【摘要】 目的研究黃芩中的黃酮提取方法和抗菌活性。方法利用超聲波技術通過正交實驗提取黃芩中的黃酮，杯碟法對其進行抗菌活性的研究。結果超聲波最佳的提取條件為功率235 W，60%乙醇，料液比為1∶20，提取時間為9 min，黃酮提取率為10.35%。該提取液對金色葡萄球菌、枯草杆菌、大腸杆菌、黑曲黴、青黴都有明顯的抑菌效果，最低抑菌濃度分別為：1.0，2.0，1.0，0.5，1.0 mg·ml-1；最小殺菌濃度為：1.0，2.0，2.0，2.0，1.0 mg·ml-1。結論超聲波技術是提取黃芩黃酮的高效方法，黃芩具有較強的抗菌活性。
【關鍵詞】 超聲波提取 黃芩 黃酮 抑菌活性
黃芩Scutellaria baicalensis Georgi為常用中藥之一，是唇形科植物黃芩的幹燥根［1］。其有效成分主要為黃酮類化合物。據報道，黃芩黃酮是一類生物活性較強的天然產物，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、降血壓等作用［2，3］。超聲波具有加速藥材中有效成分溶解、縮短提取時間、提高有效成分的提取率等優點［4］，因此，本文通過正交實驗探討超聲波提取黃芩黃酮的最佳提取條件，為大規模高效生產黃芩黃酮提供了有力的理論依據。黃芩黃酮的體外抗菌的研究較少，本研究將最佳提取條件下的黃酮提取液對一些細菌和真菌進行了抑菌實驗，旨在開發一種天然的抑菌劑，並為臨床用藥提供理論依據。
1 材料
黃芩購於湖南長沙康爾佳藥店，粉碎過40目篩，80℃烘幹備用。蘆丁對照品購於中國上海醫藥化學試劑公司；供試菌種金色葡萄球菌、枯草杆菌、大腸杆菌、黑曲黴、青黴由本實驗室保存並培養。
2 方法
2.1 提取方法
超聲波提取法：稱取黃芩粉5.0 g，采用L9（34）按表1方法進行超聲波提取，提取液過濾，合並濾液，定容至100 ml，搖勻備用。表1 因素水平（略）
對比實驗：①煎煮法：稱取黃芩粉5.0 g，加水100 ml，浸泡30 min，煮沸後，文火煎60 min，過濾，共煎煮兩次，合並濾液，定容至100 ml，搖勻備用。②連續回流提取法：稱取黃芩粉5.0 g，加60%乙醇100 ml，水浴回流90 min，過濾，共提取兩次，合並濾液，定容至100 ml，搖勻備用。
2.2 標準曲線的製作
稱取在105℃下幹燥恒重的蘆丁對照品10 mg，用95%的乙醇溶解，搖勻，定容至10 ml使之成為濃度為1 mg·ml-1的蘆丁標準品溶液，作為儲備液備用。量取上述溶液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 ml，分別加水至3 ml，加5%的亞硝酸鈉溶液0.5 ml，放置6 min，加10%的硝酸鋁溶液0.5 ml，搖勻，放置6 min，後加5%的氫氧化鈉溶液2.5 ml，混勻，放置15 min後蒸餾水定容10 ml，用紫外分光光度計在510 nm處測其吸光度，得到回歸方程為：A＝9.933 9C－0.001 73（R2=0.997 5）。
2.3 黃芩黃酮的抑菌實驗采用杯碟法測定
其抑菌作用，取濃度106～107CFU/ml的各種待試菌懸液0.2 ml，與相應滅菌培養基15 ml混合製成混菌平板，凝固後，在平板上等距離放入4個滅菌牛津杯，每個菌設置3個重複，一個無菌生理鹽水為對照，取0.1 ml黃酮提取液加入牛津杯中，細菌37℃，真菌28℃培養18～24 h後，移去牛津杯，量取抑菌圈直徑，直徑越大抗菌活性越強。
