扁擔杆提取物體外抑菌活性研究

摘要】  　　目的研究藥用植物扁擔杆乙醇提取物的抑菌活性，尋找抗菌活性成分。方法製備扁擔杆乙醇提取物及其不同極性溶劑萃取物，采用液體兩倍稀釋法對金黃色葡萄球菌、大腸杆菌、綠膿杆菌、β-溶血性鏈球菌、表皮葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌進行體外抑菌實驗。結果扁擔杆乙醇提取物及其不同極性溶劑萃取物對上述6種細菌生長均有一定抑製作用，其中對β-溶血性鏈球菌的抑製作用最強，正丁醇萃取物對上述6種菌的抑製活性最好。結論扁擔杆乙醇提取物有較強的抑菌活性，值得進一步研究開發。

【關鍵詞】  扁擔杆 提取物 體外抗菌活性 液體兩倍稀釋法

　　Abstract：ObjectiveTo study the antibacterial activities of extracts from Grewia biloba and find active components. MethodsDouble dilution method was used to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) of the extracts of Grewia biloba against Staphylococcus aureus, Escherichia coli , Pseudomonas aeruginosa, β-Hemolytic streptococcus, Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus citreus.ResultsThe extracts of Grewia biloba could obviously inhibit the growth of all the above six bacteria, especially β-Hemolytic streptococcus and the n-butanol extract showed the best antibacterial activity.ConclusionThe extracts of Grewia biloba have obvious antibacterial activity and are worth further studying.

　　Key words：Grewia biloba G. Don;    Extracts;    Antibacterial activity in vitro ;   Double dilution method

   

　　扁擔杆Grewia biloba G. Don為椴樹科(Tiliaceae)扁擔杆屬(Grewia)植物，全世界約有150種，為灌木或小喬木。據《中國植物誌》［1］記載我國有27種和1 存疑種，主要分布於雲南、廣西、廣東和江西等省。在非洲和亞洲一些國家地區，部分扁擔杆屬植物被作為民間草藥使用，多具有抗菌消炎作用。如南非的Grewia occidentalis 和巴基斯坦的Grewia erythraea 在民間作為傳統草藥治療傷口細菌感染［2，3］；Grewia bicolor 在蘇丹作為傳統草藥治療皮膚膿皰瘡，還有鎮靜作用［4］；《新修本草》［5］記載小花扁擔杆枝葉煮汁可治小兒蛔蟲病，《開寶本草》稱其可“主三蟲，下氣消穀”；《中藥大辭典》記載其全株和枝葉能祛風除濕，理氣消痞，可治小兒因蟲疳積，大人氣痞，脾虛食少，婦女崩帶，風濕［6］；扁擔杆的根在江西部分地區民間用來治療皮膚膿皰瘡等細菌感染，療效很好。目前，關於扁擔杆的化學成分和藥理活性研究還未見報道。為了尋找抗菌活性成分，本文采用液體兩倍稀釋法［7，8］對扁擔杆乙醇提取物及其不同極性溶劑萃取物進行了體外抑菌活性研究。

　　1  材料

　　1.1  菌種金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureaus,ATCC 259223)、大腸杆菌(Escherichia coli, ATCC 25922 )、綠膿杆菌(Pseudomonas aeruginosa, ATCC 27853)和β-溶血性鏈球菌(β-Hemolytic streptococcus, ATCC 0604)均由江西省臨床疾病檢驗中心提供。表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis) 和檸檬色葡萄球菌（Staphylococcus citreus）由本單位臨床分離所得。

　　1.2  藥物扁擔杆的幹燥根皮90%乙醇提取物及其醋酸乙酯、正丁醇和水萃取物；鹽酸小檗堿（中國藥品生物製品檢定所）。

　　1.3  培養基營養肉湯（杭州微生物試劑有限公司）；瓊脂粉（成都科龍化工試劑廠）；苯酚紅（天津市大茂化學試劑廠）；無菌脫纖維綿羊血（江西省臨床疾病檢驗中心）。

　　2.1  普通培養基的製備用蒸餾水將營養肉湯和瓊脂粉溶解後，高壓滅菌。趁熱將培養基傾倒入培養皿中，冷卻備用。

　　2.2  血平板培養基的製備［9］在普通營養瓊脂培養基礎上高壓消毒後, 冷卻至56℃時加5%～10% 無菌脫纖維綿羊血混勻, 倒入培養皿中備用。

　　2.3  菌液的製備將在低溫保存的菌種活化 2～3 次，然後於肉湯蛋白腖瓊脂培養基斜麵37℃培養24 h。再從斜麵培養基上沾取一鉑金耳菌苔，接種到滅菌的葡萄糖酚紅肉湯培養基中，於37℃培養24 h，取出作為原菌液。再用無菌生理鹽水稀釋至濃度為1 ∶1 000做實驗菌液。

