222株克雷伯菌的β內酰胺酶檢測及耐藥性分析

［摘　要］ 目的：研究臨床分離的克雷伯菌對常用抗生素的耐藥性及產酶情況，指導臨床用藥。方法：KB法作抗生素敏感試驗，同時用相關方法檢測超廣譜酶(ESBLs)。結果：肺炎克雷伯菌檢出產酶菌株78株，占25％，其他克雷伯菌未檢出產酶菌株，產酶組與非產酶組對β內酰胺類抗生素(氨苄西林除外)及其他抗生素的耐藥性差異有顯著性(P＜0.01)。

　　［關鍵詞］ 克雷伯菌；耐藥性；青黴素酶；頭孢菌素酶；ESBLs

　　克雷伯菌為條件致病菌，是醫院感染中常見的致病菌之一，可引起呼吸道、泌尿道、膽道、創傷等感染，也可引起敗血症。近年來，由於廣譜抗生素的廣泛使用、產β內酰胺酶菌株的出現和耐藥率上升，給臨床治療造成困難。我們將我院2004年12月至2005年12月臨床標本分離的222株克雷伯菌，用KB法進行藥敏試驗，用酸法檢測青黴素酶、頭孢菌素酶，雙紙片法確證試驗檢測ESBLs，現報告如下。

　　1.1　菌株來源　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　我院2004年12月至2005年12月住院及門診患者各類臨床標本中共分離222株克雷伯菌，其中痰155株，尿液24株，血液24株，體液12株，膿液及其他分泌物7株。

　　1.2　培養基及抗生素紙片　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　MH培養基，本室自製。KB抗生素紙片：頭孢唑啉(CZ)、頭孢呋新(CXM)、環丙沙星(CIP)、複方新諾明(SXT)、慶大黴素(GM)、亞胺培南(IPM)、氨曲南(ATM)、阿米卡星(AN)、氨苄西林(AMP)、氨苄西林／克拉維酸(AMP／CA)、頭孢噻肟(CFX)、頭孢噻肟／克拉維酸(CFX／CA)、頭孢他啶(CAZ)、頭孢他啶／克拉維酸(CAZ／CA)、頭孢呱酮(CPE)、頭孢呱酮／舒巴坦(CPE／SB)為北京天壇藥物生物技術開發公司出產。用WHO標準菌株：大腸埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603作質控。

　　1.3　結果判斷　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　β內酰胺酶、青黴素酶、頭孢菌素酶均采用酸法［1］，以青黴素G為底物檢測青黴素酶，以CZ為底物檢測頭孢菌素酶；ESBLs采用CAZLdCAZ／CA、CFX與CFX／CA雙紙片確證試驗［2］，CAZ／CA或/和CFX／CA比各自不加CA的紙片抑菌環直徑>5 mm，判為產ESBLs株。

　　2.1　菌屬中各菌種的分離率　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　見表1。肺炎克雷伯菌177株，占79.7％；產酸克雷伯菌24株，占10.8％；植生克雷伯菌15株，占6.8％；臭鼻克雷伯菌6株，占2.7％。與相關報道一致［3］。表1　克雷伯菌屬中各菌種的分離率項目（略）

　　2.2　菌屬中各菌種的產酶情況　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　產酸克雷伯菌、植生克雷伯菌、臭鼻克雷伯菌未檢出產酶菌株。肺炎克雷伯菌檢出產酶株78株，占肺炎克雷伯菌總株數的44.1％，與相關報道一致［4］，見表2。表2　78株產酶肺炎克雷伯菌的產酶情況（略）注：未發現單獨產頭孢菌素酶的菌株。

　　2.3　177株肺炎克雷伯菌對16種抗生素的藥敏情況，見表3。表3　177株肺炎克雷伯菌對16種抗生素的耐藥率(略)

