6種天然藥物對乳酸杆菌體外抑菌作用的研究

【摘要】  目的  研究6種天然藥物對乳酸杆菌體外的抑菌作用。方法  以乳酸杆菌作為實驗菌株，測定五倍子、大黃、黃連、黃芩、三七和川芎6種天然藥物的最小抑菌濃度（MIC）。結果  大黃MIC為4.0mg/ml，五倍子和黃連均為8.0mg/ml。而黃芩、川芎和三七對乳酸杆菌的生長無明顯的抑製作用。結論  五倍子、黃連和大黃對乳酸杆菌的生長均有抑製作用，而川芎、黃芩和三七對乳酸杆菌無明顯的抑製作用。

    【關鍵詞】  天然藥物；乳酸杆菌；抑菌作用

    乳酸杆菌（Lactobacillus）是口腔正常菌群的主要成員之一。由於它在牙本質齲中的大量存在，決定了它在齲病發展中的地位。口腔是一個複雜的生態環境，正常菌群在口腔的生長和繁殖，對宿主起到有益與破壞的雙重作用。因此，單純殺滅口腔中某種細菌，對破壞口腔內的微環境會帶來不利影響。本研究選用6種可能具有調理作用的天然藥物，包括五倍子、大黃、黃連、黃芩、川芎和三七，研究其對乳酸杆菌體外抑菌作用，為防治齲病，選擇調理口腔正常菌群的生態平衡的藥物提供理論依據。

    1  材料與方法

    1.1  實驗菌株及菌液製備  乳酸杆菌（Lactobacillus）菌株由廣東醫學院微生物學教研室提供。　　將複蘇48h的乳酸杆菌接種於TPY液體培養基中，37°C厭氧培養18h，將培養液置於3000r/min離心15min，收集細菌，應用麥氏比濁標準，調整細菌濃度為108CFU/ml。

    1.2  中藥粗提物製備  中藥五倍子、大黃、黃連、黃芩、川芎和三七均購自湛江天馬大藥房。將上述中藥分別放入紅外線快速幹燥器中，幹燥15min後，碾成粗粉，然後放入電腦幹燥箱中，120°C 30min滅菌備用。采用水粗提法，撮五倍子、大黃、黃連、黃芩、川芎和三七的有效成分。水粗提法：用上述幹燥的中藥粉末50g，加500ml蒸餾水，在2000W電爐上加熱至沸騰，保持微沸1h，乘熱過濾，在80°C以下減壓濃縮至50ml。放入幹燥潔淨的玻璃密器中，4°C密封保存。

    1.3  6種中藥粗提物對乳酸杆菌的最小抑菌濃度（MIC）測定  將上述6種藥物的粗提物按倍比稀釋法溶於TPY瓊脂培養基中，使其終濃度達到16.00mg/ml、8.00 mg/ml、4.00 mg/ml、2.00 mg/ml、1.00 mg/ml、0.50 mg/ml、0.25 mg/ml、0.125 mg/ml分別接種乳酸杆菌（108CFU/ml）0.1ml，於37°C厭氧培養48h。 以無細菌生長的最低藥物濃度為其MIC值。

    2  結果

　　在6種中藥粗提物對乳酸杆菌最小抑菌濃度的測定試驗中，發現大黃在4.0mg/ml濃度下即表現明顯的抑菌作用，五倍子和黃連在8.0mg/ml時也表現出抑菌作用。而川芎、黃芩和三七則對乳酸杆菌的生長無明顯的抑製作用。

3  討論

    現代齲病病因學研究認為，齲病本質上是菌群生態失調性疾病。牙菌斑是齲病發生的啟動因子。當牙菌斑內致齲比例異常增高，而益生菌比例異常減少時，使牙菌斑由體致齲性菌斑向致齲性菌斑轉化。乳酸杆菌被認為是重要的致齲菌。近年來許多學者從大量化學和生物製劑中尋求有效的抗菌斑藥物，國內外學者從天然藥物中分離抗齲藥物，並已初獲成效。已發現了茶中以鞣酸為主的酚類化合物，可以抑製變形鏈球菌的生長［1］，從而有利於齲菌的防治。Iwamoto等［2］發現了來自檳榔的5′-核苷酸酶抑製劑可抑製變形鏈球菌生長與產酸，具有防齲病的作用。熊炎斌［3］的研究發現中藥大黃、五倍子等均能抑製變形鏈球菌的生長，其濃度與抑製效果呈正相關。

　　本實驗選用6種中藥的相提物進行研究，以了解其對乳酸杆菌生長的影響，實驗結果證實：不同的天然藥物對乳酸杆菌的生長影響不同，其中大黃、五倍子、黃連對乳酸杆菌的生長有一定的抑製作用。抑製作用最強為大黃，其次為五倍子和黃連。其餘藥物對乳酸杆菌的生長沒有明顯的影響。

中藥有著錯綜複雜的成分，對於其抗齲有效成分的確定，一直是研究的難點。以往的研究已發現，茶多酚中的鞣酸，具有收斂、抗菌作用，是主要抗齲成分，已證明其可降低牙菌斑的聚集［4］。本研究中所作中藥五倍子、大黃等對乳酸杆菌的抑製作用也可能與鞣質的存在相關。本實驗結果提示：五倍子、大黃和黃連可以抑製乳酸杆菌的生長，在齲病的防治及開發利用方麵將具有廣闊前景。

 

作者：宋燕豐，陳意清，姚蘇格《中華現代中醫學雜誌》

    【參考文獻】

    1  Otake S，Madimura M，Kuroki T，et al. Anticaries effect of polyhenolic compounds from Japanese green tea. Caries Res，1991，25:438-443.

    2  Iwamoto M，Uchino K，Toukairin T，et al. The growth inhibition of siteptococcus mutans by 5’-nucleotidase inhibitors fiom Aceca Catechu L.Chem Pharm Bull，1991，39（5）:1323-1328.

    3  熊炎斌，李德玲，劉持平，等.幾種植物藥對變形鏈球菌生長、產酸，粘附影響的體外實驗.中華口腔醫學雜誌，1997，32（5）:261.

    4  Kashket S，Paolino VJ，Leiwis D，et al.Geucosy tians ferase inhibition by tannin-like Consti tuents of beverages .J Dent Res.1985，64（11）:  212-216.