五味子提取物體外抑菌作用研究

【摘要】  　　［目的］研究五味子提取物體外抑菌作用。［方法］用75％乙醇從五味子中提取其活性成分進行抑菌試驗。［結果］在PH=6的情況下，抑菌效果最強。濾紙片瓊脂擴散法表明MIC值金黃色葡萄球菌為62.5mg／ml，大腸杆菌、綠膿杆菌、肺炎克雷伯氏菌為31.3mg／ml；與二倍稀釋法測得的結果基本一致，除金黃色葡萄球菌的MIC為50mg／ml外，其餘3種菌的MIC均為25mg／ml。另外，瞬時高溫處理後，仍具有較強的抑菌作用。［結論］五味子提取物在體外對微生物有明顯的抑製作用，並且其抑菌成分具有一定熱穩定性。

【關鍵詞】  五味子；提取物；抑菌作用；實驗

　　Abstract：Effective components of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill were extracted by using ethanol，the antibacterial action of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill extracts was studied.It is shown that extracts of Schisandra chinensis （Turcz.）Baill had a notable inhibiting microorganism activity.In the additiion of pH=6.0，the bacteriostasis potency is strongest.By disc diffusion method，The results showed that the MIC for every kind of microorganism is respectively as follows：Staphylococcus aureus，62.5mg／ml，Echerichia coli，Pseudomonas aeruginosa，Klebsiella peneumoniae，31.3mg／ml.By tube double dilution method，the result was in substantial agreement.The MIC of Staphylococcus aureus is 50mg／ml，and the others are 25mg/ml.In addition,Schisandra chinensis（Turcz）Baill extracts were excellent in heat stability，it still showed a strong antiseptic power after a treatment of heated because the antibacterial action of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill has good stability against heating.

　　Key words：Schisandra chinensis（Turcz.）Baill；extracts；the antimicrobial activity

    五味子（Schisandra chinensis（Turcz.）Baill）別名北五味子、遼五味子、山花椒、烏梅子、軟棗子等，為木蘭科五味子屬植物。多年生落葉木質藤本，以野生為主，為常用中藥材。主要以果實入藥，因有甘、酸、辛、苦、鹹五味而得名，有斂肺、滋腎、止汗、生津、止瀉、澀精等功能。可以治療咳嗽、哮喘、口渴自汗、盜汗、遺精、久瀉、神經衰弱等症，也是很好的果酒和飲料的原料［1］，具有極高的藥用價值和營養價值，是一種新型的“藥食同源”功能性保健食品，其果實在國際上已成為一種新興食品工業的重要原料［23］。本實驗采用濾紙片瓊脂擴散法，研究五味子提取物對常見的幾個汙染菌的抑製作用，為五味子的進一步開發利用提供科學依據。

　　1.1  菌種與培養基 

　　試驗選用金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大腸杆菌（Escherichia coli）、綠膿杆菌（Pseudomonas aeruginosa）、肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella peneumoniae）。以上菌種由浙江省台州醫院微生物實驗室友情贈送。采用牛肉膏蛋白腖培養基，按文獻［4］自製，pH為6.0（用磷酸緩衝液配製［5］），其中固體培養基加瓊脂20‰。

　　1.2  五味子提取物的製備 

　　實驗用五味子飲片購自臨海市醫藥有限公司，經70℃烘幹後研成粉末。取粉末10g用75％乙醇在超聲波清洗器中提取，反複多次，直至浸出液色淡。將浸出液濃縮，並定容至10ml，即1ml提取液為1g五味子粉末的提取物［6］。提取液過0.22μm濾膜除菌，貯存於4℃冰箱中備用。

　　1.3  抑菌試驗

　　1.3.1  抑菌效力的測定 

　　分別將菌種從斜麵上轉接到5ml的液體牛肉膏蛋白腖培養基中，30℃培養24h，再從中吸取50μl到5ml液體培養基中，30℃培養6h後吸取100μl菌液均勻塗抹到滅菌平板上。將浸漬過提取液的濾紙圓片（6mm）稍風幹，貼到每個塗有菌液的平板上（每皿4片），每個濃度重複3次。37℃倒置培養24h後測定抑菌圈大小，並用無菌水作空白對照（以CK表示），確定抑菌效果。

　　1.3.2  最低抑菌濃度（MIC）的測定

　　采用二倍稀釋法［7］測定五味子提取物對4種供試菌的MIC。取7支試管，第1支加入10ml提取液，其餘6支各加入5ml無菌水，從第1支吸取5ml提取液移至第2支，混勻後，再吸取5ml至第3支，以此類推，最後1支試管取出5ml棄去，每一試管的濃度分別為1000mg/ml、500mg/ml、250mg/ml、125mg/ml、62.5mg/ml、31.3mg/ml和15.6mg/ml。分別將5ml上述各濃度的提取物與20ml牛肉膏固體培養基混勻，製成提取物的濃度分別為200mg/ml，100mg/ml，50mg/ml，25mg/ml，12.5mg/ml，6.3mg/ml，3.2mg/ml（五味子粉末重量/培養基體積）的平板，隨後塗布接種菌液，倒置培養24h後觀察，以完全沒有供試菌生長的最低濃度為提取物的MIC。

