泰州地區醫院常見致病菌的幾種消毒劑耐藥性分析

【摘要】  　　目的 調查泰州地區各醫院主要致病菌的消毒劑耐藥情況。 方法 在泰州地區5所醫院的各類環境、高危科室、使用中消毒劑進行采樣，在樣品中分離和鑒定4種常見致病菌（金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，大腸杆菌，綠膿杆菌），選擇分離得到的菌株，在常用高中低效消毒劑內分別選取一種（84、碘伏、醋酸氯已定），測定消毒劑對菌株的最低抑菌濃度（MIC）、最低殺菌濃度（MBC），與標準菌株比較，確定耐藥菌株，並統計分析。 結果 分離4種致病菌共62株，包括金黃色葡萄球菌10株，表皮葡萄球菌14株，銅綠假單胞菌28株，大腸埃希菌10株。金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸杆菌、綠膿杆菌對碘伏、醋酸氯已定未發現抗藥性產生；表皮葡萄球菌、大腸杆菌、綠膿杆菌對84未發現抗藥性產生；分離出6株金黃色葡萄球菌對84已經產生抗藥性（耐藥率60%）。 結論 醫院消毒劑使用不合理，尤其是高效消毒劑濫用，已致使醫院菌株對常用消毒劑產生抗藥性。

 

【關鍵詞】  消毒劑 金黃色葡萄球菌 耐藥性

 

　　消毒滅菌是控製醫院感染的重要方法，隨著消毒劑的應用，細菌對消毒劑逐漸產生耐藥性是不可避免的。消毒劑抗藥性在全球呈上升趨勢，而相關研究在國內尚處於起步階段。本文在醫院常用消毒劑使用和常見病原體分布調查的基礎上對常見致病菌耐藥情況進行研究分析，旨在為為衛生行政部門製訂安全、合理、有效的消毒劑使用規範提供參考，預防和減少耐藥性細菌的產生。

 

　　1  材料與方法

 

　　1.1  標準菌株  革蘭陽性球菌以金黃色葡萄球菌ATCC6538為標準菌株，革蘭陰性杆菌以大腸杆菌8 099為標準菌株。取第10代營養瓊脂24h培養物，製成 5×108cfu/ml 金黃色葡萄菌、大腸杆菌懸液。

 

　　1.2  主要試劑和儀器  0.5%碘伏和0.5%醋酸氯已定購自興化市醫療用品公司;“84”消毒液(原液有效含氯量為4%,試驗時用無菌蒸餾水稀釋200倍)為江蘇愛特福公司產品; ATB自動細菌鑒定儀和生化鑒定試劑條為法國生物梅裏埃產品。

 

　　1.3  致病菌分離和鑒定  參照國家標準GB/T 18204-2000［1］和《伯傑氏細菌手冊》［2］的相關條目處理樣品、分離和鑒定4種致病菌，大量樣品用ATB自動細菌鑒定儀鑒定。

 

　　1.4  實驗方法［3］

 

　　1.4.1  有效含量測定  有效碘、有效氯、醋酸氯已定含量的測定按《消毒技術規範》2002版的有關方法進行檢測。

 

　　1.4.2  中和劑選擇試驗  采用中和劑鑒定試驗分別對每種消毒劑的中和劑進行選擇，最終確定0.5%碘伏用1.0%硫代硫酸鈉、0.5%醋酸氯已定用5.0%吐溫80、84消毒液用1.0%硫代硫酸鈉。

 

　　1.4.3  細菌繁殖體懸液的製備  取凍幹菌種管，超淨台內打開，以吸管加入適量營養肉湯，輕柔吹吸數次，使菌種融化分散。取含5.0 ml營養肉湯培養基試管，滴入少許菌種懸液，置37℃培養24h。用接種環取第1代培養的菌懸液，劃線接種於營養瓊脂平板上，於37℃ 培養24h。挑取上述第2代培養物中典型菌落，接種於營養瓊脂斜麵，於37℃ 培養24h，即為第3代培養物。取菌種第6代的營養瓊脂斜麵新鮮培養物，用吸管吸取5.0ml稀釋液加入斜麵試管內，反複吹吸，洗下菌苔。隨後，用吸管將洗液移至另一無菌試管中，在手掌上振敲 80 次，以使細菌懸浮均勻。初步製成的菌懸液，先用細菌濃度比濁測定法粗測其含菌濃度，然後以含1%蛋白腖的PBS稀釋至5×108cfu/ml。試驗中應將試驗用菌懸液進行活菌培養計數，其作用濃度應為5×105cfu/ml～5×106cfu/ml。細菌繁殖體懸液暫存在 4℃冰箱內備用，不得過夜。

 

　　1.4.4  最小抑菌濃度試驗(MIC)  采用試管係列稀釋法。在雙倍營養肉湯5ml中加入0.1ml菌懸液，再加入經過倍比稀釋的不同濃度消毒劑5ml，接種時，應由低濃度向高濃度依次接種，留2支不加消毒劑，作為陽性對照，取2支含營養肉湯的試管，作為陰性對照。所有樣本經37℃培養48h，觀察試管肉湯的變化，以抑製細菌生長的最低濃度為MIC值。試驗重複3次，以其平均值確定醫院常見菌株和標準菌株的MIC值。

 

