黃連多糖抑菌活性初探

【摘要】  　　目的探討黃連多糖對大腸杆菌和金黃色葡萄球菌的抑製作用。方法用擴散法研究黃連多糖對大腸杆菌和金黃色葡萄球菌的抑製作用，並選用黃連水提液和鹽酸小檗堿作為對照。結果黃連水提液和小檗堿對菌體均有抑菌效果，黃連水提液的抑菌效果尤為明顯；黃連多糖沒有抑菌作用。結論黃連多糖在體外條件下，不具有對大腸杆菌和金黃色葡萄球菌的抑製作用。

【關鍵詞】  黃連多糖； 小檗堿； 水提液； 抑菌作用

　　Abstract：ObjectiveTo research the in vitro growth inhibitory effect of Coptis chinensis polysaccharide, berberine and aqueous extract solution on Escherichia coli and stap hylococcus aureus. MethodsDispersion method was used to observed the inhibitory effect of aqueous extract solution on Escherichia coli, stap hylococcus aureus withberberine and Coptis chinensis polysaccharide as the compared samples.ResultsThe aqueous extract solution and berberine had effect of growth inhibition on bacteria, and the antibacterial effect of aqueous extract solution was very obvious; Coptis chinensis polysaccharide did not have the effect of growth inhibition on bacteria. ConclusionCoptis chinensis polysaccharide may not have the effect of growth inhibition on Escherichia coli, stap hylococcus aureus.

　　Key words：Coptis chinensis polysaccharide；  Berberine；  Aqueous extract solution；  Antibacterial effect

　　黃連是傳統的抗菌、消炎中藥，性寒，內服外用皆具有明顯的抗菌消炎功效［1］。黃連小檗堿已被證實具有抑菌活性［2］，而黃連多糖是否具有抑菌效果，目前尚未見文獻報道。已有資料顯示，黃精多糖、黃芪多糖、香菇多糖等許多中藥多糖均具有抑菌活性［3～5］，故本研究小組首次對黃連多糖進行研究。實驗選用黃連水提液和鹽酸小檗堿作為對照品，利用溶液在瓊脂培養基內擴散的原理，采用擴散法對黃連除蛋白多糖、黃連未除蛋白多糖的體外抑菌效果進行研究。

　　1  材料與儀器

　　1.1  材料 黃連Coptis chinensis Franch.，產地峨眉，采收於2006年冬至前後，經西南交大藥學院生藥學教授王盛民鑒定為4年生味連。鹽酸小檗堿藥片，成都錦華藥業有限責任公司產品，批號070820。實驗提取用水為超純水（18.24MΩ×CM-1）。菌種，大腸杆菌Escherichia coli，金黃色葡萄球菌stap hylococcus aureus。培養基，牛肉膏固體培養基。

　　1.2  儀器 FA1004-53423電子天平(0.000 1 g)，上海精科產品； DZF-6030B真空幹燥箱，上海齊欣產品；KL-UP超純水器，成都優普產品；JJ-1A60W數顯電動攪拌器，江蘇富華產品。BCM-1000A超淨工作台，蘇州華宇淨化設備有限公司產品；YXQ-LS-18SI手提式壓力蒸氣滅菌鍋，上betway必威西汉姆联迅實業有限公司醫療設備廠產品；SKP-01B電熱恒溫培養箱，湖北黃石恒豐醫療器械有限公司產品。

　　2  方法

　　2.1  黃連多糖溶液的製備

　　2.1.1  提取 稱取粉碎至20目的黃連粗粉兩份，每份60 g，分別置於索氏提取器中用5倍無水乙醇回流脫脂6 h。濾渣揮幹後，分別加入10倍水，80℃水浴回流提取1 h。提取液調pH值至中性，抽濾，各旋蒸濃縮至125 ml。

　　2.1.2  除蛋白 將其中一份加木瓜酶0.06 g，40℃水浴1 h，Sevag法4次。(Sevag法：即，提取液∶氯仿∶正丁醇＝25∶5∶1，電動攪拌20 min，靜置分層後棄蛋白質沉澱及有機層。)

　　2.1.3  醇沉 將提取液的醇濃度調至80%，在冰箱中4℃靜置12 h後取出。將醇沉液以5 000 r/min離心5 min，將沉澱用無水乙醇洗滌3次，真空幹燥即得灰白色粉末狀的黃連多糖。

