三種檢測方法對結核病診斷價值的比較研究

【摘要】  目的：比較塗片法、實時熒光定量聚合酶鏈反應(FQPCR)法、血清學方法檢測血清結核抗體,對結核病臨床診斷的應用價值。方法：用塗片法和FQPCR法對1 714份呼吸道和體液標本同步檢測，同時檢測1 714份血清標本的結核抗體。結果：1 714份送檢標本中，總陽性率塗片法為16.3%，FQPCR法為31.6%，血清結核抗體為43.3%；三種方法的靈敏度、特異度分別為:塗片法34.4%和100%,FQPCR法66.4%和100%,血清結核抗體80.7%和90.5%。結論：FQPCR法對結核病尤其是肺外結核的診斷具有較高應用價值；血清學方法檢測血清結核抗體可作為菌陰、兒童、無痰患者及肺外結核診斷的一項重要參考指標；塗片法直觀、簡便、價廉,仍將是結核病實驗診斷的重要手段。

 

【關鍵詞】  結核；塗片法；實時熒光定量PCR；血清結核抗體

 

    近年來，隨著全球人口流動性的增加，艾滋病的流行以及耐藥結核菌株的出現，結核病的發病率不斷增加，已成為嚴重威脅人類生命健康的傳染性疾病，受到世界各國的廣泛關注。而我國又是全球結核病高負擔的國家之一，據2004年WHO估計，我國每年新發結核病例占全球每年新發病例的15%，感染人數居全球第二［1］。而結核病的早期診斷和有效治療是控製結核病疫情的關鍵。因此，準確、快捷、簡便的實驗室檢測方法對於結核病的早期診斷和及時治療具有十分重要的意義。本文應用塗片法、FQPCR法和血清學方法檢測結核抗體，三種實驗室方法對結核病臨床診斷的應用價值進行了比較研究，報道如下。

 

　　1  材料和方法

 

　　1.1  對象

 

　　為我院住院和門診患者，共1 714例。1 714例患者留取一份呼吸道或體液標本，同時抽取1份血液標本。送檢的1 714份呼吸道和體液標本中，痰液標本1 170份，支氣管灌洗液355份，胸腔積液83份，腦脊液52份，尿液32份，膿性分泌物8份，淋巴穿刺液9份，關節液4份，血液標本1 714份。1 714例患者中，臨床確診為結核病者815例，其中塗陰535例，塗陽280例；非結核病患者899例，包括慢性阻塞性肺氣腫、肺癌、肺炎及其他炎症。

 

　　1.2  儀器與試劑

 

　　FQPCR儀器為瑞士RocheLigtcyer基因擴增儀，TBPCR熒光定量檢測試劑盒由中山大學達安基因股份有限公司提供。血清結核分枝杆菌抗體診斷試劑（TBDOT）為上海奧普生物醫藥有限公司生產。

 

　　1.3  檢測方法

 

　　對臨床送檢的1 714份呼吸道和體液合格標本，同一標本同時進行塗片法和FQPCR法檢測，並同時對1 714份血液標本進行血清結核抗體檢測。塗片法按照有關的實驗操作規程進行［2］，FQPCR法和血清結核抗體檢測按照試劑盒說明操作。

 

　　2  結果

 

　　2.1  塗片法和FQPCR法對1 714份呼吸道和體液標本的檢測結果

 

　　見表1。總陽性率塗片法為16.3%，FQPCR法為31.6%,1 714份血清標本結核抗體陽性743份,陽性率43.3%。

表1  塗片法和FQPCR法對1 714份標本的檢測結果例(略)

 

　　2.2  確診病例的檢測結果

 

　　見表2。臨床確診為結核病的815例病例中，塗片法陽性率為34.4%，FQPCR法陽性率為66.4%，血清結核抗體陽性率為80.7%。表2  確診病例的檢測結果例(略)

 

　　2.3  三種檢測方法的比較

 

　　見表3。由此可見，三種檢測方法的靈敏度，特異度分別為：塗片法34.4%和100%，FQPCR法66.4和100%。血清結核抗體80.7%和90.5%。表3  三種檢測方法的比較(略)

 

　　3  討論

 

