白花蛇舌草抑菌作用研究

【摘要】  　　目的考察白花蛇舌草提取物對G+和G-的抑菌效果。方法采用打孔法和滴注法測定了白花蛇舌草95%乙醇提取物對大腸杆菌、金黃色葡萄球菌、綠膿杆菌、鐮刀菌的抑菌作用。結果20%白花蛇舌草提取物對綠膿杆菌的抑菌環直徑為（18.86±0.56） mm，大腸杆菌的為（12.78±0.44） mm；對4種供試菌的最低抑菌濃度（MIC）分別為2.0%,0.5%,0.25%,0.05%。結論白花蛇舌草提取物對革蘭氏陰性菌的抑菌作用較革蘭氏陽性菌明顯。

【關鍵詞】  白花蛇舌草 提取物 抑菌作用

　　Abstract:ObjectiveTo study the antimicrobial effects of extracts from Oldenlandia diffusa Willd. Methods Boring incubation and dropping incubation were used to determine the antimicrobial activities of the extract from Oldenlanida diffusa willd by 95% ethanol. Tested microbial species were Escherichia coli,  Staphalococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, and Fusariumsp respectively. Results The radius of inhibition cycle of Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli were (18.68±0.56) mm and (12.78±0.44) mm respectively, when the concentration of the extract was at 20%. The minimum inhibitory concentrations (MIC) of the extract were shown as following:Escherichia coli, 2.0%; Staphalococcus aureus， 0.5%; Pseudomonas aeruginosa, 0.25%; Fusarium sp., 0.05%. Conclusion The extract from Oldenlandia diffusa Willd has stronger inhibitive effects on Gram-negative bacteria than Gram-positive bacteria.

　　Key words：Oldenlandia diffusa Willd;  Extracts;  Antimicrobial effect;

　　白花蛇舌草Oldenlandia diffusa Willd為茜草科耳草屬植物，別名蛇舌草、蛇針草、二葉律、白花十字草、龍舌草、鶴舌草等。其性甘寒、微苦，以全草供藥用，具有清熱解毒、活血化淤、利水滲濕、消腫止痛之功效［1］，有研究報道白花蛇舌草有抗腫瘤作用和免疫學活性［2,3］，故臨床應用廣泛，主治惡性腫瘤、胃腸炎、闌尾炎、扁桃體炎、肺炎、泌尿係感染等病症。外用治療毒蛇咬傷、癰腫瘡癤等症。筆者從白花蛇舌草中提取抑菌物質，用幾種常見的微生物進行抑菌作用研究，以期為白花蛇舌草的開發利用找到新的途徑。

　　1  材料與方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  白花蛇舌草購自藥材市場。

　　1.1.2  供試菌種金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、綠膿杆菌（Pseudomonas aeruginosa）和大腸杆菌 (Escherichia coli)由昆明理工大學生物工程實驗室保存。鐮刀菌（Fusarium sp.）由雲南大學提供。

　　1.1.3  培養基大腸杆菌、金黃色葡萄球菌、綠膿杆菌為LB培養基，鐮刀菌為馬鈴薯培養基。

　　1.2  方法

　　1.2.1  白花蛇舌草提取物的製備取經幹燥粉碎的白花蛇舌草50 g用索式抽提器抽提，水浴加熱，溫度控製在90℃，用95%的乙醇回流提取36h，將抽提物蒸幹，用醋酸乙酯（打孔法用）和二甲基亞碸（滴注法用）溶解， 4℃冰箱保存備用。

　　1.2.2  樣品溶液的製備用醋酸乙酯溶解物分別稀釋成20 ％，2％，0.2 ％，0.02 ％，0.002 ％濃度，用二甲基亞碸溶解物分別稀釋成4 ％，2 ％，1 ％，0.5 ％，0.25 ％，0.125％，0.1 ％，0.05 ％，0.025 ％濃度備用。

　　1.2.3  供試菌株懸浮液的製備［4］在超淨工作台上進行無菌操作。增菌培養後，用生理鹽水將菌懸液稀釋成含菌量(集落形成單位，cfu)：細菌為1.0×108，真菌為1.0×106。

　　1.2.4  抑菌效果測定方法采用打孔法［5］，在直徑為9 cm的平板上傾倒培養基，厚度約6 mm，待冷卻後每個平板加菌液100 μl，塗布均勻後用無菌鋼管打3個孔，每孔直徑為4  mm，在每個孔中先加0.7%瓊溶液10 μl封底，再加稀釋好的藥物溶液40 μl，對照孔分別加入含相應濃度的醋酸乙酯無菌水溶液，然後置於37℃培養箱中培養，真菌培養48 h，細菌培養24 h。測量抑菌環直徑，取平均值。