　　2.1.4  溶液的製備 黃連多糖分為除蛋白黃連多糖和未除蛋白黃連多糖。分別加水配製成5 mg/ml即為高濃度溶液，稀釋10倍為中濃度，再稀釋10倍為低濃度。

　　2.2  小檗堿溶液的製備 將小檗堿藥片研磨成粉，加水配成小檗堿溶液。5 mg/ml為高濃度，稀釋10倍為中濃度，再稀釋10倍為低濃度。

　　2.3  黃連水提液的製備 將粉碎至20目的黃連粗粉加入10倍重量的水，浸泡1 h，再80℃水浴加熱2 h，然後濃縮至1/10體積，即配成了高濃度的黃連水提液，稀釋10倍為中濃度，再稀釋10倍為低濃度。

　　2.4  菌液的製備 將大腸杆菌，金黃色葡萄球菌分別接種於固體肉湯培養基中，37℃培養24 h，然後在無菌條件下用無菌生理鹽水洗滌菌體，混合菌體製備菌懸液。

　2.5  抑菌實驗 在無菌操作條件下，將牛肉膏固體培養基熔化冷卻至45～55℃，加入適量的菌懸液，混勻，吸取40 ml於平皿內，待凝固後，在平板內挖取直徑8 mm圓形小坑，將不同濃度的除蛋白黃連多糖溶液、未除蛋白黃連多糖溶液、小檗堿溶液、黃連水提液注入小坑中，37℃培養24 h，觀察並測量抑菌圈直徑。各溶液在平皿中注入的位置和順序如圖1。

　　3  結果

　　3.1  抑菌效果的比較 各樣品對大腸杆菌、金黃色葡萄球菌的抑製作用見圖2～5。

　　3.2  抑菌圈直徑的比較 黃連水提液，小檗堿溶液對大腸杆菌，金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑比較見表1。

　　圖1  各溶液在平皿中注入的位置和順序（略）

　　圖2  高濃度溶液對大腸杆菌的抑製效果（略）   

　　圖3  中濃度溶液對大腸杆菌的抑製效果（略）

　　圖4  高濃度溶液對金葡菌的抑製效果（略）  

　　圖5  中濃度溶液對金葡菌的抑製效果（略）

　　表1  黃連水提液和小檗堿對菌體抑菌圈直徑平均值（略）

　　3.3  結果 根據圖片效果和表中數據可以看出，黃連水提液和小檗堿對菌體均有抑菌效果，黃連水提液的抑菌效果尤為明顯；黃連多糖沒有抑菌作用。

　　4  討論

　　黃連本身具有清熱燥濕、瀉火解毒、清心明目等功效，相關研究證明其有抑菌作用。本實驗研究結果也證實了黃連水提液的高濃度溶液和中濃度溶液對大腸杆菌和金黃色葡萄球菌均有明顯的抑製作用，並顯示出抑菌的效果隨著濃度升高而增強。鹽酸小檗堿對細菌的抑製作用也得到了證實。對於黃連多糖，從本實驗的結果看，對大腸杆菌和金黃色葡萄球菌不具備抑製作用，黃連多糖對其它微生物的抑菌效果有待進一步研究。

本研究對目前使用比較普遍的抑菌實驗方法、紙片擴散法［6］進行了改進。由於濾紙片所能夠承載的藥液量很少，而中藥成分在體外的抑菌作用普遍較弱，因此我們采取在平板內挖取圓形小坑，然後注入藥液的方式來代替紙片擴散法。改進之處在於圓形小坑能夠承載的藥液量更多，並且能夠使藥液與培養基接觸的更加充分，從而能更加直觀準確地反映藥液的抑菌效果。實驗結果表明，各樣品抑菌效果區別非常明顯，該方法用於中藥提取物的抑菌實驗效果較好。

作者：薑延偉 王懿萍 吳玉娟 洪鵬舉 許倫傑《時珍國醫國藥》

【參考文獻】

  　　［1］ 王桂紅.黃連與藥物配伍對抑菌作用影響的研究［J］.中醫藥學刊，2001，19（4）：400.

　　［2］ 呂 霞，王 晶，蔣文強，等.黃連的研究進展［J］.山東醫藥工業，2003，22(6)：33.

　　［3］ 蘇 偉，趙 利，劉建濤，等.黃精多糖抑菌及抗氧化性研究［J］.食品科學，2007，28(8)：55.

　　［4］ 李樹鵬，郝豔霜，陳福星，等.黃芪多糖和2株益生菌體外抑菌作用研究［J］.河南農業科學，2007，4:86.

　　［5］ 鍾耀廣，林 楠，王淑琴，等.香菇多糖的抗氧化性能與抑菌作用研究［J］.食品科技，2007，4：141.

［6］ 吳 靜，王克霞，李朝品，等.黃連與鹽酸小檗堿對幽門螺杆菌的體外抗菌活性［J］.中藥藥理與臨床，2006，22(2)：37.

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