鮑曼不動杆菌院內感染株的耐藥及同源性分析

 鮑曼不動杆菌(AB)由於其對營養無特殊要求，抵抗力強，在幹燥物體表麵可存活時間長,在住院病人中定植率為75%［１］,所以極易播散並引起院內感染。同時，由於長期抗生素選擇壓力使多重耐藥株明顯增加,特別是對碳青黴烯類的耐藥,給臨床抗菌治療帶來困難。作者對分離的223株鮑曼不動杆菌進行了抗菌藥物敏感性試驗，並對27株耐碳青黴烯類抗生素的菌株進行基因分型，結合臨床資料分析感染源頭及途徑，現報告如下。

 

　　1  臨床資料

 

　　1.1  菌株來源

 

　　223株AB均分離自2006年1至12月本院住院病人，菌株使用ATB細菌鑒定儀（法國BioMerieux公司）鑒定。標準菌株為大腸埃希菌ATCC25922和銅綠假單胞菌ATCC27853。

 

　　1.2  儀器和試劑

 

　　水解酪蛋白(Mueller-Hinton,MH)瓊脂購自法國梅裏埃公司，呱拉西林(PIC)、呱拉西林/他唑巴坦（TZP）、頭孢呱酮/舒巴坦（CPS）、頭孢他啶（CAZ）、頭孢吡肟（FEP）、氨曲南（ATM）、亞胺培南（IPM）、美洛培南（MER）、慶大黴素（GEN）、阿米卡星（AKN）、環丙沙星（CIP）、複方新諾明（TSU）頭孢噻肟（CTX）等藥敏紙片均為OXOD公司生產， MERCK公司的蛋白酶K，Seakem Gold瓊脂糖，DNA限製性內切酶Sma-I為寶生物工程（大連）有限公司產品。

 

　　1.3  藥敏試驗

 

　　采用K-B法測定13種抗菌藥物的敏感性，並根據CLSI/NCCLS 2006年版［２］要求進行抗生素敏感性判斷。

 

　　1.4  脈衝場凝膠電泳

 

　　參考《分子細菌學方法與臨床應用》［3］，切1～3mm膠塊，浸入150μl酶切體係中（其中含Sma-I30IU），37℃酶切過夜。使用電泳儀（Bio-rad）,電壓6V/cm，電泳時間16h，脈衝參數0.22～18s，120°，電泳溫度14℃。電泳結束後，將凝膠取出，用0.5μg/ml的Goldview染色30min,去離子水脫色30min，用凝膠成像儀讀膠分析。

 

　　2  結果

 

　　2.1  抗菌藥物敏感性試驗

 

　　見表1。表1  223株鮑曼不動杆菌對13種抗菌藥物的藥敏結果（略）

 

　　2.2  PFGE結果

 

　　PFGE 電泳圖(圖1)，聚類分析結果(圖2)。聚類分析提示27株菌株有7個克隆，其中3、4、6、9、10、11、12、13、14、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27等19株為同一克隆（A1型）。1號和2號株為同一克隆（A2型），16號和17號株為同一克隆（A3型）， 5、7、8、15各自為不同克隆。

 

　　2.3  臨床資料分析

 

　　27株耐碳青黴烯類抗生素的菌株來自呼吸科3株、神經外科7株、重症監護室17株。標本來源：來自血液2株、靜脈導管頭1株，其餘均為痰標本。重症監護室的17株菌株為A1、A2、A3克隆，神經外科7株為A1克隆。病人因病情危重均不可避免的長時間住院，同時又使用人工氣道或各種侵入性操作、免疫抑製劑、廣譜抗生素等。

 

　　3  討論

 

    鮑曼不動杆菌係條件致病菌，普遍存在於環境中，是臨床標本和院感監測中最常分離到的革蘭陰性非發酵菌。近年來，鮑曼不動杆菌感染率不斷上升，已成為重症監護室、神經外科和呼吸科抗感染治療最棘手的問題。本試驗中,223株鮑曼不動杆菌對亞胺培南和美洛培南的敏感性最高(87.89%),但已出現耐碳青酶烯類抗生素的菌株，由於舒巴坦對鮑曼不動杆菌有獨特的抑酶活性,使CPS具有78.48%的敏感性明顯比TZP高。第三、四代頭孢菌素及ATM的耐藥率為58.74%～70.40%,青酶素類、氨基糖甙類、TSU、CIP的耐藥性均很高。 2002年1至12月全國細菌耐藥性監測網所屬57家三級甲等醫院調查發現，AB菌臨床分離率為4.2%［４］，並發現AB菌對17種臨床常用藥物的耐藥率4.3%～86.9%。解放軍總醫院對呼吸機相關肺炎的病原學和耐藥性監測發現，AB菌分離率達11.5%,對15種臨床常見藥物的耐藥性更高達10.5%～100%［５］。

　　

    本PFGE聚類分析提示，27株菌株有7個克隆，其中3、4、6、9、10、11、12、13、14、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27等19株為同一克隆（A1型），1號和2號株為同一克隆（A2型），16號和17號株為同一克隆（A3型）， 5、7、8、15各自為不同克隆。對比臨床資料發現重症監護室的17株菌株為A1、A2、A3克隆，神經外科7株為A1克隆，這種在同一時間、空間分布的集中趨勢，認為是大規模的暴發流行，需聯合院感管理部門進一步監控。PFGE高重複性的分辨能力，其分型結果是控製院內感染的重要基礎，可以幫助臨床發現潛在的危險因素，進而及時切斷流行菌株的來源及傳播途徑。當發現相似耐藥譜的鮑曼不動杆菌的流行，就必需采取嚴格的措施，防止交叉感染。因鮑曼不動杆菌耐受肥皂，所以應注意無菌觀念，防止造成醫源性感染。嚴格消毒呼吸機管道，定期取樣送檢，同時應加強抗菌藥物的合理使用和細菌耐藥性的檢測及監測，是防止和延緩鮑曼不動杆菌耐藥率增長的必需措施。

作者：應建飛 陳雲波 俞燕紅    作者單位：315040 浙江省寧波市鄞州人民醫院 310003 浙江大學醫學院附屬第一醫院

 

【參考文獻】

  　　1 張櫻. 不動杆菌感染及耐藥機製的研究進展. 國外醫學流行病學傳染病學分冊，2005,32(2):109～１12．

　　2 National Committeefor clinical laboratory standard. Perfermance standards for antimicrobial susceptibility testing. Eleventh informational Supplement. M100-S15 Vol 25. Pennsylvania:NCCLS, No.1,January 2006.

　　3 Neil Woodford.Alan P.johnson. 分子細菌學方法與臨床應用.西安：世界圖書出版公司，1998.43～47.

　　4 馬越，李景雲，張新妹，等.2002年臨床常見細菌耐藥性監測.中華檢驗醫學雜誌，2004，27（1）：38～45.

5 蔡少華，張進川，俞森洋，等.呼吸機相關肺炎的病原學和耐藥性監測.中華醫院感染學雜誌，2004，14（4）：365～368.