　　1.2.5  最低抑菌濃度(MIC) 和最低殺菌濃度(MBC)的測定采用滴注法［6］，將不同濃度的二甲基亞碸樣品溶解液4 ml與36 ml 培養基的在三角瓶中混勻，使培養基中藥物濃度為原來的10-1，倒平板，待凝固後，吸取菌液10 μl滴種在培養基上，每個平板滴8滴，二甲基亞碸作空白。實驗重複3次。待菌液吸收後，平皿平放培養箱中，37℃培養，連續4 d觀察菌落生長情況。對於細菌，以培養24 h不長菌的濃度為最低抑菌濃度(MIC)，4 d不長菌的濃度為最低殺菌濃度(MBC)；對於真菌，以培養2 d不長菌的濃度為最低抑菌濃度(MIC)，4 d不長菌的濃度為最低殺菌濃度(MBC)。

　　1.3  統計分析抑菌圈結果以±s記錄，用student-t檢驗兩組數據之間的顯著性差異，當P＜0.05時，認為存在顯著性差異；當P＜0.01時，認為存在極顯著性差異。

2  結果與討論

　　2.1  白花蛇舌草乙醇提取物的抑菌效果將白花蛇舌草的乙醇提取物用醋酸乙酯溶解，並稀釋成20 ％，2 ％，0.2 ％，0.02 ％，0.002 ％的濃度，分別加入已塗各菌液平皿的孔中，每一濃度做8個孔，培養後測定抑菌圈直徑。結果見表1。表1  不同濃度白花蛇舌草乙醇提取物的抑菌效果（略）

　　從表1中可以看出，隨著白花蛇舌草提取物濃度的增加，其對4種供試菌的抑菌效果越明顯，尤其對綠膿杆菌的抑菌效果較好，大腸杆菌次之，對金黃色葡萄球菌和鐮刀菌的抑菌效果較差，在白花蛇舌草提取物濃度≤0.2%時，其對金黃色葡萄球菌和鐮刀菌的抑菌效果差異不顯著，基本不存在抑菌作用。

　　2.2  MIC和MBC的測定用滴注法測定了白花蛇舌草提取物對大腸杆菌、金黃色葡萄球菌、綠膿杆菌、鐮刀菌4種供試菌的MIC和MBC。結果見表2。表2  白花蛇舌草提取物對4種供試菌的MIC及MBC（略）

　　綠膿杆菌和其他革蘭氏陰性杆菌的細胞壁外，有一層主要由蛋白質組成的外膜，外膜蛋白可分為結構蛋白、轉運蛋白和微孔蛋白等，它們具有不同的功能，有的轉運營養成分、無機鹽等進入菌體，有些藥物和物質可以通過微孔蛋白形成的孔道進入菌體，但一些大分子物質則不能通過外膜進入菌體，某些大分子的藥物也不能通過外膜進入菌體，這是抗綠膿杆菌藥物較少的原因之一。因此，尋找抑製綠膿杆菌和其他革蘭氏陰性杆菌外膜合成的藥物，可使一些原來不能透過綠膿杆菌外膜的藥物進入菌體，抑製菌體的生長繁殖，也可尋找既能抑製外膜合成，又有抗菌作用的藥物［7］。從表2看出，白花蛇舌草提取物對供試菌綠膿杆菌的MIC為0.25%，MBC為0.5%，表明其為具有抗菌作用的藥物，是否為抑製外膜合成的藥物，機製尚不清楚，也有可能是黃酮類化合物的存在顯示其抑菌活性［8］。據文獻報道，白花蛇舌草的醇提物中含有熊果酸，對多種腫瘤細胞均有明顯的細胞毒性［9］。

3  結論［10～12］    

　　白花蛇舌草95%乙醇提取物對各種供試菌的抑製效力不同，對綠膿杆菌的抑菌效果較好，37℃培養箱培養24 h後，20%的提取物醋酸乙酯溶解液的抑菌環直徑為（18.68±0.56）mm，大腸杆菌的為（12.78±0.44）mm，其對這兩種供試菌的MIC和MBC值也表明白花蛇舌草抗革蘭氏陰性杆菌的醫用前景。有關提取物中主要活性成分的結構及抑菌機理還有待進一步研究。

作者：李濤，餘旭亞，韓本勇《時珍國醫國藥》

【參考文獻】

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