【摘要】 目的： 探討雙歧杆菌、赤靈芝孢子及其聯合製劑對小鼠胃腸菌群失調的預防作用，為臨床用藥提供實驗依據。方法：用不同劑量雙歧杆菌、靈芝孢子粉及其聯合製劑灌胃7 d，然後林可黴素連續灌胃7 d，計數直腸成型糞便菌落。結果： （1）各預防組需氧及厭氧菌落數均明顯高於菌群失調組（P< 0.01）；（2）雙歧高劑量組需氧菌落數較正常對照組差異無顯著性（P＞0.05）；（3）靈芝孢子高劑量組厭氧菌落數較正常對照組差異無顯著性（P＞0.05）；中、低劑量組需氧菌落數較正常對照組差異無顯著性（P＞0.05）；（4）聯合製劑高劑量組厭氧菌落數較正常對照組差異無顯著性（P＞0.05）。結論： 雙歧杆菌、赤靈芝孢子、聯合製劑有一定預防菌群失調作用。
【關鍵詞】 胃腸疾病； 細菌，厭氧； 靈芝； 小鼠； 腸道菌群失調； 雙歧杆菌； 靈芝孢子
［Abstract］ Objective: To investigate the preventive effects of bifidobacterium, Ganoderma lucidium spore and their combination in alteration of intestinal flora of mouse. Methods: Mice were given orally with bifidobacterium, Ganoderma spore or combination of the both for 7 days. Then, intragastric administration was carried out with lincomycin to the mice for other 7 days. The microbe colonies obtained from the rectum shaped stool were counted. Result：1. Colony numbers of aerobian and anaerobian in experimental groups were bigger than those in intestinal flora disorder group （P<0.01）; 2. Aerobian colony numbers in high dosage bifidobacterium group did not differ from that of control group（P>0.05）; 3. Anaerobian colony number in high dosage of G.lucidium spore group did not differ from that of control group（P>0.05）; Aerobian colony numbers in middle and low dosage of G.lucidium spore groups did not differ from that of control group（P>0.05）; 4. Anaerobian colony number in high dosage of combination group did not differ from that of control group（P>0.05）.Conclusion: bifidobacterium,G. lucidium spore and their combination have preventive effects on alteration of intestinal flora in mouse.
［Key words］ gastrointestinal diseases; bacteria,anaerobic; ganoderma lucidum; mice; alteration of intestinal flora; bifidobacterium; Ganoderma spore
腸道菌群是由種類繁多的大量微生物組成的複雜的生態係統，與宿主的生長、發育、物質代謝和衰老等有密切關係。目前，臨床上有許多因素可以導致菌群失調，抗生素的不合理使用就是其中之一。長期大量使用廣譜抗生素不僅能抑製或殺死致病菌，而且也能作用於對抗生素敏感的正常菌群［1,2］。目前，微生態製劑在預防治療急慢性感染性腹瀉、抗生素相關性腹瀉、腸易激綜合征、根除幽門螺旋杆菌輔助治療等療效較為肯定［3］。2006年8月～ 2007年6月對雙歧杆菌、靈芝孢子及聯合製劑預防菌群失調作用效果進行了研究，報告如下。
1 材料與方法
1.1 主要試劑全破壁純赤靈芝孢子膠囊
1.2 實驗動物昆明種清潔級小白鼠，體重（20±2）g，由貴州省實驗動物中心提供。
1.3 實驗設備恒溫培養溫箱，厭氧箱，超淨工作台,營養肉湯培養基，MRS培養基。
