千佛菌對哮喘模型大鼠血清IL-5及IgE的影響

【摘要】  目的 探討千佛菌對哮喘模型大鼠血清IL-5和IgE的抑製作用。方法 給各組大鼠分別灌服生理鹽水和不同濃度的千佛菌液14天，用ELISA法檢測血清IL-5和IgE水平。結果千佛菌用藥組哮喘大鼠的血清IL-5和IgE水平較模型組明顯降低，兩組比較差異有統計學意義(P<0.01)。結論 千佛菌能幹預哮喘模型大鼠的免疫失衡，抑製哮喘大鼠血清IL-5和IgE產生。

【關鍵詞】  千佛菌；哮喘大鼠；白細胞介素5；免疫球蛋白E

    ［Abstract］  Objective  To study the influence of Grifola frondosa on asthmatic rat model for IL-5 and IgE level in serum.Methods  The rats were divided into four groups randomly:normal control,asthmatic model,model treated with the big dosage of Grifola frondosa,model treated with small dosage of Grifola frondosa.The rats were sensitized and challenged with ovalbumin to establish an asthmatic model.After the models were successfully established,normal control group and asthmatic model treated by NS,big dosage group of Grifola frondsa and small dosage group of Grifola frondosa were treated by 50% and by 100% Grifola frondsa.14 days later,we measured IL-5 and IgE level of serum by ELISA.Results  In the big dosage and small dosage of Grifola frondosa,the level of serum IgE and IL-5 were reduced obviously (P＜0.01),compared with control group.Conclusion  Grifola frondosa can interfere in the immunological dysfunction for asthmatic rat model,decrease the level of IgE and IL-5 in serum.

    ［Key words］  Grifola frondosa;asthmatic rat;IL-5；IgE

    支氣管哮喘是機體免疫係統功能異常所導致的超敏反應性疾病。存在著輔助性T細胞（Th2）優勢的免疫應答。如果能逆轉其漂移（失衡）狀態，促使Th1/Th2免疫應答的動態平衡，將有利於支氣管哮喘的預防和治療。千佛菌（Grifola frondosa）是藥食兩用的真菌類中藥，國內外研究表明千佛菌具有廣泛的生物學活性。我們從中藥免疫調節機製和支氣管哮喘發生的免疫學機製出發，選擇Th2的標誌性細胞因子IL-5和過敏性支氣管哮喘的重要介質IgE，探討千佛菌對哮喘模型大鼠的免疫調節作用。

    1  材料與方法

    1.1  實驗材料

    1.1.1  實驗動物  清潔級健康SD大鼠(由西安交通大學實驗動物中心提供)，月齡6~9個月，體重150~180 g，均為雄性。

    1.1.2  藥物  千佛菌購自陝西省鎮安縣千佛菌種植基地。幹品浸泡後煮沸30 min過濾，重複2次，將兩次獲得濾液混合，濃縮至100%（W/V）濃度，50%濃度用生理鹽水稀釋。靈芝孢子粉購自陝西大至醫藥有限公司。

    1.1.3  主要試劑和儀器設備  卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)：Sigma公司產品；滅活百日咳杆菌疫苗：上海生物製品研究所產品；氫氧化鋁：天津市博迪化工有限公司產品；ELISA大鼠IL-5和IgE試劑盒：大連泛邦生物工程有限公司產品；超淨工作台：蘇州淨化設備有限公司產品； FA1004N電子天平： 海精密科學儀器公司產品；SHHW21-600電熱恒溫水箱：天津市泰斯特有限公司產品；G1-20G-ZZ離心機：上海安亭科學儀廠產品； RT-2100C酶標分析儀：深圳雷杜電子有限公司產品； CC2170A超聲霧化器：成都維信電子科大新技術有限公司產品； HX200型呼吸流量換能器：成都儀器廠產品。

1.2  實驗方法

    1.2.1  動物分組及用藥  選取健康雄性大鼠，按體重隨機分為四組： 正常對照組、模型對照組、千佛菌大劑量組(100%濃度)、千佛菌小劑量組(50%濃度)。千佛菌大、小劑量組在第一次霧化激發後開始用千佛菌按3 ml/隻每天灌胃1次，正常對照組和模型組同時用生理鹽水3 ml/隻每天灌胃1次。連續14天。

