【摘要】 目的 了解銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)臨床分離株的耐藥現狀，指導臨床合理使用抗生素。方法 采用美國德靈公司Microscan Autoscan-4鑒定儀進行菌株鑒定及藥敏試驗，並進行統計分析。結果 78株銅綠假單胞菌對抗生素前5位的耐藥率分別為頭孢曲鬆66.67%、頭孢噻肟52.56%、氨曲南23.08%、呱拉西林/他唑巴坦16.67%、頭孢吡肟15.38%。其中5株粘液型銅綠假單胞菌除對上述抗生素高度敏感，同時對複方新諾明、氨苄青黴素、氨苄青黴素/ 舒巴坦、頭孢呋辛均敏感。檢出1株全耐藥菌株。結論 銅綠假單胞菌對碳青黴烯類、氨基糖苷類、喹諾酮類、脲基青黴素及其β-內酰胺酶抑製複合劑保持較低的耐藥率。要加強對粘液型和多重耐藥性銅綠假單胞菌的耐藥監測和研究，合理選擇抗菌藥物。
【關鍵詞】 假單胞菌，銅綠；微生物敏感性試驗；抗藥性，細菌
銅綠假單胞菌廣泛存在於自然界中，是一種可引起人類各種感染性疾病的條件致病菌。在一些慢性疾病和免疫功能低下以及侵入性治療或嚴重創傷的患者中極易罹患該菌感染，是醫院內感染的主要致病菌之一。近年來，由於該菌在醫院內感染中分離率居高、耐藥性廣泛、臨床治療困難，而成為醫院感染和抗生素耐藥的監測重點［1，2］。筆者通過對我院臨床標本分離的78株銅綠假單胞菌耐藥現狀的分析，以指導臨床合理使用抗生素。
1 材料與方法
1.1 菌株來源 2005年1月～12月我院住院患者送檢標本中分離出78株銅綠假單胞菌。78株非重複分離株銅綠假單胞菌中，下呼吸道標本67株，占85.90%，膿液分泌物標本8株，占10.26%，血液標本1株，占1.28%，尿液標本2株，占2.56%。
1.2 試驗方法 所有菌株經常規分離培養後，用美國德靈公司Dade Microscan Autoscan-4自動分析係統及配套試劑NC21鑒定/藥敏複合板，進行菌株鑒定及藥敏試驗。並根據2002年版NCCLS文件標準進行抗生素敏感性判斷。20種抗生素分別為：頭孢唑啉、頭孢噻吩、頭孢呋辛、頭孢西丁、頭孢泊肟、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢曲鬆、頭孢吡肟、亞胺培南、氨曲南、呱拉西林、呱拉西林/他唑巴坦、氨苄青黴素、氨苄青黴素/舒巴坦、複方磺胺、環丙沙星、慶大黴素、阿米卡星、妥布黴素。標準質控菌株為銅綠假單胞菌ATCC27853。
1.3 統計方法 藥敏試驗結果用WHONET5軟件進行統計分析。
2 結果
2.1 對NC21鑒定/藥敏複合板上20種抗生素的監測結果 所有檢測菌株對頭孢唑啉、頭孢噻吩、氨曲南、頭孢西丁、頭孢泊肟均耐藥；對12種抗假單胞菌抗生素的藥敏結果，見表1。
2.2 粘液型銅綠假單胞菌 在78株銅綠假單胞菌中，有5株為粘液型。均來自慢性支氣管炎、支氣管擴張並感染的患者，並在多次送檢標本中重複檢出。這5例菌株表現為對12種抗假單胞菌的抗生素高度敏感，同時對複方新諾明、氨苄青黴素、氨苄青黴素/舒巴坦、頭孢呋肟辛均敏感。
表1 78株銅綠假單胞菌對12種抗生素的藥敏結果（略）
2.3 特殊菌株 從1例痰標本中檢出一株對上述試驗中所有抗生素均耐藥的銅綠假單胞菌。
3 討論