1.４ 方法
取昆明種清潔級小鼠110隻，隨機分為靈芝預防高、中、低劑量組；雙歧預防高、中、低劑量組；聯合預防高、中、低劑量組及正常對照組、菌群失調組。每組10隻，雌雄各半。藥物處理及給藥：靈芝預防組給予靈芝孢子粉，用無菌蒸餾水溶解幹粉後灌胃，高、中、低劑量組分別為2.5、1.25、0
頸椎脫臼處死小鼠，無菌試管提前稱重並編好序號。取直腸成型糞便3份,置無菌試管內封口、稱重（總重量減空試管重量即糞便重量）後,每管按10 %稀釋度加入適量NS充分混勻,10-1～10-9連續10倍倍比稀釋,每稀釋度取0.01 ml,依次接種於MRS培養基及肉湯培養基表麵，MRS培養基置於厭氧培養箱培養。按細菌活菌計數方法選擇10-5、10-6、10-7有氧培養平板,10-6、10-7、10-8厭氧培養平板計數［4］。
1.5 統計學處理
菌落記數結果取lg對數,以x ±s表示。數據分析采用SPSS11.1統計軟件包，配對t檢驗。
2 結果
2.1 菌群定量分析結果
正常菌群組與菌群失調組菌群定量分析結果見表1。由表１可以看出經鹽酸林可黴素灌胃7 d後，菌群失調組需氧及厭氧培養菌落記數均明顯少於正常對照組（P＜0.01）。觀察發現菌群失調小鼠排稀便，多精神不振，毛發有不同程度黏濕，說明模型小鼠腸道內微生物種群平衡遭到明顯破壞,出現菌群失調症。表1 正常對照組與菌群失調組菌群數（略）
2.2 靈芝預防組菌群定量檢測見表2。由表2 可以看出各劑量預防組不同程度的預防了由林可黴素造成的菌群數量減少（P＜0.01）。但靈芝對需氧菌的預防效果隨劑量增大而減小,而對厭氧菌的預防效果隨劑量增大而增大，具體原因有待進一步研究。中、低劑量組需氧菌較正常對照組無統計學差異（P＞0.05），高劑量組厭氧菌較正常對照組無統計學差異（P＞0.05），說明服用靈芝孢子能預防菌群失調導致的細菌數量減少。
2.3 雙歧杆菌預防組菌群定量檢測見表3。由表3 可以看出不同劑量的雙歧杆菌製劑不同程度的預防了由林可黴素造成的菌群數量減少（P＜ 0.01）。對需氧菌的預防效果隨劑量增加而增大，高劑量組需氧菌較正常組無統計學差異（P＞0.05），說明服用雙歧杆菌製劑能預防菌群失調導致的細菌數量減少。表2 靈芝預防組菌群定量檢測（略）
2.4 聯合製劑預防組菌群定量檢測見表4。不同劑量的聯合製劑不同程度的預防了由林可黴素造成的菌群數量減少（P＜0.01），預防效果隨劑量增大而增大。聯合高劑量組厭氧菌落數與正常對照組比較差異無顯著性（P＞0.05）。表3 雙歧杆菌預防組菌群定量檢測（略）表4 聯合預防組菌群定量檢測（略）
3 討論
在正常人和動物腸道內各菌群間按一定比例組合，互相製約，互相依存，在質和量上形成一定的生態平衡。若機體的內外環境發生某些變化，導致細菌繁殖顯著超過正常值的40%以上，則引起腸道食物的分解紊亂，進而出現腸菌群失調症狀，臨床上表現為急性或慢性腹瀉。保護正常菌群的生態環境，提高機體免疫力能有效的防治菌群失調［1］。靈芝孢子是靈芝生長成熟期從菌蓋彈射出來極其細小的孢子，為靈芝的生殖細胞，具有靈芝的全部遺傳活性物質，可以提高小鼠細胞免疫和體液免疫水平，增強巨噬細胞吞噬功能以及體內抗體的產生［5～7］。本實驗發現，靈芝孢子能預防由林可黴素造成的菌群數量減少（P＜0.01），但靈芝對需氧菌的預防效果隨劑量增大而減小,而對厭氧菌的預防效果隨劑量增大而增大。提示，靈芝孢子可能具有一定的預防菌群失調作用。
腸道微生態平衡的維持還依賴於腸道優勢菌雙歧杆菌的作用。雙歧杆菌是非致病性的、能抵抗胃酸和腸道酶類消化、能附著於小腸上皮並能調節黏膜免疫反應的微生物。雙歧杆菌的細胞壁可以粘附於腸黏膜上皮細胞阻止致病菌的入侵，同時通過多種方式抑製有害菌的生長［8］。目前認為雙歧杆菌通過代謝產生大量的乳酸和乙酸,降低腸道的pH及Eh值, 改善局部微環境, 促進腸菌群失調的恢複［9］。某些雙歧杆菌合成的小分子量親脂分子具有明顯的抗菌活性，可以抑製細菌進入細胞內，甚至殺滅細胞內的細菌［10］。本實驗中，雙歧杆菌對需氧菌群失調的預防作用隨劑量增大而提高，且高劑量預防組需氧菌群數較正常對照組無明顯差異（P＞0.05）；對厭氧菌群失調的預防作用未觀察到明顯劑量依賴關係，提示雙歧杆菌可能對腸道需氧菌群失調的預防作用強於對厭氧菌群失調的預防作用。將兩藥合用發現，無論對需氧菌群和厭氧菌群的菌落數都隨劑量增大而增大，聯合高劑量組厭氧菌落數與正常組差異無顯著性（P＜0.05）。
綜上所述,本研究證實，赤靈芝孢子和雙歧杆菌是一種較為有效的預防菌群失調劑,聯合使用效果優於單獨使用，但無統計學意義。其在糾正腸道菌群失調過程中的具體療效及功能成分,需要進一步研究。
作者：龍世棋，左麗，陳阿英，崔冬冰，鍾誌強《貴陽醫學院學報》
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