無菌體液細菌培養的新方法探討

【摘要】  目的：探討無菌體液培養的最佳方法。方法：對278份無菌體液標本用雙相液體培養基法和直接接種法培養分離細菌。結果：雙相液體培養基檢測278份標本，40份培養出細菌，陽性率為14.4％，直接接種法培養19份標本培養出細菌，陽性率為6.8％，經SPSS 11.5軟件處理，χ2檢驗，P<0.01,差異有非常顯著性。結論：用雙相液體培養基法培養無菌體液標本，可明顯提高細菌檢出率，是較好的方法。

【關鍵詞】  無菌體液；細菌培養；雙相液體培養基

    無菌體液(胸腹水、關節液、膽汁、膿液等)標本細菌培養是診斷各種細菌感染的一種重要方法。直接接種法(傳統方法)細菌培養陽性率低,往往易造成誤診,為改變上述現狀,作者經過兩年的研究,終於發現一種新的細菌培養方法，即能做到床邊接種又能增菌分離，現報告如下。

　　1  材料和方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  標本來源 

　　278份標本為我院住院患者標本，其中胸腔積液52份，腹水51份，腦脊液49份，腹透液53份，膽汁37份，膿液36份。

　　1.1.2  培養基 

　　雙相液體培養基(上海奧普生物醫藥有限公司提供)。

　　1.2  方法

　　1.2.1  標本采集

　　1.2.1.1  雙相液體培養基接種法 

　　臨床醫生床邊采樣(立即接種)，無菌操作采集無菌體液標本≥3 ml,注入雙相液體培養瓶內, 充分混勻,並覆蓋整個固相培養基,立即送實驗室，置35℃孵育箱培養。

　　1.2.1.2  直接接種法 

　　用接種環直接接種血平板、巧克力平板和麥康凱平板，置35℃孵育箱培養。

　　1.2.2  結果判斷 

　　次日將培養瓶取出,觀察液體是否混濁,固相是否有菌落和菌苔生長,若無菌生長或混濁,繼續培養。如有菌生長,立即塗片染色鏡檢、鑒定和藥敏實驗，48 h無菌生長,報告未見細菌生長。

　　1.2.3  鑒定 

　　塗片、染色分屬後，采用珠海黑馬生物鑒定板進行鑒定、藥敏［1，2］。

　　2  結果

　　2.1  兩種方法檢測分離出的細菌標本數 

　　用雙相液體培養基檢測278份標本，40份培養出細菌，陽性率為14.4％。胸腔積液標本陽性8份，陽性率15.4%,腹水標本陽性8份，陽性率15.7%,腦脊液標本陽性5份，陽性率10.2%,腹透液標本陽性8份，陽性率15.1%，膽汁標本陽性6份，陽性率16.2%,膿液標本陽性5份，陽性率13.9%；而用直接法培養，僅有19份標本培養出細菌，陽性率為6.8％。各標本培養出的陽性標本數分別是：胸腔積液5份，腹水4份，腦脊液2份，腹透液3份，膽汁3份，腦脊液2份；陽性率分別是：9.6%、7.8%、4.1%、5.7%、8.1%、5.6%。經統計學軟件SPSS 11.5處理，χ2檢驗，P＜0.01,結果差異有非常顯著性。

　　2.2  兩種方法檢出時間及陽性率 

　　用雙相液體培養基培養檢出40株細菌，18 h～24 h檢出38株（95％），24 h～48 h檢出2株（5％）；直接法培養檢出19株細菌，18 h～24 h檢出16株（84%），24 h～48 h檢出3株（16%），各菌屬細菌檢出時間情況見表1。表1  雙相液體培養基和直接法各菌屬細菌檢出時間份(略)

2.3  雙相液體培養基內檢出細菌種類 

　　278份標本在雙相液體培養基內檢出40株細菌，腸杆菌屬15株（37.5％），葡萄球菌屬8株（20.0％），腸、鏈球菌屬6株（15.0％），非發酵菌6株(15.0%)，真菌5株（12.5％），各菌屬檢出情況見表2。表2  雙相液體培養基檢出的細菌種類份(略)

　　3  討論

    雙相液體培養基是由固相和液相組成。固相是一塊透明的瓊脂麵，固定在瓶內壁的一側，含多種營養物質，能觀察到菌落和菌苔，直接作鑒定和藥敏。液相肉湯也含有豐富的營養成分，如多種生長因子、氨基酸、血紅素、維生素B6等，除常見菌生長良好外，苛養菌也生長較好。

    本研究從278份體液標本中分離出40株細菌，其陽性率為14.4％，而直接接種法278份標本隻分離出19株細菌，陽性率為6.8％，經χ2檢驗（P<0.01)，差異有非常顯著性。雙相液體培養基陽性率比直接接種法高1倍多。該培養基陽性檢出率高的主要原因有：做到標本及時接種（床邊接種），而直接接種（傳統方法）從采樣到接種耗時較長，尤其不能及時接種時，易造成某些細菌死亡，影響培養結果。標本接種量大，約3 ml，而直接接種法標本量少，約10 μl。雙相液體培養基固相可以分離細菌，液相具有增菌作用，其營養成分豐富，適宜大部分細菌快速生長。每天8時、11時、15時、18時四次充分混勻，及時接種，有利於細菌快速生長，提高檢出率。

    表1顯示：該培養基陽性檢出時間，24 h內檢出陽性數占95％，24 h～48 h內檢出陽性數5％，於直接接種法陽性檢出基本一致，與儀器血培養儀作體液標本培養相比檢出時間快一倍［3］。因為儀器陽性報警後，需要轉種分離分純18 h～24 h後才長出細菌。

    278份標本在雙相液體培養基內檢出40株21種細菌，尤其是檢出苛養菌，還培養出既往用直接接種法很少培養出的少見菌，說明培養基適合多種細菌生長。從表2檢出細菌構成比的情況看，前三位是腸杆菌科細菌（37.5％）、葡萄球菌屬（20.0％）、非發酵菌（15.0％），與文獻報道一致［4，5］。

    此法從采樣到培養操作簡單，由醫生直接接種，標本送實驗室，不需轉種平板，直接放入孵育箱培養，固相長出菌後可作鑒定藥敏，48 h未見細菌生長可發陰性報告。

綜上所述，雙相液體培養基能做到體液標本及時接種，操作簡單，節省時間，陽性檢出率高，結果快速準確，雙相液體培養基檢測法是快速診斷患者細菌感染的一種較好的方法。

 

 作者：王升，張紅升 《實用醫技雜誌》

【參考文獻】

  　　［1］葉應嫵，王毓川.全國臨床檢驗操作規程［M］.第2版.南京：東南大學出版社，1997：437575.

　　［2］張卓然，倪語星.臨床微生物學和微生物學檢驗［M］.第3版.北京：人民衛生出版社，2006，278.

　　［3］張智潔,孫繼梅,劉勇.應用VITAL-200全自動血培養儀.進行血液及無菌體液培養的臨床評價［J］.中華醫院感染學雜誌,2002,12(1):7778.

　　［4］蔣燕群,衛國,倪語星.應用全自動血培養儀提高血液、無菌體液培養陽性率［J］.中華醫學檢驗雜誌,1999,22（2）：7173.

［5］王湛.使用雙相血培養瓶進行臨床血液及無菌體液培養結果分析［J］.河北醫藥,2001,23(1):5152.