因病理組織切片常規蘇木紫伊紅染色(下簡稱常規染色)尚能辨認黴菌,所以組織切片的黴菌染色體未得到應有的重視。現將筆者過去黴菌感染的組織切片,進行了6種黴菌染色比較,結果如下。
1 材料與方法
從過去黴菌感染或可疑黴菌感染的19例屍檢和5例活檢標本中(主要是念珠菌\曲黴菌及毛黴菌感染,也有個別的放線菌及隱球菌感染),選出有關的組織蠟塊,重作厚4μm切片,脫蠟後分別進行革蘭染色,PAS染色,Grialey氏醛品紅-PAS法染色(1.2.3),Grocott-Gomori二氏烏洛托品硝酸銀法染色(4.5),Mallory氏纖維蛋白改良法(2)及常規染色。
PAS染色胳改用0.2%淡綠代替蘇木紫作對比染色。Grialey氏醛品紅-PAS染色法,用1%高碘酸氧化30min代替5%鉻酸氧化。
Grocott-Gomori二氏烏托品硝酸銀染色法,亦用1%高碘酸氧化30min代替5%鉻酸氧化,並以0.2%淡綠代替蘇木紫作對比染色。
2 結果
革蘭染色切片內,念珠菌為藍色(革蘭陽性),曲黴菌和毛黴菌則為紅色(革蘭陰性),但毛黴菌著色較淺,結構不清。因係中性紅對比染色,細胞核亦染為紅色,與黴菌孢子鑒別有困難.放線菌及隱球菌均未著色。
PAS法染色,以淡綠作對比染色較蘇木紫為佳,黴菌均顯紅-紫色菌叢中隔及孢子均明顯可見。
Grialey氏醛品紅-PAS法染色,黴菌絲及孢子均染成程度不同的紅-紫紅色。但背景亦為淺紫色,對比不鮮明,但黴菌著色深,鏡下觀察仍較常規紫色者為優。
Grocott-Gomori二氏烏洛托品硝酸銀染色法,黴菌均染成黑色,當染色深淺適當時,切片中菌絲的壁,孢子的包膜及菌絲中隔均呈深黑色,菌絲內部顯暗褐色,結構清楚,改用淡綠對比染色,較蘇木紫伊紅染色為鮮明,適合觀察和攝影。
Mallory氏纖維蛋白改良法,黴菌染為藍-深紫色,背景是蘇木紫及伊紅染色,因此近似常規染色,隻是黴菌較深。
在常規染色中,黴菌的孢子及菌絲一般均染成淺藍色,較細胞核為淺,因為是藍色,有時孢子難以與細胞核或已破碎的細胞核鑒別,而菌絲也長不能和已擠壓成絲狀的細胞核鑒別。所以,常規染色和其他黴菌染色比較,發現常規染色存在以下問題:(1)每張切片中所見到黴菌的數量遠不及其他黴菌染色多;(2)在常規染色中,有3例未找到黴菌的切片,做了黴菌染色即能證實有黴菌存在,如1例皮膚燒傷的病例,臨床懷疑有黴菌感染,常規染色不能找到黴菌,而黴菌染色證實有毛黴菌感染。1例患者用了大量的激素及抗生素後死亡,腎髒有一膿腫,內有多核巨細胞,不象化膿性細菌感染。曾疑為黴菌所致,常規染色未能找到黴菌,經黴菌染色後,證實膿腫內有念珠菌。存在另1例致死性中線肉芽腫患者,用了激素等治療後,肺內有念珠菌\曲黴菌及毛黴菌混合感染,死於十二指腸降部穿孔,穿孔部有壞死及炎症,疑為黴菌所致,但切片曾多處會診,均因找不到黴菌而不能肯定.這次做黴菌染色,在穿孔邊緣及壞死區有少數念珠菌,肯定是黴菌感染所致的穿孔;(3)常規染色能見到黴菌數量少,且易與其他組織結構混淆,造成分類錯誤或遺漏,經黴菌染色糾正分類錯誤或遺漏的有7例,多數是毛黴菌與念珠菌混淆。有1例肺內常規染色僅見到多數孢子,未見菌絲,當時不能分類,隻能診斷酵母菌類黴菌感染,經黴菌染色後,發現有菌絲存在,隻不過量少而已,而改正為念珠菌感染。
1年後,重新觀察切片時,常規染色及Grocott-Gomori氏洛托品硝酸銀染色均無褪色,其他染色均有不同程度的褪色。淡綠對比染色幾乎完全褪色。
作者:談勤明 胡有長 中華醫藥雜誌 2004年12月 第4卷 第12期
作者單位:330006江西醫學院形態中心教研室
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