生物安全四級(BSL—4)
有些危險的外源性病源，具備因氣溶膠傳播而致實驗室感染和導致生命危險疾病的高度個體風險，有關工作應在BSL—4實驗室中開展。和BSL—4病源有相近或特定抗原關係的病源，也應在該級別中開展工作，在該級別的連續工作和低級別的工作中得到足夠數據的病源除外。實驗室成員應在處理特別危險的傳染源方麵受過特殊和全麵的訓練，應了解標準和特殊操作中一級和二級遏製的作用、遏製設備、實驗室設計性能。實驗由在有關病源方麵受過訓練、並有工作經驗的、有資格的科學工作者監督。實驗室主任嚴格控製進入實驗室。設施應在獨立的建築物內；或在建築物的一個控製區內，但和建築物內的其他區域完全隔離。應製定、實施特殊設施操作手冊。
在設施的工作區內，所有工作應限製在三級生物安全櫃中；或在二級生物安全櫃中，但得使用裝備生命支持係統的一體正壓防護服。BSL—4實驗室經過特殊設計，是一個特殊的工程，可以防止微生物向環境中擴散。
以下的標準和特殊安全操作、設備及設施和BSL—4病源有關。
一、標準微生物操作
1、實驗時，由實驗室主任決定限製進入實驗室。
2、要製定銳器的安全使用規範。
3、所有的操作過程應盡量細心，避免產生氣溶膠。
4、至少每天一次、或有活體灑出時，對工作台麵進行消毒。
5、所有廢物在釋放前，應使用可行的方法消毒，如高壓滅菌。
6、實施控製昆蟲和齲齒動物的程序(參見附錄G)(另發)。
二、特殊操作
l、隻有在實驗過程中或輔助需要而必須進入設施或獨立實驗室的實驗人員，才能授權進入。患有免疫缺陷或免疫抑製的人，存在被感染的危險。另外，對於感染風險大的人、因感染而會致特殊危險的人，如兒童或孕婦，不準進入實驗室或動物房。
監督者對每種情況的估計和決定誰能進入實驗室工作負有最終責任。通過安全措施(如鎖上門)限製進入實驗室。實驗室主任、風險控製負責人、設施物理安全負責人控製人員進入。進入前，要告知潛在危險，通知采取適當安全防護以保證安全。授權進入者要執行通知規定，執行現行所有其他進出程序。所有人要作工作日誌，記錄每次進出日期、時間。應建立實用有效的緊急情況處理程序。
2、當實驗室或動物房中有傳染源和感染動物時，所有入口處的門上應貼有危險警告標誌和常用的生物危險符號，並標明以下信息：有關病源、實驗室主任和其他責任人的姓名表、並表明進入該區的所有特別要求(如，必須免疫或戴口罩)。
3、實驗室主任有責任確保在涉及BSL—4的微生物工作開展之前，所有人員非常熟練掌握標準微生物操作及技能，熟練掌握特定實驗室設施的特殊操作和運行，其中可能包括人致病菌或細胞培養物處理的重要經驗，或由實驗室主任或其他熟悉於獨特的微生物安全操作及技能的、有資格的科研工作者提供的特殊培訓課程。
4、實驗室人員接受有效的、和實驗室中處理或將要處理的病源有關的免疫接種。
5、適當時，收集和儲存適合於所有實驗室人員和其他有風險人員使用的基本血清樣品。根據所處理病源或實驗室的功能，應定期收集其他血清樣品。決定建立血清學監督程序時，應當考慮能否得到有關病源的抗體測試方法；程序中，收集一段時間後，應進行血清樣品的測試，並將測試結果通知參與者。
6、實驗室主任應製定、使用生物安全手冊。要告訴實驗人員特殊風險，實驗人員要閱讀，並在操作和程序中遵照執行。
7、實驗人員及其輔助人員應接受適當的培訓，包括和工作有關的可能存在的風險、防止暴露的必要措施和暴露評估程序。當程序必需改變時，有關人員必須每年更新知識，接受附加培訓。
8、人員隻有通過更衣間和淋浴室進出實驗室。每次離開實驗室時，淋浴消毒。僅在緊急情況下，使用氣塞進出實驗室。
9、在外更衣間脫掉並保存日常衣服。所有進入實驗室的人員，應有並使用整套實驗服，包括內衣、緊身長襯褲和襯衫或連衣褲工作服、鞋子、手套。當離開實驗室並進入淋浴區前，在內更衣間脫掉實驗服。衣服清洗前高壓殺菌。
10、設施中所需用品和物料通過雙門高壓鍋、煙熏消毒艙、或氣塞送入。每次使用後，要對這些裝置適當消毒。雙門高壓鍋、煙熏消毒艙、或氣塞外麵的門牢固的關上後，設施內的人員打開裏側的門取出物料。物料送入設施後，門上保險。
11、必須經常對所有汙染的銳器采取高度預防措施，包括針頭和注射器、玻片、移液管、毛細管和手術刀。
a．針和注射器或其他銳器應限製在實驗室內，類似灌腸、靜脈切開放血、或實驗動物液體吸出等，可以用其他器具的，就不要用銳器。可能時，用塑料器具代替玻璃器具。
