【摘要】 ［目的］調查我院2006年9月～2007年8月住院患者送檢標本分離的銅綠假單胞菌對亞胺培南的耐藥水平，並分析亞胺培南耐藥株對其他常用抗菌藥物的耐藥性。［方法］臨床標本分離的銅綠假單胞菌用常規K-B方法進行藥物敏感性試驗，若結果判定為耐藥和中介，則進一步采用瓊脂倍比稀釋法檢測銅綠假單胞菌對亞胺培南及其他10種抗菌藥物的MIC。［結果］銅綠假單胞菌對亞胺培南的耐藥率為13.7%，22株耐亞胺培南的銅綠假單胞菌對10常用種抗菌藥物的耐藥率也普遍較高，有3株銅綠假單胞菌對受試的11種抗菌藥物全部耐藥。［結論］銅綠假單胞菌對亞胺培南的耐藥率較高，並對多種抗菌藥物耐藥，應引起高度重視。
【關鍵詞】 銅綠假單胞菌；亞胺培南；MIC；耐藥率
Surveillance of Resistant Level of Pseudomonas Aeruginosa to Imipenem and the Analysis of Antimicrobial Susceptibility
Abstract：［Objective］To survey the imipenem（IMP）resistance of Pseudomonas aeruginosa isolated from hospitalized patient，and analysis of antimicrobial susceptibility of imipenem-resistant strains.［Methods］The MIC values of resistance of Pseudomonas aeruginosa to IMP and other 10 antimicrobial agents were tested by agar-plating diluted technique.［Results］The resistant rate to IMP resistance of Pseudomonas aeruginosa was the percent of
Key words：pseudomonas aeruginosa；imipenem：minimal inhibitory concentration；resistance
銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA），是一種常見的院內獲得性感染條件致病菌，在醫院感染病原菌的檢測中檢出率最高，對多種抗菌藥物表現為天然或獲得性耐藥。碳青黴烯類抗生素如亞胺培南曾是臨床上使用的抗PA較為有效的藥物，但近年來隨著亞胺培南在臨床的廣泛應用，PA對其耐藥率呈上升趨勢，上海地區銅綠假單胞菌對亞胺培南的耐藥率高達20％［1］。我們對分離的PA對亞胺培南的耐藥情況進行了調查，同時就耐藥株對其他常用抗菌藥物的敏感性進行分析，為臨床治療提供依據。
1 材料與方法
1.1 菌株來源
全部40株銅綠假單胞菌均分離自我院2006年9月至2007年8月臨床各科送檢的住院患者標本。臨床分離株的鑒定按照常規K-B方法進行，按照美國臨床和實驗室標準委員會（CLSI）標準進行操作和判斷，並判定為耐藥和中介菌株，除去重複菌株，用15%甘油LB肉湯保存於
1.2 培養液和藥敏抗生素
Mueller-Hinton（MH）瓊脂購自法國生物梅裏埃公司，批號：811813401。亞胺培南（IPM）購自杭州默沙東製藥有限公司，批號：06121；美羅培南（MEM）購自日本住友製藥株式會社，批號：10080；呱拉西林（PRL）購自華西製藥集團，批號：20070401；呱拉西林/他唑巴坦（TZP）購自美國惠氏-百宮製藥有限公司，批號：B770308；頭孢他啶（CAZ）購自海南海靈製藥有限公司，批號：060801；頭孢吡肟（FEP）購自中美上海施貴寶製藥有限公司，批號：0604791；頭孢呱酮（CP）購自輝瑞製藥有限公司，批號：75835017；頭孢呱酮/舒巴坦（SCF）購自輝瑞製藥有限公司，批號：65839296；環丙沙星（CIP）購自拜耳醫藥保健有限公司，批號：BXBWE67；氨曲南（ATM）購自江西製藥有限公司，批號：0512071；丁胺卡那（AK）購自旭東海普藥業有限公司，批號：060213。
1.3 抗菌藥物最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）測定
采用瓊脂倍比釋法測定各種抗菌藥物的MIC。根據2006年美國臨床實驗室標準化協會（CLSI/NCCLS）標準，亞胺培南的MIC≤4μg/ml為敏感，MIC≥16μg/ml為耐藥，MIC值在4～16μg/ml之間的菌株歸入耐藥組進行比較。
2 結果
2.1 共分離培養獲得銅綠假單胞菌161株，通過K-B紙片擴散法檢出亞胺培南耐藥或中介的菌株共40株。
2.2 銅綠假單胞菌對亞胺培南的MIC測定
