不同廠家鱟試劑對細菌內毒素限量檢查的影響初探

中國藥典2000年版沿用鱟試劑法用於0.9%氯化鈉注射液等藥物的細菌內毒素限量檢查。藥典規定0.9%氯化鈉注射液中細菌內毒素量不得超過0.5Eu*ml－1。在實際工作中我們通常使用標示靈敏度均為0.5Eu*ml－1的廈門、福州兩地的鱟試劑廠產品。在使用中我們通過鱟試劑靈敏度測定實驗發現由於生產廠家不同，部份鱟試劑的實測靈敏度與標示靈敏度有差異而導致檢測同一檢品時，用標示靈敏度相同的鱟試劑出現不同結果，因而可能引起結果判斷差異。

1　實驗材料

　　廈門鱟試劑靈敏度標示量0.5Eu*ml－1，0.1ml*支－1，批號20010605。福州鱟試劑靈敏度標示量0.5Eu*ml－1，0.1ml*支－1，批號為20011110。細菌內毒素工作標準品10Eu*ml－1，批號20011106，超純水批號為20010906。實驗前所用器皿需經處理，去除可能存在外源性內毒素。常用的方法是250℃幹烤至1小時，也可用其它適宜方法，並應確證不幹擾細菌內毒素的檢查。

2　實驗及結果

　　按中國藥典2000年版規定進行鱟試劑靈敏度複核，結果：內毒素濃度(Eu*ml－1)：1，0.5，0.25，0.125；內毒素加量(ml)：0.1，0.1，0.1，0.1；鱟試劑加量(ml）：0.1，0.1，0.1，0.1；福州鱟試劑反應管組1：+，+，－，－；組2：＋，＋，－，－；組3：＋，＋，－，－；組4：＋，＋，－，－；廈門鱟試劑反應管編組1：＋，＋，－，－；組2：＋，－，－，－；組3：＋，－，－，－；組4：＋，－，－，－。其陰性對照組實驗結果為陰性。福州鱟試劑靈敏度測定值為λc＝1－1g(Σx)/(4)＝0.5Eu*ml－1；廈門鱟試劑靈敏度測定值為λc＝lg(zx)/(4)＝0.71Eu*ml－1；中國藥典規定鱟試劑靈敏度λc在0.5λb－2λb之間即符合規定也是說複核結果應在標示值的50%～200％之間。以上兩種不同廠家的鱟試劑均符合規定要求。

　　用上述兩種鱟試劑按藥典法對本院製劑0.9%氯化鈉注射液(批號為20020225)行細菌內毒素限量檢查結果：廈門鱟試劑，檢品批號20020225，結果“－”；福州鱟試劑，檢品批號20020225，結果“＋”。平行重複以上實驗，結果均一致。福州鱟試劑為20020225批號的0.9%氯化鈉細菌內毒素限量檢查判定為不符合藥典規定，而廈門鱟試劑對同一產品判定為符合規定，結果相互矛盾。

3　討論

　　以上實驗提示由於不同廠家鱟試劑標示靈敏度相同而實際靈敏度不同導致同一樣品產生完全不同的檢測結果。中國藥典2000年版規定0.9%氯鈉注射液細菌內毒素含量不得超過0.5Eu*ml－1，即小於或等於0.5Eu*ml－1，因此我們通常采用標示靈敏度為0.5Eu*ml－1的鱟試劑進行檢測。但是，當實際靈敏度與標示靈敏度產生誤差時有可能導致檢測結果的假陽性或假陰性。在本實驗中批號20010605廈門鱟試劑的實測靈敏度為0.71Eu*ml－1，也就是說對於濃度小於0.71Eu*ml－1的細菌內毒素不敏感。對於含細菌內毒素為0.5Eu*ml－1～0.71Eu*ml－1的樣品實測結果仍顯示陰性，這就是我們通常所說的假陰性，這是實測靈敏度小於標示靈敏度λc＞λb的情況，當實測靈敏度大於標示靈敏度即λc＜λb時，結果就易出現假陽性，如950708批號福州鱟試劑λc＝0.25Eu*ml－1對0.9%氯化鈉注射液出現假陽性。實驗結果表明，在可能的情況下，我們應選用標示靈敏度與實際靈敏度相符的鱟試劑進行檢測，避免出現因鱟試劑本身造成的判斷失誤，對於λc＜λb或λc＞λb的情況應該對供試品進行稀釋或濃縮後進行檢測。稀釋(濃縮)倍數n＝(x)/(n)式中λ即該鱟試劑實際靈敏度(Eu*ml)－1，x即供試品的內毒素限度(Eu*ml)－1。

　　靈敏度一定的某批鱟試劑與不同濃度的內毒素形成凝膠反應的時間與濃度間存在下列關係logC＝blogT＋loga［1］式中C即內毒素濃度(Eu*ml)－1，T即生成凝膠的時間(分鍾)，a、b即常數。不同靈敏度的鱟試劑a、b值不同，可按下列方法測定：取不同濃度的內毒素，分別測定與某批鱟試劑生成陽性反應的時間，每一濃度不少於兩管，分別取對數後，求lgC與lgT所成回歸線的斜率b及截距lga。利用該批鱟試劑測定樣品時，根據生成凝膠反應所用的時間即可求出樣品的內毒素含量，對λc與λb不相符的鱟試劑亦可用此法進行限量檢測，結果更精確。為了方便使用，建議法定部門和生產單位應注意鱟試劑的質量檢查。

作者：泉州市人民醫院(362000)　陳麗芸    福建醫藥雜誌 2002年第24卷第3期

 

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