【摘要】 目的研究芒果提取物的體外抑菌效果及其使用的安全性。方法采用二倍稀釋法及瓊脂擴散法，觀察芒果核提取物對常見腸道感染致病菌的體外抑菌作用；用小鼠空腹經口灌胃給予芒果核提取物,觀察小鼠出現的毒性反應、劑量毒性效應的關係及主要靶器官毒性反應的性質和程度。結果芒果核提取物對標準和耐藥誌賀痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌、大腸埃希菌有不同程度體外抑菌作用；小鼠灌胃最大耐受量40 g/kg，相當於臨床用量的50倍。結論芒果核提取物對常見3種腸道感染菌具有較明顯的體外抑菌作用及具有良好的安全性。
【關鍵詞】 芒果核提取物 體外抑菌作用 最低抑菌濃度急性毒性實驗
Abstract:ObjectiveTo study bacteriostasis and its practical safe of Mango seed extract in vitro.MethodsThe in vitro bacteriostasis of Mango seed extract, double-diluted and agar-diffused, on common intestinal infection pathogenic bacteria was observed. Mice were orally adminstered Mango seed extract and toxic reaction, dose-toxic effect relationship and the toxic reaction of the major target organs were observed.ResultsMango seed extract possessed in vitro bacteriostasis in different degree on standard and drug fast Bacillus shigae, Bacillus dysenteriae, maximal tolerated dose of intragastric administration for mice was 40 g/kg, equivalently 50 times clinic dosage.ConclusionMango seed extract possesses in vitro bacteriostasis and is favorable safe on 3 types of common intestinal infection bacteria.
Key words:Mango nuclear extract; In vitro inhibiton; MIC; Acute toxicity
隨著抗生物藥物的被廣泛應用，微生物耐藥性已成為全球關注的嚴峻問題。由於多重耐藥菌、多重感染以及許多新的病原微生物引起的感染對人類健康造成極大威脅，且日趨嚴重，我們從臨床工作中觀察到部分純天然抗生物藥物有很好的抗菌療效。為挖掘芒果核的藥用作用,現將其提取物作體外抗菌作用的研究，同時為了確保其安全性, 根據中藥臨床前毒理學評價的指導原則, 筆者對芒果核進行了急性毒性實驗研究, 為開發利用芒果核資源提供科學根據及臨床應用提供一定藥理學基礎。現報告如下。
1 材料
1.1 芒果核提取物的製備將南寧地區生長成熟芒果核除去堅殼及衣，日光曬幹，取50 g切碎，加水200 ml浸泡，30 min後加熱煮沸，文火15 min濾出，再加水100 ml，按上述方法再次操作濾出藥液，合並兩次藥液，用文火濃縮至50 ml，製成原液備用。
1.2 菌株標準誌賀痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌和大腸埃希菌均由廣西醫科大學微生物教研室提供，耐藥誌賀痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌和大腸埃希菌均由廣西壯族自治區婦幼保健院檢驗科細菌室提供，常規牛肉膏、水解酪蛋白培養基37℃培養24 h後吸取菌液用培養基稀釋，用血細胞計數板計數將菌懸液調整為約106個/ml備用。
1.3 動物清潔小鼠40隻, 雌雄各半, 體重18～ 22 g, 由廣西醫科大學實驗動物中心提供。
2 方法
2.1 最低抑菌濃度（MIC）的測定采用二倍稀釋法測定芒果核提取物MIC，即取12支無菌試管編號，1～10號為一定梯度芒果核提取物含菌液，11號取菌懸液1 ml為不加試驗藥物的菌液對照管，12號管取芒果提取物1 ml為不加菌懸液的藥物對照管，稀釋後的芒果核提取物最終濃度為500，250，125，62.5，31.2，15.6，7.8，3.9，1.95，0.98 mg/ml搖勻後置於37℃的恒溫箱中培養24 h後觀察結果。