　　2.4  實驗藥液的製備將扁擔杆幹燥根皮粉碎，用90%乙醇回流提取減壓蒸幹溶劑得總浸膏。將總浸膏混懸於水中，依次用醋酸乙酯、正丁醇萃取，減壓蒸幹溶劑得醋酸乙酯、正丁醇和水部位浸膏。總浸膏和各部位浸膏用蒸餾水配成40 mg/ml水溶液作為供試液，同時以鹽酸小檗堿（4 mg/ml）作藥物陽性對照。

　　2.5  最低抑菌濃度（MIC）的測定取16支滅菌過帶有棉塞的試管，每管均加入1ml滅菌的葡萄糖酚紅肉湯培養基。取上述5種供試液各1ml，加入各自的第1管中，混勻，吸出1ml加至第 2 管中……如此稀釋至第14管，取出1ml棄去。第15管不加藥物（作陽性對照），第16管不加藥物也不加菌液（作陰性對照）。隨後第1～15管中分別用移液槍，按無菌操作加入稀釋好的實驗菌液各0.1ml，混合均勻。以上各實驗用具及各種培養基均按要求事先滅菌，各步驟均按無菌操作進行實驗。於37℃恒溫箱中培養24h。觀察結果，以完全沒有菌生長的最低藥物濃度作為該藥物對實驗菌的最低抑菌濃度（MIC）。結果見表1。表1  扁擔杆乙醇提取物和各萃取物對6種菌株的最低抑菌（略）

　　3  討論

    

結果表明扁擔杆乙醇提取物及其醋酸乙酯、正丁醇和水萃取物對上述6種細菌均有一定的抑製活性，其中對β-溶血性鏈球菌的抑製作用最強，並以正丁醇萃取物的抑製作用最好，有的與陽性對照鹽酸小糪堿的抑菌作用相當。β-溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和檸檬色葡萄球菌屬於革蘭氏陽性菌，綠膿杆菌和大腸杆菌屬於革蘭氏陰性菌。實驗結果表明扁擔杆乙醇提取物及其萃取物對革蘭氏陽性菌的抑製效果相對較好，提示扁擔杆可作為有潛力的抗菌藥值得進一步研究開發。

  作者：劉建群，吳繼梅，何誌恒，寇曉莉，洪沁《時珍國醫國藥》

  　　［1］中國科學院中國植物誌編輯委員會.中國植物誌,第1分冊，第49卷［M］. 北京:科學出版社,1989:89.

　　［2］D.S. Grierson, A.J. Afolayan. Antibacterial activity of some indigenous plants used for the treatment of wounds in the Eastern Cape ,South Africa［J］. Journal of Ethnopharmacology，1999, 66(1): 103.

　　［3］Mudassir A. Zaidi, Sidney A. Crow Jr. Biologically active traditional medicinal herbs from Balochistan, Pakistan［J］. Journal of Ethnopharmacology，2005, 96(1): 331 .

　　［4］M.W.J.M.Jaspers, A.K.Bashir, J.H.Zwaving, et al. Investigation of Grewia bicolor juss［J］. Journal of Ethnopharmacology，1986, 17(3): 205.

　　［5］唐慎微. 重修政和經史證類備急本草［M］. 北京:人民衛生出版社,1975: 354.

　　［6］江蘇新醫學院.中藥大辭典［M］. 上海：上海科技出版社,1986: 1747.

　　［7］杜紀鳴. 香連丸體外抗菌實驗［J］. 中國醫院藥學雜誌,2004,24(3):153.

　　［8］劉炳茹,王 偉,屈曉原. 柴黃片劑及其口服液的體外抑菌作用研究［J］. 時珍國醫國藥,2000,11(5):397.

［9］張連同，邱世翠，呂俊華，等.大青葉體外抑菌作用研究［J］. 時珍國醫國藥，2002，13（5）：283