    1.2.2  造模  除正常對照組外，其餘各組造模，造模方法參照文獻［1］進行。

    1.2.3  指標檢測  血清IL-5和IgE測定， 摘眼球取血，靜置30 min後離心(3000 rpm/min，15 min)，吸取上部血清，用ELISA法檢測，具體操作參照試劑盒說明書進行。

    2  結果

    2.1  千佛菌對血清IL-5和IgE的影響  見表1。模型對照組大鼠血清IL-5和IgE含量明顯高於正常組，千佛菌用藥組相對於模型對照組大鼠血清IL-5和IgE含量明顯降低，說明千佛菌可抑製哮喘大鼠血清中IL-5和IgE含量的產生。表1  千佛菌對血清IL-5和IgE水平的影響   注：與正常對照組比較，▲P<0.01；與模型對照組比較，★P<0.01；與千佛菌小劑量組比較，△P>0.05

    2.2  千佛菌對哮喘模型大鼠行為的影響  模型組大鼠經抗原激發後，出現張口喘息，呼吸加快，腹部翕動，易激惹，煩躁不安，且出現抖毛，飲水增多。用藥組症狀較模型組有所減輕，而對照組大鼠行動敏捷，未見異常。

    3  討論

支氣管哮喘是指由嗜酸性粒細胞（EOS）、肥大細胞和T淋巴細胞等多種炎性細胞參與的氣道慢性炎症，是機體免疫係統功能異常所導致的超敏反應性疾病。近年來，普遍認為支氣管哮喘是機體輔助性T淋巴細胞（Th）亞群失衡導致的免疫紊亂所致。哮喘患者存在主要表現為Th1/Th2細胞平衡失調，Th/Th2向Th2漂移，Th1型細胞因子IFN-γ等生成不足，而Th2型細胞因子IL-4和 IL-5分泌增多，使Th1/Th2失去平衡。而Th1/Th2失衡介導了哮喘IgE依賴的速發型變態反應及以EOS浸潤為主的慢性氣道炎症，從而促進IgE產生和EOS浸潤到支氣管和肺組織，引發一係列免疫級聯反應，形成氣道慢性炎症，氣道反應性增高，黏液及腺體分泌增加，氣道部分或完全可逆性阻塞。其機製為:變應原特異的Th2克隆分泌IL-4、IL-5等細胞因子，IL-4抑製Th1分泌，刺激B細胞產生大量IgE，直接參與哮喘的速發反應過程，對氣道炎症的多個環節產生影響，同時，IL-5作為EOS生長、分化和趨化的必需因子，在EOS成熟及在氣道聚集中起主導作用；同時哮喘患者體內Th1功能降低，IFN-γ生成低下，對IL-4及IgE生成的抑製作用減弱，使IgE生成增加。所以Th2型細胞因子在哮喘的發病過程中發揮重要作用，因此，抑製IL-5等Th2型細胞因子的生成，糾正Th1/Th2的失衡，才能有效防治支氣管哮喘，阻斷患者氣道及肺組織炎症。因此，調整並恢複Th1/Th2的平衡狀態已成為防治支氣管哮喘的熱點和重要措施。而免疫調節是中藥的特點。我們的以前實驗發現，千佛菌對腎陽虛小鼠、荷S180肉瘤小鼠、荷肺癌小鼠及哮喘大鼠低下的Th1功能有明顯調節作用,能改善實驗動物的腎陽虛症候,對S180肉瘤和肺癌具有較強的抑製作用［2~4］。本實驗證實，千佛菌能通過抑製Th2型細胞因子IL-5，幹預 IgE的產生，從而減輕支氣管哮喘的症狀。

作者：席孝賢，蘇海生，賀新懷《中華現代中醫學雜誌》

  1 呂國平.介紹一種建立大鼠哮喘模型的實驗方法.中華結核和呼吸雜誌,1995，189(6):377-378.

2 賀新懷，吳曉康，席孝賢.千佛菌對荷S180肉瘤小鼠MФ-IL-1-Th1免疫調節網絡影響的實驗研究.中醫藥學刊，2005，23（2）：287-288.

3 賀新懷，席孝賢，楊曉航，等.千佛菌對肺癌小鼠MΦ吞噬功能及IL-1活性影響的實驗研究.遼寧中醫雜誌，2008，35（7）：1096-1097.

4 賀新懷，席孝賢，楊曉航，等.千佛菌對肺癌小鼠免疫網絡影響及抑瘤作用的實驗研究. 中國臨床實用醫學雜誌，2007，2（1）：8-10.