    長期以來，結核病的實驗室診斷主要依賴細菌學塗片和培養檢查［3］。痰塗片檢查不僅可以明確結核傳染源,而且十分經濟,符合我國國情,具有簡便、快捷、低廉的優點，但其敏感性低。本文1 714份各類標本陽性率僅為16.3%，特別是體液標本，陽性率僅4.8%（9/189）。

 

    近年來,隨著分子生物學技術的飛速發展,PCR技術已被廣泛用於結核病的實驗室診斷［4～6］。本文應用FQPCR熒光定量法,避免了PCR定性技術特異性差,存在假陽性和假陰性等問題。該方法是利用一對結核分枝杆菌特異性引物和一條結核分枝杆菌特異性熒光探針,配以PCR反應液,耐熱DNA聚合酶(Taq酶),四種核苷酸單體(dNTPS)等成分，用體外擴增法檢測結核分枝杆菌基因。該方法的檢測對象是結核分枝杆菌基因保守片段，動態檢測標本中結核杆菌DNA含量，不受細胞表型和耐藥性影響，具有較高靈敏度和特異性。本文的1 714份呼吸道和體液標本，FQPCR法陽性率為31.6%，明顯高於塗片法。尤其是細菌數含量較少的體液標本，FQPCR法的陽性率更是達到了37.6%（71/189）。

 

    而血清學診斷技術對結核病的檢測近年來也有較多報道［7，8］。本文檢測方法係采用純化的結核分枝杆菌特異性外膜抗原，利用斑點金免疫金滲濾試驗（DIGFA）原理，用於人血清中結核抗體的檢測。本文1 714份血清標本陽性率為43.3%，但由於人群中感染結核分枝杆菌十分普遍，廣泛的卡介苗接種等原因，以及結核病患者個體的免疫功能影響等因素，使血清結核抗體測定存在一定的假陽性和假陰性。本文確診的815例結核病患者中血清結核抗體為陰性157例，占19.3%，非結核病患者899例中有85例抗體假陽性，占9.5%，與文獻相符［8］。

 

    綜上所述，FQPCR法用於結核病診斷，其特異性強，為100%（899/899），靈敏度66.4%（541/815），明顯高於塗片法，且操作簡便，隻需2 h～3 h既可完成，對於結核病尤其是肺外結核的診斷具有較高的應用價值。血清學方法檢測結核抗體特異性較高90.5%（814/899），靈敏度80.7%（658/815）,高於FQPCR法和塗片法,且操作簡便、快速、便於推廣、無須特殊精密儀器，可作為結核分枝杆菌陰性、兒童、無痰患者及肺外結核診斷中一項重要參考指標。而塗片法作為結核病最基本的細菌學檢查方法，它所具有的直觀、簡便、價廉等優點，仍將是結核病實驗室診斷的重要手段。

作者：李曉非，李冬玲，施巧霞，陳育林，吳芳華

作者單位：昆明市第三人民醫院，雲南 昆明 650041

【參考文獻】

  　　［1］王隴德.中國結核病控製現狀及展望［J］.中華結核和呼吸雜誌,2006,29:505506.

　　［2］中國疾病預防控製中心.痰塗片鏡檢質量保證手冊［M］.北京:中國協和醫科大學出版社,2004:518.

　　［3］趙雁林,尚美.我國結核病實驗室診斷的現狀［J］.中華檢驗醫學雜誌,2007,30(7):725728.

　　［4］張詡,盧建平.四種結核分枝杆菌檢測方法的臨床應用評價［J］.中國防癆雜誌,2006,28(1):1617.

　　［5］梁曉海,黃平東.實時熒光定量聚合酶鏈反應法檢測肺結核患者痰標本價值的對照研究［J］.現代中西醫結合雜誌,2006,15(3):287.

　　［6］胡海利.熒光雙標記定量檢測對診斷結核病的臨床意義［J］.上海醫藥,2002,23(9):411412.

　　［7］莊玉輝.結核病實驗室診斷新技術研究應用中值得重視的問題［J］.中華結核和呼吸雜誌,1999,22(3):133.

　　［8］陳小玲.血清結核抗體對結核病的診斷價值［J］.現代醫藥衛生，2003，19（5）：530530.