藏藥短穗兔耳草有效部位的抑菌活性研究

　摘要：目的對短穗兔耳草Lagotis brachystachy Maxim揮發油及全草分萃取段進行了抑菌活性研究。方法選擇金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、傷寒沙門氏菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌為代表菌種, 篩選出了對所選細菌的生長具有明顯抑製作用的抗菌活性部分。結果短穗兔耳草揮發油、石油醚萃取部分、醋酸乙酯萃取部分、正丁醇萃取部分都具有部分活性。結論短穗兔耳草揮發油對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抑菌活性，石油醚萃取部分對5種細菌都不敏感，醋酸乙酯萃取部分對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大腸埃希菌有抑菌活性，正丁醇萃取部分對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、傷寒沙門氏菌和銅綠假單胞菌有抑菌活性。

　　關鍵詞：短穗兔耳草;   抑菌活性;   提取物

　　Study on Antibacterial Activity of Lagotis brachystachy Maxim

　　Abstract：ObjectiveTo study antibacterial activity of Lagotis brachystachy Maxim. MethodsThe antibacterial activities on Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium ,Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa of all the fractions obtained were tested. ResultsEssential oil, petroleum ether soluble fraction of the plant ethyl acetate soluble fractions of the plant, nbutyl alcohol soluble fractions of the plant were tested respectively. ConclusionAccording to the antibacterial assays, the activity of essential oil is significant to the five germs, while petroleum ether soluble fraction of the plant is the most inactive; ethyl acetate soluble fractions of the plant is significant to Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli; nbutyl alcohol soluble fractions of the plant is significant to Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium, Pseudomonas aeruginosa.

　　Key words：Lagotis brachystachy Maxim；  Antimicrobial effect;   Extraction

   

　　短穗兔耳草Lagotis brachystachy  Maxim為玄參科兔耳草屬植物的全草，藏名直打薩曾，產於海拔2 300~4 100 m的河灘草地、溝邊、樹林空地。分布於我國青海、甘肅、西藏等省區。為常用藏藥的上品。味苦，性平。止血排膿。治肺胃淤血、子宮出血、肺結核、胸腔膿血、培根與赤巴合並症、血熱性化膿症、黃水症等［1~3］。短穗兔耳草顯微特征在《藏藥誌》中有一定描述，該資源在產區也較為豐富，為藏醫常用。有關該植物的抗菌活性尚未見文獻報道，我們對短穗兔兒草的全草分溶劑萃取段進行了抗菌活性研究，篩選出具有明顯抗菌活性的部位，為該藥的進一步研究及綜合開發利用提供一定的理論依據。

　　1  材料與方法

　　1.1  材料短穗兔耳草購自青海湟中藏醫醫院，並經中國科學院西北高原生物研究所黃榮福研究員鑒定。試劑與菌株　MH 瓊脂、MH 肉湯、平板菌落計數瓊脂: 杭州微生物試劑廠; 細菌菌株: 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) CMCC(B) ATCC25923、大腸埃希菌(Escherichia coli) CMCC(B) ATCC25922 : 枯草芽孢杆菌（O901）、銅綠假單胞菌（ATCC27853）、傷寒沙門氏菌（ATCC6539），蘭州大學基礎醫學院免疫學教研室提供。所用試劑均為分析純。

1.2  方法

　　1.2.1  短穗兔兒草的預處理取幹燥短穗兔耳草4.0 kg粉碎，用95%工業乙醇浸泡提取3次，7 d/次。回收乙醇，提取浸膏(260 g)溶於熱水中，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取。分別減壓回收溶劑，依次得到總浸膏、石油醚、醋酸乙酯、正丁醇部分和水溶性部分。揮發油部分製備方法如下：取石油醚萃取部分5 g，加入150 ml乙醚溶解，再加入300 ml蒸餾水進行水蒸汽蒸餾，收集溜出液；用乙醚萃取6次，無水硫酸鈉幹燥，減壓蒸餾回收乙醚，得到淺黃色油狀液體，密封保存，待用。

　　1.2.2  短穗兔兒草有效部位抗菌活性分析［3,4］菌液製備：取實驗菌株接種於MH瓊脂平板培養基中，35℃培養14 h，用MH液體培養基製備菌懸液，菌液濃度1.5×108CFU （colony forming unit，CFU）・ml-1備用。含藥物紙片製備：將藥物溶解後，滅菌備用。每張紙片（直徑6 mm）加藥物樣品10 μl，陰性對照是助溶劑，空白對照生理鹽水；陽性對照是慶大黴素溶液。K－B法 ：取菌液濃度為1.5×108CFU・ml-1的菌株0.2 ml，均勻塗布整塊MH瓊脂培養基表麵，室溫2～5 min後，貼加含藥紙片，置入35℃恒溫培養箱培養16～18 h，精確測定其紙片周圍抑菌環直徑的大小，結果以mm表示。結果見表2。編號和濃度見表1~2。

　　表1  樣品編號（略）

　　表2  短穗兔耳草揮發油及浸膏的抑菌活性（略）

　　2  結果

　　由上表可見，短穗兔耳草揮發油對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抑菌活性，且隨劑量的加大而增強。對大腸埃希菌、銅綠假單胞菌和傷寒沙門氏菌不敏感。短穗兔耳草總浸膏對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和傷寒沙門氏菌有抑菌活性，濃度增大，抑製作用也增加。對大腸埃希菌和銅綠假單胞菌不敏感。石油醚萃取部分對5種細菌都不敏感。醋酸乙酯萃取部分對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和枯草芽孢杆菌有抑菌活性，濃度增大，抑製作用也增加。對銅綠假單胞菌和傷寒沙門氏菌不敏感。正丁醇萃取部分對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、銅綠假單胞菌和傷寒沙門氏菌有抑菌活性，對金黃色葡萄球菌濃度增大，抑製作用也增加。對其它細菌，濃度影響不大。對大腸埃希菌不敏感。水溶性成分隻對金黃色葡萄球菌有抑菌活性，對其它4種細菌不敏感。

　　3  討論

短穗兔耳草正丁醇和水溶性成分對金黃色葡萄球菌有較強的抑菌活性。對於大腸埃希菌，隻有醋酸乙酯部分對有抑菌活性，其它成分均不敏感。正丁醇部分和總浸膏對枯草芽孢杆菌都有較強的抑菌活性。對銅綠假單胞菌，僅正丁醇部分敏感，有抑菌活性，其它成分均不敏感。對於傷寒沙門氏菌，正丁醇部分和總浸膏都有抑菌活性。如果這些成分合用，則對5種細菌都有抑製作用，這符合中藥用藥的科學方法。至於總浸膏沒有的活性，在其萃取部分卻表現出來了，也許和濃度有關，這體現了中藥作用的複雜性。

 

作者：楊雲裳， 張應鵬，馬興銘， 李春雷， 蘇策 ， 師彥平《時珍國醫國藥》

　　參考文獻：

　　［1］  中國科學院西北高原生物研究所. 藏藥誌［M］.西寧:青海人民出版社，1991:253.

　　［2］  青海省生物研究所. 青藏高原藥物圖鑒［M］.西寧:青海人民出版社，1972:214.

　　［3］  甘肅省衛生局.甘肅中草藥手冊［M］.蘭州:甘肅人民出版社，1974：122.

　　［4］  倪語星，王金良，徐英春. 抗微生物藥物敏感性實驗規範［M］.上海: 上海科學技術出版社，2002.

      ［5］  邊才苗.白花蛇舌草提取物的抑菌作用研究［J］.時珍國醫國藥,2004, 21(1)：33.