組樣本間數據方差齊性，采用單因素方差分析。以P<0.05判定有無顯著性差別。
3 結果
3.1 雙歧杆菌、乳酸杆菌平板菌落計數金銀花水提物濃度為6.25%，雙歧杆菌、乳酸杆菌菌落計數與對照組無顯著差別；金銀花水提物濃度＞6.25%，雙歧杆菌、乳酸杆菌菌落計數降低；金銀花水提物濃度＜6.25%，雙歧杆菌、乳酸杆菌菌落計數增加。見表1。表1 各組雙歧杆菌、乳酸杆菌的平板菌落計數比較(略)
3.2 雙歧杆菌、乳酸杆菌E值當金銀花水提物濃度≤6.25%，乳酸杆菌組E＞0；當金銀花水提物濃度＞6.25%，乳酸杆菌組E＜0。當金銀花水提物濃度≤3.125%，雙歧杆菌組E＞0；當金銀花水提物濃度＞3.125%，雙歧杆菌組E＜0。見圖1～2和表2。表2 各組雙歧杆菌、乳酸杆菌20，24 h 的E值比較（略）
3.3 雙歧杆菌、乳酸杆菌pH值金銀花水提物濃度為6.25%，雙歧杆菌、乳酸杆菌培養液20，24 h的pH值與對照組間無顯著差別；金銀花水提物濃度＜6.25%，雙歧杆菌、乳酸杆菌培養液20 ，24 h的pH值顯著降低；金銀花水提物濃度＞6.25%，雙歧杆菌、乳酸杆菌20，24 h 的pH值顯著增加。見圖3～4和表3。表3 各組雙歧杆菌、乳酸杆菌20，24 h 的pH值比較(略)
4 討論
乳酸杆菌和雙歧杆菌是人體內最多、最常見的生理性細菌，發揮營養、生物屏障、免疫調節和免疫增強、維持腸道微生態平衡、抗腫瘤和輻射、抗衰老、降低血液膽固醇、減輕肝髒負荷等［1，2，9，10］多種生理效應。雙歧杆菌［11］對營養要求較高，以葡萄糖等單糖和一些低聚糖等有機碳源作為碳源和能量，最適宜的氮源是蛋白質水解產物如蛋白腖、肽類和氨基酸等。雙歧杆菌生長需要鐵、磷、硫、鈉、鉀、鈣、鎂、錳、鋅等礦物元素和一些輔助生長因子，如維生素、嘌呤、嘧啶及其衍生物、雙歧因子等。乳酸杆菌營養要求嚴格，除了碳水化合物，還需要多種氨基酸、維生素、肽類等。許多研究發現不少傳統中藥可以作為雙歧因子促進雙歧杆菌、乳酸杆菌增殖的作用［5，6］。
本文結果提示金銀花水提物對雙歧杆菌、乳酸杆菌的作用有非常明顯的濃度效應現象,即當金銀花水提物濃度＞6.25%時，表現對雙歧杆菌、乳酸杆菌體外生長抑製，且抑製作用隨濃度增加有增強的趨勢；當金銀花水提物濃度＜6.25%時，表現為促進雙歧杆菌、乳酸杆菌體外生長,且其增殖作用隨濃度增加有所增強的趨勢。推測在金銀花水提物濃度＜6.25%時，金銀花含有葡萄糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖等多糖類物質［7］，遊離氨基酸和多種微量元素等［12，13］成分可以促進雙歧杆菌、乳酸杆菌生長。盡管金銀花水提物濃度低，但可溶性糖含量較高。有研究顯示金銀花含量總糖［14］可以達26.87%,其中可溶性糖含量高到23.65%，故低濃度可以促進雙歧杆菌、乳酸杆菌的增殖。雖然金銀花也含有綠原酸等［14］抑菌成分，但是抑菌成分難以直接溶於水溶液中，如綠原酸在水中的溶解度為4%，故金銀花水提物濃度＜6.25%時抑菌成分含量較低時，不能對細菌生長起顯著的作用。然而金銀花水提物濃度＞6.25%時，金銀花水提物中的抑菌成分含量足夠使其抑菌成分對雙歧杆菌、乳酸杆菌體外生長起主要作用，且抑菌成分含量隨濃度增加而升高,這與金銀花還含有綠原酸、異綠原酸、木犀草素等［14，15］ 抑菌成分有關。金銀花中綠原酸的含量［15］ 為4.29～6.07%，是主要的抑菌成分。平板菌落計數法和測定pH值法的結果均提示6.25%濃度金銀花對雙歧杆菌、乳酸杆菌生長的增殖和抑製作用均不明顯，這可能由於6.25%濃度金銀花的增殖或抑菌作用相互抵消，其表現出增殖或抑菌作用不顯著；然而測定OD值法的結果顯示6.25%濃度金銀花對雙歧杆菌生長的有抑製作用，對乳酸杆菌有增殖作用。A值小數點後第3位數的變化完全可能是儀器的輕微變化所致，故6.25%這一濃度實際也可以認為是一轉折濃度，與其他實驗結果基本一致。
本研究顯示金銀花水提物對雙歧杆菌、乳酸杆菌有濃度效應，低濃度促進增殖，且毒副作用小，將可能在一定程度上解決抗生素帶來的副作用，並在防病治病、調節免疫、平衡腸道菌群等方麵發揮一定作用。
作者：冉域辰，黎海芪，劉明芳《時珍國醫國藥》
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