2.4 最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)的測定
用無菌水將黃芩黃酮提取液稀釋，終濃度分別為4，2，1，0.5，0.25 mg·ml-1。取2 ml提取稀釋液至15 ml培養基，混勻後，倒入平板，凝固後加入100 μl 106～107 CFU/ml的菌液，塗布均勻，放至37℃/28℃培養24 h後觀察結果。菌落被完全抑製的最高稀釋度提取物濃度即MIC。培養48 h後，菌落被完全抑製的最高稀釋度提取物濃度為MBC。表2 正交實驗結果（略）
利用L9（34）正交實驗法優化黃芩黃酮提取條件結果（見表2），各因素對實驗結果影響順序為C>A>B>D，即乙醇濃度對黃酮提取率的影響效果最為顯著，其次是超聲波功率。最佳提取條件為A3B3C2D3，即在功率為235 W，料液比為1∶20，60%乙醇，提取時間為9 min條件下黃芩提取液黃酮含量最高。以該最佳提取條件進行驗證實驗，黃芩黃酮提取率為10.35%，RSD＝0.70%（n＝6），因此該最佳提取條件是可行的。
2.5 提取方法的比較
結果見表3。由表3可知，超聲波提取方法的提取率明顯高於其它兩種方法，且提取時間最短，提取溶劑用量最少。表3 不同的提取方法與黃酮含量的關係（略）
2.6 抑菌圈的確定
結果見表4。由表4可以看出黃芩黃酮提取液對金色葡萄球菌、枯草杆菌、大腸杆菌、黑曲黴、青黴都有較強的抑菌效果。而且對細菌的抑製效果強於真菌。表4 黃芩黃酮提取液的抑菌效果（略）
2.7 最低抑菌濃度和最低殺菌濃度的確定
結果見表5。由表5可知，黃芩黃酮對金色葡萄球菌、枯草杆菌、大腸杆菌、黑曲黴、青黴的最低抑菌濃度分別1.0，2.0，1.0，0.5，1.0 mg·ml-1；最小殺菌濃度為1.0，2.0，2.0，2.0，1.0 mg·ml-1。表5 黃芩黃酮最低抑菌濃度和最小殺菌濃度（略）
3 討論
目前，黃芩總黃酮的提取方法有水煎煮法、乙醇提取法、超聲波法、超濾法、微波提取法、高速逆流色譜法、亞臨界水提取法等多種方法［5］。本實驗用水煎煮法、乙醇回流提取法、超聲波提取法比較黃芩總黃酮的提取率，結果表明，超聲波提取法的效率最高，達10.35%，提取時間最短。黃酮類化合物是藥用植物的一大類有效成分，具有多種生物活性，主要的作用之一是抑菌或殺菌。本實驗結果表明，黃芩黃酮對真菌的有一定的抑製作用，是一種天然的抑菌劑，有望用於食品保藏，抗菌消炎等，為黃芩的綜合利用開辟了新的途徑。
作者：曾超珍，劉誌祥，韓磊 《時珍國醫國藥》
【參考文獻】
［1］宋雙紅,張媛.HPLC測定不同產地黃芩中黃酮化合物的含量［J］.中國中藥雜誌,2006,31(7):598.
［2］關曉燕,楊 潔.黃芩藥理研究概況［J］.中國醫藥信息,2006,23(4):21.
［3］姚幹,何宗玉,方積年.黃芩總黃酮提取及純化工藝的研究［J］.中成藥,2006,28(11):1568.
［4］曾超珍,劉誌祥,吳耀輝,等.超聲波提取甘草黃酮及其抑菌活性研究［J］.時珍國醫國藥,2007, 18(10):2402.
［5］王梅芳,武堅銳,楊小玲,等.黃芩總黃酮提取工藝的優化［J］.基層醫學論壇,2006,10(11)：966
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