影響微生物檢驗質量的因素分析

 為了保證微生物檢驗結果的準確性和可靠性，微生物實驗室必須建立質量控製體係，充分考慮到影響檢驗結果的因素並加以控製，可提高微生物檢驗工作的質量。

 

 

    1  實驗室設施和環境條件的要求

 

 

    由於受經濟和技術條件限製，目前不少微生物實驗室仍將實驗用房簡易分隔成操作間和緩衝間，操作間又分隔成許多小隔離區，如黴菌區等，並靠安裝幾支紫外線消毒燈，以達到隔離與消毒的目的。這種實驗室格局在一部分醫療單位還在使用，並以菌落數等一些技術參數為控製指標，這些顯然已跟不上醫學發展的要求。較完善的微生物實驗室一般應具備無菌實驗室、淨化實驗室、生物安全實驗室等，淨化實驗室應采用封閉過濾除菌，通風方式、吊頂、隔牆、圍護全部采用彩鋼板，地麵作環氧樹脂自流平處理，並設置非淨化區、更衣區、淨化區。淨化實驗室應定期進行風速監測和及時更換過濾層罩，條件有限的實驗室可使用超淨工作台；無菌室應配紫外線消毒裝置，在使用前後都應用紫外線燈照射消毒，並定期進行紫外線強度和空氣質量監測；生物安全實驗室除了正常管理、維護之外，要注意空氣過濾的質量和工作人員的隔離防護。

 

 

    2  實驗操作人員的作用

 

 

    微生物實驗室的質量可以通過正確的操作來體現，例如，革蘭氏染色，可以通過對標準質控菌株的染色來反映操作和試劑的質量，這是有形的、看得見的，然而，質量保證更依賴工作人員的認知能力。一個受過充分培訓的、能夠嚴謹地分析實驗結果的工作人員，不是隻能忠實地記錄實驗數據，而是可以實施更加嚴格的標準。在微生物檢驗中會遇到一些不常見結果或一些散在地發生的錯誤，例如，試驗中發現的少見菌、從未見過的藥敏表型、汙染率的增加等，往往通過一些質控方法難以檢查出來，但具有質量意識的微生物技術人員能對這些現象質疑，及時糾正，保證結果的準確可靠。

 

 

    3  采樣及培養基和試劑的購置

 

 

    有質量保證的樣品是獲得正確檢驗結果的基礎。雖然樣品種類繁多，但不同品種的樣品都要按照國家規定的標準方法進行采樣，每個樣品要登記並注明名稱、數量、批號、采樣日期等。不同的樣品要采用不同的運輸和保存方法，防止樣品在運輸和保存過程中微生物數量的改變。微生物實驗室可根據各自情況參照國際食品規格委員會（ICMSF）推薦的食品采樣方法和標準建立可靠的質量評價方法以保證樣品合格［1］。購置培養基和試劑時要求供應商提供產品質控證書，盡量選擇通過ISO9001的生產廠家購買。培養基和試劑使用前首先通過外觀、批號、pH值、滅菌要求、選擇性等進行初步評估，還要用陽性對照菌株做質控，按照培養基和試劑標簽說明的貯藏條件保存，不同批號的培養基和試劑不要混合使用。自配的染液每周必做質控。如果有條件可參照國際食品微生物與食品衛生委員會（ICFMH）提供的關於培養基質控方法進行質控。

 

 

    4  樣品處理與培養

 

 

    按照檢驗目的不同的樣品要采用不同的處理方法。對於固態樣品用均質器以無菌操作方法處理樣品，可調節均質器均質時間處理不同種類的樣品。均質器、培養箱、冰箱等儀器設備要通過計量認證。微生物培養時要準確記錄溫度、氣體濃度等參數，使其嚴格符合檢驗程序要求。定期對實驗用儀器設備進行正確維護、校準和質控［2］。

 

 

    5  菌株保存

 

 

    標準菌株和從樣品中分離出的菌株，其保存方法有多種，最理想的為真空冷凍幹燥法，但這種方法的操作技術難度大，花費高，需特殊設備，一般單位不易做到。而常規瓊脂斜麵保存法，常因傳代次數多，易汙染，易變異。近幾年來，采用卵黃液普通安瓿熔封法超低溫保存菌種，效果很好［3］。

 

 

    6  檢驗方法的選擇

 

 

    檢驗方法是微生物實驗室質量保證的重要步驟，它必須統一、準確可靠。檢驗方法優先采用國家規定的標準檢驗方法或國際標準、行業標準、地方標準規定的檢驗方法，無上述標準時，經協商也可采用企業標準。在檢驗過程中還要注意三點：（1）做平行樣，以保證結果的可比性；（2）設立空白對照，以防止其他汙染而導致的結果不準確；（3）設計合適的質控頻率，進行質控試驗。將質控菌株與常規工作一起進行，不能為質控菌株設計單獨操作程序，更不能專人專做。當質控標準菌株的內在敏感性發生改變時要更換新的菌種。

 

 

    7  確證試驗和實驗室校準

 

 

    用陰性、陽性標準菌株做確證試驗，特別在做微生物生化試驗和免疫試驗時一定要設立陰性、陽性對照組。建立試驗室內部失敗報告、內審製度，記錄整個實驗過程中的錯誤信息；參加室間質控評比，不斷提高實驗技術水平；及時更新程序性文件，完善實驗室質量保證體係。

作者：王釘釘  中華醫學研究雜誌 2006年3月 第6卷 第3期

 

 

    【參考文獻】

    1  ICMSF, Sampling for Microbiological Analysis. Toronto, University of Toronto Press, 2nd, 1986.

    2  陳劍剛. B/T15481-2000標準在衛生檢驗質量控製中的應用. 中國衛生檢驗雜誌,2002,12(4):487.

    3  沈德心,封誌純,杜江.一種實用菌種的保存方法.中國衛生檢驗雜誌,2003,13(6):757.