摘 要 目的:探討沙眼衣原體K血清型感染細胞IL-6分泌水平及其意義。方法:用ELISA雙抗體夾心法檢測沙眼衣原體感染細胞培養上清IL-6水平的變化。結果:沙眼衣原體感染McCoy細胞在沙眼衣原體感染後36h、48h、60h、IL-6分泌量分別為1.3655±0.0046、2.9601±0.0104、4.0408±0.0722，均顯著高於相應的對照組（P<0.05），並且隨感染時間的延長IL-6分泌水平顯著地逐步增高（P<0.05）。結論:沙眼衣原體K血清型感染可誘導McCoy細胞分泌IL-6，並且呈時間依賴性。
關鍵詞 沙眼衣原體;McCoy細胞;白細胞介素-6
沙眼衣原體（Ct）的致病機製涉及機體的免疫防禦和免疫病理反應，白細胞介素6（IL-6）作為重要的炎症因子和免疫介導因子可能參與沙眼衣原體感染的致病過程。據報道，Ct能誘導體外培養的上皮細胞、人單核細胞、淋巴細胞等多種細胞產生IL-6等細胞因子［1，2］ ，而有關沙眼衣原體K血清型感染的McCoy細胞分泌細胞因子的報道尚少。本文檢測沙眼衣原體K血清型感染的McCoy細胞分泌IL-6水平，旨在為尋求衣原體感染性疾病的防治措施及進一步的研究提供參考。
1 材料
沙眼衣原體K血清型由中山醫科大學寧波教授惠贈，McCoy細胞由湘雅醫學院病毒研究室惠贈，IL-6ELISA試劑盒（晶美公司產品），RPMI-1640（GIBCO產品）。
2 方法
2.1 衣原體增殖
取一瓶單層McCoy細胞，棄上清，加1mL衣原體懸液至培養瓶中，3000r/min離心1h，37℃、5%CO 2 培養箱培養2h，棄上清。加無雙抗的RPMI-1640培養基（含10%小牛血清、1μg/mL放線菌酮），置37℃、5%CO 2 培養箱培養48h取出，凍融，500g離心10min，取上清（含衣原體），分裝於無菌
小試管，70℃冰箱保存備用。
2.2 衣原體滴定
將增殖後的衣原體作係列稀釋，接種於已經形成McCoy細胞單層的24孔培養板，培養48h，用熒光標記的抗衣原體單克隆抗體染色後於熒光顯微鏡下計數感染細胞百分率，並計算ID50值。 2.3. ELISA檢測IL-6含量
在已形成McCoy細胞單層的24孔培養板中接種1ID50衣原體，並設正常細胞對照，3000r/min離心1h，37℃、5%CO 2 培養箱培養2h，棄上清。每孔加含10%小牛血清的RPMI-1640培養基1mL，37℃、5%CO 2 培養箱培養。於36h、48h、60h分別取培養上清，用ELISA雙抗體夾心法檢測IL-6含量（按試劑盒使用說明書操作）。在酶標儀上用405nm波長測OD值。將試劑盒提供的IL-6標準濃度與測得的OD值經SPSS統計軟件做標準曲線，得出回歸方程，根據樣本的OD值計算其IL-6含量。
2.3 統計學處理
實驗結果用均數±標準差（x±s）表示，多組間比較用單因素方差分析，顯著性差異以P<0.05為準。
3 結果
3.1 標準曲線
將IL-6標準品含量與測得的OD值用SPSS統計軟件處理獲得IL-6含量標準曲線（見圖1），得出回歸方程為:Y=1.9505+0.5967LnX（Y為OD值，Ln是以e為底的自然對數，X為IL-6濃 度）。 圖1 IL-6含量標準曲線
3.2. ELISA雙抗體夾心法檢測IL-6的濃度
結果見表1、圖2。Ct感染後36h、48h、60h細胞培養上清中IL-6的含量均顯著高於相應的對照組（P<0.05），且隨感染時間的延長IL-6含量顯著地逐步增高（P<0.05）。 表1 沙眼衣原體感染McCoy細胞分泌IL-6 *與對照比較P<0.05，△與36h Ct組比較P<0.05，▲與48h Ct組比較P<0.05 圖2 沙眼衣原體感染McCoy細胞分泌IL-6的ELISA檢測結果
3 討論
IL-6為具有廣泛生物學效應的細胞因子，具有雙向免疫調節作用，也是機體炎症反應和一係列病理生理過程的重要介質。近年研究表明，Ct的致病機製與機體的免疫防禦和免疫病理過程有關。細菌的脂多糖、病毒RNA、感染產生的中介物質均能刺激感染細胞及免疫細胞產生IL-6。李海燕等報道，沙眼衣原體感染輸卵管性不孕患者輸卵管液中IL-6水平升高，IL-6水平與Ct的亞臨床感
染或持續性感染狀態密切相關 ［3］ 。本實驗用雙抗 體夾心法檢測IL-6分泌水平，結果顯示，Ct感染McCoy細胞引起IL-6分泌水平明顯增高，與文獻報道衣原體感染沙眼衣原體可促進體外培養的上皮細胞、血管內皮細胞、巨噬細胞等分泌IL-6的結果類似 ［1，2］。提示Ct感染後誘導細胞產生的IL-6可能通過調節機體的免疫功能而參與Ct感染的致病過程，且可能影響Ct感染的狀態。上述結果有待體內和臨床實驗進一步證實。
文獻報道，Ct感染的Hela細胞培養上清中24h可檢測到前炎症性細胞因子IL-8顯著增加，72h後達高峰，3d後，IL-8分泌開始下降，可能與Ct繁殖周期48h～72h有關［4］ 。本實驗結果顯示，Ct感染的McCoy細胞在感染後24h分泌前炎症細胞因子IL-6的水平顯著高於對照組，且呈時間依賴性。提示Ct感染的McCoy細胞分泌IL-6的水平也許與Ct的繁殖周期有關。本實驗未檢測衣原體感染72h及72h後IL-6的分泌水平，故有待於進一步研究闡明。
IL-6和TNF、IL-1、IL-8等多種細胞因子協同構成複雜的炎性細胞因子網絡，參與多種炎症性疾病的病理過程 ［5］。有文獻報道，Ct感染的U937細胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α等多種細胞因子［6］ ，可能沙眼衣原體感染的McCoy細胞還產生其他的細胞因子，具體產生那些細胞因子及其相互作用，有待進一步研究。
作者：張雄鷹 查國章 武延雋 餘平 《長治醫學院學報》 2005 年 12 月 第 20 卷 第 4 期
參考文獻
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［3］ 李海燕，梁占光.沙眼衣原體感染輸卵管性不孕患者輸卵管液中腫瘤壞死因子α和白細胞介素6的測定.中華婦產科雜誌，2000，35（7）:411.
［4］ 餘俊龍，餘 平，李立新，等.沙眼衣原體感染誘導Hela細胞分泌IL-8和IL-10.湖南醫科大學學報，2003，28（2）:174.
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