2.2 判定標準首先觀察11號菌液對照管細菌呈混濁狀生長，而12號藥物對照管無細菌生長，呈透明狀的前提下，以不出現混濁的最低芒果核提取物濃度為其MIC。
2.3 抑菌實驗將標準和耐藥誌賀痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌、大腸埃希菌分別用取菌環致密接種到血平板營養基表麵,以無菌操作將已用芒果核提取物浸泡的帶有藥液的直徑0. 4 cm的濾紙片貼到培養基上, 37℃培養24 h,觀察測量抑菌環直徑。重複3次,取其平均值。
2.4 急性毒性實驗動物采用雌、雄分別隨機均衡分組法 , 共分兩組, 每組20隻，雌雄各半。采用空腹經口灌胃給藥。各組藥物濃度為最大濃度, 灌胃體積相同, 均為每隻每次給藥0.4 ml, 每隔12 h給藥1次，共給藥兩次，按急性毒性實驗常規方法灌胃［1］，測定芒果核最大給藥量，灌胃前禁食12 h, 但不禁水。對照組給予相同劑量的生理鹽水。
2.5 觀察實驗前先將動物按性別分籠在實驗室群養觀察1 d。給藥後當天密切觀察12 h, 並詳細記錄觀察結果,以後每天上午8～9時及下午15～16時各觀察1 h, 並記錄觀察結果, 共連續觀察14 d。對觀察其中死亡的動物立即進行屍體解剖, 對屍檢中發現異常者, 進行病理切片檢查。
3 結果
3.1 最低抑菌濃度芒果核提取物對臨床常見腸道致病菌的MIC見表1。可見該提取物對臨床常見3種標準及耐藥腸道致病菌有較明顯的體外抑製作用，其中對誌賀痢疾杆菌有較強的抑菌作用，MIC為7.8 mg/ml。表1 芒果核提取物體外最低抑菌濃度測定（略）
3.2 抑菌實驗芒果核提取物對臨床常見腸道致病菌的抑菌圈直徑見表2。表2 芒果核提體外抑菌圈直徑測定（略）
3.3 急性毒性實驗實驗中，小鼠灌服1 d藥物，觀察兩周，兩組均未見動物任何異常反應, 各組動物試驗組體重增長差異無異常變化，芒果核組和空白對照組動物無異常差別，灌藥後14 d，處死小鼠，解剖，肉眼觀察及病理組織學檢查心、肝、脾、肺、腎、腦、小腸，均未發現異常。實驗結果表明，小鼠24 h內共灌胃給予芒果核40 g生藥/kg，即最大耐受量達40 g生藥/kg。
4 討論
芒果核為漆樹科植物芒果Mangifera indica L.的成熟幹燥種子。目前國內外對芒果樹的藥用研究主要是集中在芒果葉提取天然多酚類化合物芒果苷（又名知母寧）上，包括在中樞神經係統、呼吸係統及心血管係統的作用，抗細菌、抗病毒、抗輻射、治療腫瘤和糖尿病，保肝利膽、抗氧化及免疫調節等方麵作用已做了部分研究，也對芒果樹除了芒果核以外不同植株部位的芒果苷含量做了比較，但對芒果核的研究僅限在生藥鑒定方麵。我們通過芒果核提取物進行體外抑菌實驗，發現該提取物對臨床常見3種呼吸道及3種腸道致病菌有較明顯的體外抑製作用［2］,說明該提取物有較廣譜的抑菌作用，芒果核提取物為酸性(pH=4.44)。在1999年就曾有用於治療肺部支原體感染取得良好效果的報告［3］。近期也有用於配伍後治療兒童反複上呼吸道感染［4］及成人慢性胃炎［5］取得良好效果且均未見毒副作用的相關報告，說明其對呼吸道及胃腸道的感染有較好治療作用，其服用對兒童及成人是安全的。本研究通過小鼠做規範的急性毒性實驗更支持這點，我們也觀察到部分臨床治療細菌性痢疾效果很好的病例，故本研究可為臨床使用芒果核治療常見腸道感染性疾病提供藥效學及安全性的理論基礎。
芒果核提取物對耐藥的誌賀痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌及大腸埃希菌也有較明顯體外抑菌作用，這值得我們特別關注，說明該提取物不僅對常見腸道感染標準菌株有明顯的體外抑菌作用，同時對其耐藥菌株也有較明顯的體外抑菌作用，但在人體內抑菌活性如何，可否部分替代耐藥菌株感染的治療尚需進一步研究，臨床應用中觀察到沸水衝泡1 h後飲用比水煎服效果更佳，故其作用機理是否僅僅因其中含有芒果苷具有的抗菌作用［6,7］，還是同時含有其他抑菌成分易揮發或高溫分解尚待進一步分析、研究。
芒果核按毒性分級標準, 屬無毒類物, 可不進行蓄積毒性實驗［8］。用藥1 d，共兩次,觀察14 d， 小鼠血常規、肝腎功能化驗結果未見顯著差異, 7種髒器做病理解剖學肉眼及病理組織學檢查均未見病理學改變, 提示芒果核具有良好的安全性。芒果核是被大量丟棄的廢物，資源相當豐富，價格低廉，值得我們作進一步的深入研究。
作者：莫武桂, 劉華鋼， 鄭陳光， 黃維真， 貝為武， 佘尚揚， 韋蓉 《時珍國醫國藥》
作者單位：廣西壯族自治區婦幼保健院， 廣西醫科大學，
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