　　1.3.3  抑菌活性的pH範圍 

　　用磷酸緩衝液配製4種pH（分別為5、6、7和8）的牛肉膏蛋白腖培養基，製成平板並分別塗布各種供試菌；再將濾紙片置於濃度為500mg/ml的提取液中浸泡24h，稍風幹後貼在塗有供試菌的平板中，測定其抑菌效果。

1.3.4  熱穩定性試驗 

　　將五味子提取液置於80℃水浴、100℃水浴和121℃濕熱條件下［8］，熱處理20min，並製成濃度為500mg/ml的提取液，將濾紙片置於其中浸泡24h，稍風幹後貼在塗有各種菌液的乎板中，測定其抑菌效果。

　　2.1  pH對提取物的抑菌活性影響 

　　在pH為5時，金黃色葡萄球菌、大腸杆菌、綠膿杆菌和肺炎克雷伯氏菌均不能生長，在pH為6～8範圍內，五味子提取物對4種供試菌的生長均有一定的抑製作用，其中pH為6時的抑製作用最強（見表1）。表1  pH對五味子提取物抑菌效力的影響（略）

　　2.2  提取物濃度對抑菌效力的影響 

　　濾紙片法測定結果（見表2）顯示，五味子提取物對4種供試菌的生長均有很強的抑製作用，其中對綠膿杆菌的抑製作用最強，肺炎克雷伯氏菌其次，大腸杆菌和金黃色葡萄球菌最弱。表2  五味子提取物的濃度對抑菌效率的影響（略）

　　2.3  不同菌的MIC 

　　五味子提取物（二倍稀釋法）對金黃色葡萄球菌、大腸杆菌、綠膿杆菌、肺炎克雷伯氏菌的MIC值如表3所示。除了對金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml外，對其餘三種菌的MIC為25mg/ml（與濾紙片法的結果基本一致）。表3  五味子提取物的MIC（略）

　　2.4  提取物的熱穩定性試驗 

　　五味子提取物經3種溫度的熱處理20min後，仍具有較強的抑菌效力，其抑菌圈直徑與未經高溫處理的樣品（對照）接近，其中隻有對綠膿杆菌抑製作用，經100℃處理和濕熱滅菌後有顯著下降，對金黃色葡萄球菌的抑製作用，經濕熱滅菌後有顯著降低；而對大腸杆菌和肺炎克雷伯氏菌抑製作用，3種處理與對照均無顯著差異（見表4）。說明五味子提取物中的抑菌成分具有一定的熱穩定性。表4  熱處理對五味子提取物抑菌效力的影響（略）

經反複實驗，結果表明五味子提取物的濃度在31.3～1000mg/ml範圍內，pH為6～8時，對常見的4種致病菌有廣譜的抑菌作用，其中在pH=6時具有最佳的抑菌效果，抑製效應依次為：綠膿杆菌＞肺炎克雷伯氏菌＞大腸杆菌＞金黃色葡萄球菌。濾紙片瓊脂擴散法結果顯示，除金黃色葡萄球菌MIC為62.5mg/ml外，其餘3種供試菌MIC均為31.3mg/ml；采用二倍稀釋法測得的MIC也顯示基本一致的結果，金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml外，其餘3種供試菌的MIC均為25mg/ml。另外，五味子提取物經短時高溫處理後，仍保持較強的抑菌效果，且多數與對照無顯著差別。

 

作者：邊才苗 楊雲斌 費傑 何偉平 鍾浩  《浙江中醫藥大學學報》

  　　［1］樊駿，張亞雯，等.五味子規模化栽培管理技術［J］.陝西林業科技，2005，（3）：8385.

　　［2］王森.五味子研究概況及其發展前景［J］.經濟林研究，2003，（4）：8587.

　　［3］王森.栽培五味子有前途［J］.農家參謀，2002，（1）：35.

　　［4］黃秀梨.微生物實驗指導［M］.北京：高等教育出版社，1997，35115.

　　［5］張誌良，瞿偉菁主編.植物生理學實驗指導［M］.北京：高等教育出版社，2004，307.

　　［6］李鈞敏，虞優優，金則新.大血藤葉片提取物抑菌作用的初步研究［J］.浙江中醫學院學報，2004，28（1）：5557.

　　［7］鄭鈞鏞.藥物微生物及檢驗技術［M］.北京：人民衛生出版社，1985，351352.

［8］嚴讚開.生薑提取物的抑菌試驗［J］.中國食品添加劑，2005，（1）：7476.