四種中藥對10株大腸埃希菌產酶臨床株體外抗菌的實驗觀察

摘要 目的: 觀察所選4種中藥的水提取物對產超廣譜β－內酰胺酶( ESBLs) 大腸埃希菌臨床株體外抑製作用 方法:采用MH瓊脂平板稀釋法, 測定中藥對測試菌的最低抑菌濃度(M IC) 結果: 五味子對產酶大腸埃希菌臨床株的抗菌作用最好，黃連次之結論: 五味子 黃連對產酶臨床株有抑製作用，為進一步開發新中藥抗菌藥物提供了前期的依據。

關鍵詞    中藥  大腸埃希菌臨床株  β－內酰胺酶 

　  大腸埃希菌是臨床標本中最常分離的致病菌,由於其產超廣譜β-內酰胺酶( ESBLs) 的比率越來越高,使臨床治療選藥困難而倍受關注【1】。中藥抗菌有著悠久的曆史並具有多數抗生素所不具備的優點。因此我們選擇了四種中藥對大腸埃希菌產酶臨床株進行體外抗菌試驗,現報道如下。

1 　材料和方法

1. 1 　實驗材料

1. 1.1　實驗菌株　由陝西中醫學院附屬醫院微生物室提供, 並經上海複星微生物鑒定及藥敏分析係統鑒定 

1.1.2　質控菌株: 用大腸埃希菌ATCC25922，肺炎克雷伯菌ATCC70063 進行質量控製監測。

1.1.3 　藥品和培養基　藥敏紙片和MH 瓊脂購自法國梅裏埃公司。中藥 購置陝西百姓樂醫藥連鎖公司。配製按說明書及全國臨床檢驗操作規程進行。

1.2實驗方法

1.2.1中藥水煎劑製備　取上述4 味中草藥,分別稱重,切細磨碎,加10 倍量水, 浸泡1 h, 用微火加熱煮沸30 min (注意添加蒸餾水),過濾。藥渣再加同量的水,加熱100 ℃30 min ,過濾,將兩次濾液合並, 蒸發得濃縮液濃度為1kg/1L,滅菌後備用。    

1.2.2菌懸液的製備（直接菌落法）：　挑取培養18～24 h 的純菌, 用無菌生理鹽水調試至0. 5 麥氏比濁單位, 其含菌量為1. 5×108CFU/ m l， 再1∶10稀釋, 使其含菌量為1. 5×107CFU/ m l菌懸液,備用。

1.2.3ESBLs 的檢測 在MH 瓊脂上分別貼上頭孢他啶、頭孢他啶/ 克拉維酸及頭孢噻肟、頭孢噻肟/ 克拉維酸紙片。置於37 ℃,16 h 後觀察結果,任何一組紙片加克拉維酸比不加克拉維酸的抑菌環直徑大於5 mm 的為陽性, 否則為陰性。用大腸杆菌A TCC 25922 、肺炎克雷伯菌A TCC 700603 分別做陰性、陽性質控對照。

1.2.4藥物最低抑菌濃度（MIC) 測定　采用NCCLS (美國國家臨床實驗室標準委員會) 推薦的瓊脂二倍稀釋法, 將M－H 瓊脂培養基配成含生藥量500  250   125   62.5   31.25  15.63  7.81  3.91  1. 95mg/ ml共9個藥物濃度。第9和10為對照。用1微升移液器點種, 每點含菌104個, 35 ℃培養18～24 h , 次日觀察結果。

2 結果  4種中藥中對10 株臨床菌株的抑菌作用見下表

表1 　中藥抗菌試驗

表2 四種中藥對10株產ESBLs 大腸埃希菌的MIC 的測定結果（mg/ml）

3 討論

      近年來,由於抗生素的不合理應用,使細菌的耐藥性增強,多重耐藥菌株不斷增加,在醫院的各類感染中,革蘭陰性細菌仍是主要的感染菌,而其中又以大腸埃希菌為多[2 ] 。目前針對非產酶大腸的中藥研究較為普遍,但對產超廣譜β-內酰胺酶大腸埃希菌臨床菌株的中藥方麵研究卻鮮有報道,本研究為開發中藥抗菌藥物提供廣闊的應用前景以及實踐依據。

從表2 中可見黃連對9株實驗菌的MIC為62.5mg/ml，五味子對8株實驗菌的MIC為31.25mg/ml，可見五味子對產超廣譜β-內酰胺酶大腸埃希菌臨床株抗菌作用優於黃連,黃柏和黃芩。而五味子屬於收澀藥,因此中藥對於產ESBL s 大腸埃希菌臨床株的抗菌活性和中藥的主要功能並不一致。

      中藥中不含酰胺鍵,ESBL s 對其就沒有水解作用。加上中藥的成分複雜,用藥後與動物機體有多種作用機製,除了直接抗菌作用外, 還具有增強機體免疫功能, 誘導自身抗菌活性等作用。一般在臨床不易形成耐藥。本次實驗預示了五味子和黃連可能具有廣泛的臨床應用前景。但是上述實驗僅僅是體外藥物敏感試驗, 隻是將藥物與致病菌直接接觸,  也僅能反映藥物的體外抗菌活性。由於沒有機體的參與, 並不能完全說明藥物在體內的作用,因此我們還將繼續通過建立動物模型,設定客觀的觀察評價標準, 進行研究和探討。

 

參考文獻

1張　敏，張迎春.產β-內酰胺酶菌株感染臨床治療選藥研究[J].臨床薈萃,2005，20（10）：576－577

2 古東東等. 臨床標本細菌分離及細菌耐藥性監測[J ] . 中華醫院感染學雜誌,2003 ,13 (1) :67～70.