由於β內酰胺類抗生素在臨床上的廣泛使用及不合理使用，使細菌對其耐藥率有逐年上升的趨勢。細菌對此類抗生素的耐藥機製，主要為產生各種不同類型的β內酰胺酶，通過水解和非水解方式破壞β內酰胺環，使抗生素失活［5］。本組實驗177株肺炎克雷伯菌就有78株產酶，占44.1％，其產酶組與非產酶組除對β內酰胺類藥物的耐藥率差異有顯著性外(P<0.001)，對喹諾酮類、氨基糖苷類及磺胺類藥物的耐藥性差異也有顯著性，表現了耐藥基團的相關性和聯鎖性［６］。β內酰胺酶的研究，往往從底物的輪廓與抑製物的輪廓兩個方麵分析。我們的實驗證明，非產酶組的99株肺炎克雷伯菌和45株其他克雷伯菌，對AMP全部耐藥，但均能被CA抑製，按Bush最新分類法應該認為：這些非產酶菌株，實際可能產生被CA抑製的兩組酶中的青黴素酶或窄譜頭孢菌素酶，隻是由於實驗底物的局限性，而未被檢出。按NCCLS規定，產ESBLs菌株，不管青黴素類或頭孢菌素類抗生素，藥敏結果是否敏感都視為耐藥。本實驗中，CAZ、CFX、CPE這三種三代頭孢，在產酶組藥敏實驗中，表型雖然為67％、29％、27％敏感，因產ESBLs，臨床治療往往無效，都視為耐藥。ESBLs是由質粒介導的能賦予細菌對頭孢菌素類和單酰胺類抗生素及青黴素類耐藥的一類酶，可在菌株間轉移和傳播，本次藥敏結果表明，產ESBLs的肺炎克雷伯菌對孢菌素類和單酰胺類抗生素高度耐藥，對氨基糖苷類和喹諾酮類耐藥性也較高，與相關報道一致，給臨床治療帶來很大困難。在本次實驗中，亞胺培南顯示出很高的抗菌活性，敏感率為100％，這與國內多數報道一致［7］。這是因為亞胺培南具有獨特的結構，它不受包括ESBLs在內的β內酰胺酶的影響，而呈現持續的殺菌作用及保持有效的抗菌活性［8］。綜上所述，肺炎克雷伯菌在做常規藥敏試驗時，必須同時檢測β內酰胺酶，特別是ESBLs，來補充常規藥敏的不足。在加強質粒β內酰胺酶檢測的同時，要求臨床醫生提高用藥技巧，將誘導作用強的抗生素單用，對酶不穩定的藥物和對酶穩定的藥物聯用，以達到提高療效，控製耐藥菌株的目的。

作者：周冰，錢厚明 《實用醫技雜誌》

　　［1］陸永綏，陳秀樞，邢旺興.六種β內酰胺酶定性試驗方法評價及其臨床應用［J］.中華醫學檢驗雜誌，1993，16(6)：328.

　　［2］National Committee for ClinicalLaboratory Standards.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing.Ninthin for matonal supplement［J］.NCCLS documents M100S9,Pennsy Nnia，NCCLS,1999：1799.

　　［3］朱德全，季海生。VITEK32對肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌超廣譜β內酰胺酶的檢測觀察［J］.中華醫院感染學雜誌，2003，13(2)：191193.

　　［4］熊白誌，朱德妹，張元嬰.臨床分離的肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌中超廣譜β內酰胺酶檢測［J］.中華醫學雜誌，2002，21(10)：14761479.

　　［5］黃怡.常用抗生素耐藥機製及對策［J］.國外醫藥抗生素分冊，1999，20(1)：28.

　　［6］周惠平.臨床細菌學檢驗麵臨的挑戰［J］.中華醫學檢驗雜誌，1999，22(1)：12.

　　［7］孔海深，汪寶貴，顧毅，等.超廣譜β內酰胺酶肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌的耐藥性［J］.中華醫學檢驗雜誌，2000，23(1)：44.

［8］韓善橋，馬驄，等.大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產超廣譜β內酰胺酶檢測及耐藥性分析［J］.中華微生物和免疫學雜誌，2001，12(21)：86.