【摘要】 目的:驗證一種羅紅黴素片微生物限度檢查的方法。方法:采用薄膜過濾法檢驗,采用《中國藥典》2005年版收載的方法進行驗證。結果:五種菌株的回收率均高於70%,且控製菌檢查具有專屬性。結論:采用薄膜過濾法檢查羅紅黴素片微生物限度可行。
[關鍵詞] 羅紅黴素片;微生物限度檢查;薄膜過濾法
[Abstract] Objective: To establish a microbial limit test method for Roxithromycin Tablets. Methods:Filtration and verification method of Chinese Pharmacopoeia 2005 were used.Results: The recoveries were more than 70% and the quality of control germ check was credible. Conclusion: Membrane-filter can be used in microbial limit test for Roxithromycin Tablets.
[Key words] Roxithromycin Tablets; Microbial limit test; Membrane-filter
羅紅黴素有殺菌作用,對微生物生長有幹擾,按常規方法測定其微生物限度無法確保結果的準確性,方法學驗證是保證結果準確的唯一途徑。
1儀器與材料
1.1 儀器
開放式薄膜過濾器(孔徑0.45 μrn,濾膜直徑50 mm),恒溫培養箱、培養皿,抽濾泵。
1.2 樣品
羅紅黴素片(麗珠製藥廠,批號:070301、070501;沈陽管城製藥有限公司,批號:20061101)。
1.3 培養基
營養瓊脂培養基,玫瑰紅鈉瓊脂培養基,膽鹽乳糖增菌液,4-甲基傘形酮葡糖苷酸(MUG)培養基,均購自中國藥品生物製品檢定所。
1.4 稀釋液及衝洗液
pH為7.0的無菌氯化鈉-蛋白腖緩衝液。
1.5 菌種
大腸埃希菌,枯草芽孢杆菌,金黃色葡萄球菌,白色念珠菌,黑曲黴菌,均購自中國藥品生物製品檢定所。
2 方法與結果
2.1 方法
2.1.1 供試液製備 稱取樣品10 g,研細,加稀釋液至100 ml,製成 1∶10供試液。
2.1.2 菌液製備大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲黴菌液均按《中國藥典》2005年版二部方法製備,濃度為50~100 cfu/ml[1]。
2.1.3 細菌總數、黴菌及酵母菌總數檢查方法的驗證
2.1.3.1 試驗組 取供試液1 ml,加入裝有50 ml稀釋液的濾器中,經薄膜過濾後,衝洗3次,每次100 ml,然後加入含有1 ml菌液的衝洗液100 ml,抽濾,取膜,將濾膜正貼於培養基平板,平行製備2個平皿。按《中國藥典》2005年版菌落計數方法計數。
2.1.3.2 菌液組 測定所加的試驗菌數。除不加供試液外,操作同試驗組。
2.1.3.3供試品對照組測定供試品本底菌數。除不加菌液外,操作同試驗組。
2.1.3.4 稀釋液對照組測定稀釋液是否幹擾微生物生長。取稀釋液 l ml,其餘同試驗組。
2.1.4 控製菌檢查方法的驗證
2.1.4.1試驗組取供試液的上清液10 ml,置於有100 ml稀釋液的薄膜過濾器內,過濾、衝洗3次,每次100 ml,最後1次加入10~100 cfu/ml大腸埃希菌菌液1 ml,抽濾,取出濾膜加入到100 ml膽鹽乳糖增菌液中,37℃恒溫培養 l8~24 h後作 MUG試驗及靛基質試驗。
2.1.4.2 陰性菌對照組方法同試驗組,加入10~100 cfu/ml金黃色葡萄球菌菌液l ml代替大腸埃希菌。同時作稀釋液和培養基陰性對照。
2.2 結果
2.2.1 細菌總數、黴菌及酵母菌總數檢查方法驗證 5種菌株的回收率均高於 70%(表 1),符合驗證規定。稀釋劑對照組的回收率(%) =(稀釋劑對照組平均菌落數/菌液組平均菌落數)×100%;試驗組的回收率(%) =[(試驗組平均菌落數-供試品對照組平均菌落數)/菌液組平均菌落數]×100%。
2.2.2 控製菌檢查方法驗證試驗組陽性菌對照檢出大腸埃希菌,陰性菌對照未檢出大腸埃希菌(表2),說明本法可檢出大腸埃希菌,具有專屬性,符合驗證規定。
3 討論
薄膜過濾使微生物充分被濾膜截留,再用適量無幹擾的衝洗液洗去供試樣品的幹擾,就能準確地進行樣品的微生物限度檢查。衝洗液的用量是關鍵,如過量衝洗,會使菌體受損、不利於生長,從而影響回收率,還會使濾膜受損、孔徑改變,影響實驗結果。反之,如衝洗不充分,樣品抗菌作用就不能徹底消除,也無法保證實驗結果的準確性。
作者：趙金英 樊麗《中國醫藥導報》
[參考文獻]
[1]中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典[S].二部.北京:化學工業出版社,2005.附錄93
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