本組40株PA中MIC≤4μg/ml的菌株18株，MIC≥16μg/ml的菌株10株，MIC介於4～16μg/ml之間的菌株12株，故2006年9月～2007年8月我院共檢出耐亞胺培南的銅綠假單胞菌22株，占同期全部檢出的銅綠假單胞菌161株的13.7%，其耐藥率為13.7%（22株/161株）。
2.3 銅綠假單胞菌的標本分布
22株銅綠假單胞菌分別來自呼吸道標本14份，膿液3份，中段尿2份，血液1份，創麵分泌物1份，腹水1份。
2.4 耐亞胺培南的銅綠假單胞菌對其他抗生素的敏感率 22株PA對其他10種被認為對銅綠假單胞菌療效較好的受試抗菌藥物的敏感性，以呱拉西林/他唑巴坦最為敏感，敏感率為72.7%，其次為呱拉西林和頭孢呱酮，敏感率分別為68.2%和63.7%。對環丙沙星耐藥率最高，為68.2%。另外，發現3株對所有抗生素全部耐藥的多重耐藥株。
3 討論
隨著其臨床應用的增加，銅綠假單胞菌對其耐藥率呈上升趨勢。我院2006年9月～2007年8月從住院患者送檢的各類標本中共分離出銅綠假單胞菌161株，經K-B紙片擴散法檢出耐亞胺培南的菌株共40株。本試驗采用美國國家臨床實驗室標準委員會（NCCLS，2002年）所推薦的瓊脂倍比稀釋法，PA對常用抗菌藥物的MICs瓊脂倍比稀釋法測定MIC後，發現40株PA中耐亞胺培南的菌株僅為22株，較K-B法低，分析可能的原因：K-B紙片擴散法為初步篩查，瓊脂倍比稀釋法則更精準地測定出抗菌藥物的MIC，且所有操作步驟均有標準菌株作質控保證。傳統的紙片法雖簡便易行，但要求嚴格的質控和操作才能獲得可信的結果，如藥敏紙片厚度或紙片受潮等因素，都可能導致結果出現偏差。瓊脂稀釋法可精確測定細菌的MIC，但操作煩瑣，工作量大，故臨床測定亞胺培南的耐藥率仍依賴於K-B法，但需嚴格執行質控，並結合臨床，以確保檢驗結果。
耐亞胺培南銅綠假單胞菌對其他抗菌藥物也存在一定的耐藥性，根據本組試驗結果，22株亞胺培南耐藥的銅綠假單胞菌總體上對呱拉西林/他唑巴坦、呱拉西林、頭孢呱酮和頭孢他定有一定敏感性，可作為臨床用藥選擇時的參考。由於ＰＡ對常用抗生素的敏感性不斷下降以及耐藥性不斷變化，而不恰當的治療會篩選出多種多樣的耐藥菌株，這對抗菌藥物的應用提出了嚴峻的挑戰。本組22株耐亞胺培南的PA中就發現3株對所有抗生素全部耐藥的多重耐藥株，對於由這類多重耐藥菌株引起的呼吸道感染，可采用多粘菌素或妥布黴素霧化吸入治療。
本組22株耐亞胺培南的銅綠假單胞菌對美羅培南的敏感率為50%，提示亞胺培南與美羅培南耐藥機製不盡相同。美羅培南是不經過特殊通道擴散的，細菌外膜的低通透性合並主動外排係統起作用是它對PA形成低水平耐藥性的主要機製。國外有研究表明［7］，對美羅培南耐藥的銅綠假單胞菌94.7％對亞胺培南耐藥，而對亞胺培南耐藥的菌株隻有47％對美羅培南耐藥，且美羅培南體外活性是亞胺培南的2倍，對部分耐亞胺培南菌株有效，故臨床上可美羅培南治療亞胺培南耐藥的菌株，但仍需密切監測藥敏結果。
作者：李群 丁星 張杏怡 周新 《浙江中醫藥大學學報》
【參考文獻】
［1］Wang F，Zhu DM，Hu FP.Surveillance of bacterial resistance in Shanghai in 1999［J］.National Medical Journal of China，2001，7(2) ：117.
［2］朱德妹，汪複，胡付品，等.2002年上海地區細菌耐藥性監測［J］.中華傳染病雜誌，2004，22（3）：154-159.
［3］蔣偉，常東，黃誌紅，等.臨床檢出細菌的耐藥現狀分析［J］．中華醫院感染學雜誌，2002，12（9）：646-648.
［4］徐盈斌，利天增，祁少海，等.1993-1999年燒傷科細菌學調查及耐藥性分析［J］.中華燒傷雜誌，2002，18（3）：159-162.
［5］Gladstone P，Rajendran P，Brahmadathan K.Incidence of carbapenem resistant nonfermenting gram negative bacilli from patient with respiratory infection in the intensive care units［J］.Indiian Journal of Medical Microbiology，2005，23（3）：189.
［6］胡佩村，李婉霞，廖一平.呼吸內科下呼吸道感染的感染的細菌分布及藥物敏感分析［J］.中華醫院感染學雜誌，2006，16(6)708-710.
［7］Troillet N，Samore MH，Carmeil M，et al.Imipenem resistant Pseudomonas aeruginosa respiratory infections due to contaminated nebulizers［J］.J Hosp Infect，1996，33：63.