　　1.4.5  最小殺菌濃度試驗(MBC)  采用試管係列稀釋法，並用中和劑中止殘留消毒劑的作用。在雙倍營養肉湯5ml中加入0.1ml菌懸液，再加入經過倍比稀釋的不同濃度消毒劑5ml，同樣設陽性和陰性對照，作用4h後用中和劑1.5ml中止殘留消毒劑的作用；10min後，經37℃培養48h，觀察試管肉湯的變化，無細菌生長的最低濃度即為MBC值。試驗重複3次，以其平均值確定醫院常見菌株和標準菌株的MBC值。

 

　　2  結果

 

　　2.1  致病菌分離鑒定  在醫院各類環境中共分離微生物90株，其中有金黃色葡萄球菌10株，表皮葡萄球菌14株，綠膿杆菌28株，大腸埃希菌10株。

 

　　2.2  3種消毒劑對金黃色葡萄球菌的抑菌、殺菌結果  結果顯示，碘伏、醋酸氯已定對7株金黃色葡萄球菌MIC一致，分別為312.5mg/L、5.0mg/L，小於或等於標準菌株的MIC；對7株金黃色葡萄球菌MBC一致，分別為625mg/L、500mg/L，等於標準菌株的MBC。另外，分離出一株金黃色葡萄球菌MIC值為800mg/L,MBC值為800mg/L，大於標準菌株的MIC、MBC值。見表1。

 

　　表1  3種消毒劑對10株金黃色葡萄球菌MIC、MBC試驗結果（略）

 

　　注：試驗溫度為20～22℃，試驗重複3次，質控樣品結果無異常，此表中未列出。

 

　　2.3  3種消毒劑對表皮葡萄球菌的抑菌、殺菌結果  實驗發現表皮葡萄球菌對84、碘伏、醋酸氯已定的MIC分別在200mg/L、312.5mg/L、5.0mg/L，小於或等於標準菌株的MIC。MBC分別在400mg/L、625mg/L、500mg/L，小於或等於標準菌株的MBC。

 

　　2.4  3種消毒劑對大腸埃希菌MIC、MBC試驗結果  消毒劑對各菌株的MIC、MBC結果如下：同一消毒劑對不同菌株的MIC、MBC值均相同，84、碘伏、醋酸氯已定分別在400mg/L、312.5mg/L、3.2mg/L，與標準菌株的MIC相同。MBC分別在800mg/L、625mg/L、12.5mg/L，與標準菌株的MBC相同。

 

　　2.5  3種消毒劑對綠膿杆菌的抑菌、殺菌結果  在本試驗條件下，測得84、碘伏、醋酸氯已定對綠膿杆菌的MIC分別為200mg/L、312.5mg/L、3.2mg/L，小於或等於標準菌株的MIC。MBC分別為800mg/L、625mg/L、12.5mg/L, 小於或等於標準菌株的MBC。

 

　　3  討論

   

　　醫院感染麵臨的挑戰主要來自三個方麵，即病原體、人類本身以及周圍環境,消毒滅菌是控製醫院感染的重要途徑。通過消毒和滅菌工作，可殺滅或消除醫院環境中、醫療用品及日常生活用品上的病原體，切斷傳播途徑，消除環境儲源，防止醫院感染發生。但在上世紀60年代，國外陸續發現許多菌株對消毒劑產生抗性，最早的是季胺鹽類（QAC），隨之是雙胍類如洗必太，近年來又發現對酚類、醇類、碘類的抗性。隨著細菌對消毒劑抗性的產生，其殺菌效能日見低下，不得不一再更新。

   

　　本次實驗選擇醫院分離的4種常見致病菌，在常用高中低效消毒劑內分別選取一種，通過最小抑菌濃度試驗和最小殺菌濃度試驗檢測致病菌對常用消毒劑的抗藥性。結果顯示分離出的10株金黃色葡萄球菌中有６株對84已經產生抗藥性。但未對其他消毒劑產生抗藥性。從金黃色葡萄球菌對84的單一耐藥性提示，細菌對某種消毒劑產生耐藥性並不一定對其他類型消毒劑同時產生耐藥性，從醋酸氯已定對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的MIC、MBC值不同，提示消毒劑醋酸氯已定對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌有不同的抑菌機製。細菌對消毒劑產生抗藥性的原因具有多樣性，因此消毒劑適量合理的配伍使用會減少耐藥的產生和提高效率。

   

　　本研究建立在對本市各大醫院消毒劑使用情況和醫院常見病原體分布情況調查的基礎上，覆蓋麵較廣，基本代表本市實際情況。但實際篩選出的耐藥菌株樣本量較少，菌種隻限於金黃色葡萄球菌，沒有能進一步完善耐藥質粒譜，沒有能完成質粒序列的測定。

 

作者：楊海玉    作者單位：泰州市疾病預防控製中心微生物檢驗科,江蘇 泰州 225300.

【參考文獻】

  　　［1］ 中華人民共和國國家標準GB/T 18204-2000.公共場所衛生標準檢驗方法［S］. 北京：國家質量技術監督局，2001,1.

　　［2］ R.E.布坎南,N.E.吉本斯,等.伯傑氏細菌手冊（中科院微生物研究所譯）［M］.北京：科學出版社，1984.

　　［3］ 衛生部.消毒技術規範（2002版）［S］.北京：中華人民共和國衛生部,2002,11.