3.1 銅綠假單胞菌的耐藥率 78株銅綠假單胞菌對頭孢唑啉、頭孢噻吩、頭孢西丁、頭孢泊肟等藥物均耐藥，與有關資料報道呈天然耐藥一致［3］。
對12種抗假單胞菌藥物的耐藥率分別為頭孢他啶12.82%、頭孢噻肟52.56%、頭孢曲鬆66.67%、頭孢吡肟15.38%、亞胺培南5.13%、氨曲南23.08%、呱拉西林8.97%、呱拉西林/他唑巴坦16.67%、環丙沙星12.82%、慶大黴素10.26%、阿米卡星12.82%、妥布黴素7.69%。統計結果顯示，本院銅綠假單胞菌對碳青黴烯類、氨基糖苷類、喹諾酮類、脲基青黴素及其β-內酰胺酶抑製複合劑保持較低的耐藥率，但三代頭孢菌素的耐藥率高於國家細菌耐藥監測研究組（BRSSG）2001年、2002年的統計結果［2，4］。三代頭孢菌素中，頭孢他啶的耐藥率較低，但頭孢曲鬆、頭孢噻肟耐藥率較高，特別是頭孢噻肟中介率高達37.18%。氨曲南的耐藥率也較高。
3.2 耐藥原因 據有關研究報道［5，6］攜帶各種β內酰胺酶編碼基因(廣譜或超廣譜β內酰胺酶如TEM 、SHV 及OXA型酶、AmpC酶、金屬β內酰胺酶等)和(或)外膜通道蛋白op rD2 基因缺失是導致銅綠假單胞菌對β內酰胺類抗生素耐藥的重要原因。耐藥株產生的β內酰胺酶以AmpC和(或)ESBLs為主，其AmpC 基因和調控基因AmpR、AmpD及AmpE與標準菌株染色體介導的AmpC酶基因及氨基酸序列具有95.2%～99.5% 同源性。由於AmpC 酶是一類可被β-內酰胺類抗生素誘導的頭孢菌素酶，因此，頭孢曲鬆、頭孢噻肟、氨曲南的高耐藥率，除細菌本身的生物學特征外，還可能與第三代頭孢菌素在臨床作為抗感染的一線藥物廣泛應用，而導致銅綠假單胞菌產生高水平、染色體介導的AmpC 酶有關。
在我們的統計中值得注意的是，呱拉西林耐藥率為8.97%、呱拉西林/他唑巴坦耐藥率為16.67%。這可能與他唑巴坦對假單胞菌無抑製作用，反而可誘導產生β-內酰胺酶有關。
另外，78株銅綠假單胞菌中，有5株為粘液型，均來自慢性支氣管炎、支氣管擴張並感染患者的痰液（肺灌洗液）標本。這5株粘液型銅綠假單胞菌的體外藥敏試驗對12種抗假單胞菌的抗生素高度敏感，同時對複方新諾明、氨苄青黴素、氨苄青黴素/舒巴坦、頭孢呋辛均敏感。而其餘73株非粘液型銅綠假單胞菌對上述藥物均耐藥，與文獻報道呈天然耐藥一致［3］。這一現象是否與粘液型銅綠假單胞菌形成生物膜有關，有待於進一步的研究。雖然體外藥敏試驗顯示粘液型銅綠假單胞菌對多種生素高度敏感，但由於生物被膜有很強的耐藥作用［7，8］，可以保護細菌逃逸宿主免疫和抗菌藥物的殺傷作用，使治療更為困難。
我們從78株檢測菌株中，檢出1株對上述試驗中所有抗生素均耐藥的銅綠假單胞菌。由於銅綠假單胞菌的耐藥機理非常複雜，它幾乎包括了現在已知的所有耐藥機理［9］。其對不同抗生素的耐藥機理各不相同，且往往是幾種耐藥機理共同起作用，使其對多種抗生素產生耐藥。這種“全耐藥菌株”將給臨床抗感染治療造成極大的困難，應引起臨床和實驗室的共同關注。
因此，為了減少或減緩耐藥菌株的產生和阻止其傳播，必須加強細菌耐藥性監測，開展耐藥機理的試驗室檢測，指導臨床合理使用抗菌藥物。
作者：範柳青，吳敏，程紅革《右江民族醫學院學報》
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