b．注射和吸取感染材料時，隻能使用針頭固定注射器或一次性注射器(即注射器和針頭是一體的)。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿的、用於收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中，轉移至處理區消毒，最好高壓殺菌。
c．適當時，使用帶針頭套的注射器、無針頭的係統和其他安全設施。
d．打碎的玻璃器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛汙染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在到掉前，應按照地方、州、聯邦的規定進行消毒。
12、從三級生物安全櫃和BSL-4實驗室轉移的活的或完整的生物材料應轉入不易破碎的、密封的第一級容器中，然後由不易破碎的、密封的第二級容器包裹。通過專用的殺菌浸泡罐、煙熏消毒艙、或氣塞轉移出設施。
13、除了需要保持活性或完整狀態的生物材料外，除非在離開實驗室前高壓殺菌或消毒，任何材料不得轉移出BSL—4實驗室。可能被高溫或蒸汽毀壞的設備和材料，可通過氣體或煙霧的方法在專用氣塞或艙中消毒。
14、在有關傳染源的工作結束後、尤其是傳染源灑出或濺出後、或受到其他傳染源汙染後，實驗室設備應當進行日常消毒。設備送去維修或保養前應消毒。
15、灑出的傳染源需由適當的專業人員、或由經過適當培訓且配有裝備的處理高濃度傳染源的人員進行處理、清洗。在實驗室內，製定並公布可能造成濺灑的實驗程序。
16、建立一個體係，報告實驗事故、暴露、員工長期曠工以及潛在的和實驗室相關的疾病的醫療監督。做好並保存書麵記錄。和報告—監督體係關係重大的是，得到檢疫、隔離、和對潛在或已知患實驗室相關疾病的人員進行治療的設施。
17、和所進行的實驗工作無關的材料(如，植物、動物和衣服)不允許帶入設施。
三、安全設備(第一道屏障)
設施內的所有程序都在三級生物安全櫃中進行，或者穿裝備生命支持係統的一體的正壓個人防護服、在二級生物安全櫃中進行。
四、實驗室設施(第二道屏障)
BSL—4實驗室有兩種模型：生物安全櫃實驗室，所有的病源處理均在三級生物安全櫃中進行；防護服實驗室，實驗人員穿防護服。也可以在同一設施中，兩種模型結合。若結合使用，每種模型必須符合該模型的所有要求。
(一)生物安全櫃實驗室
1、BSL—4實驗室為獨立的建築物或建築物內有明確界線的獨立區。設施內的房間作如下安排，至少通過兩道門後，才進入有三級生物安全櫃的房間(生物安全櫃室)。供進出生物安全櫃室用的外內更衣間通過淋浴室隔開。不能通過更衣間進入生物安全櫃室的材料、用品、設備，可通過設有雙門高壓鍋、浸泡缸、煙熏消毒艙、或通氣間的遏製屏障處(用於消毒)進入。
2、實驗開始前，每天檢查所有的控製參數(如，氣流方向)和生命支持係統，保證實驗室按照其運轉參數運轉。
3、生物安全櫃室和內更衣間的牆麵、地麵、天花板建成密封的內殼,以便於煙熏、防止動物和昆蟲進出。地板整體密封、覆蓋。內殼的內表麵耐液體和化學試劑，便於該區域清潔和消毒。有關結構和表麵的所有裂縫均密封。進入生物安全櫃室和內更衣間的門框盡量小、能密封，便於消毒。生物安全櫃室地板上的任何排水管直接通入廢液消毒係統中。下水道開口和其他管道含有HEPA過濾器，防止動物。
4、實驗台表麵一體或密封，防水、耐熱、耐有機溶劑、耐酸堿和用於工作台麵及設施消毒的其他化學物質。
5、實驗室的操作台開口結構簡單，能承受預期的重量並符合使用要求。實驗台、安全櫃以及設備之間的空間應便於打掃、消毒。實驗室使用的椅子及其它器具，應覆蓋易於消毒的非織物。
6、有免接觸式或全自動操作的洗手池，洗手池應安裝在生物安全櫃室和外內更衣間的門附近。
7、若有中央真空係統，生物安全櫃室外的區域不需要抽真空。在線的HEPA過濾器應安裝在離使用點和供應閥盡可能近的地方。過濾器的安裝要便於就地消毒和更換。生物安全櫃室的其他液體和氣體供應係統，應有防回流裝置保護。
8、若有噴水池，應設在實驗室外的走道裏，自動或腳動操作。噴水池的供水係統和實驗室區域的供水係統分開，設防回流保護器。
9、進入實驗室的門可自動關閉，並且可鎖。
10、任何窗戶不會打破，並密封。
11、對於傳遞出三級生物安全櫃和生物安全櫃室的需要消毒的物料，備有雙門高壓鍋。向遏製屏障外開口的高壓鍋必須密封在遏製屏障的牆上。高壓鍋門自動控製，使得向外的門隻有在高壓滅菌過程完成後，才能打開。
12、具備通過浸泡缸、煙熏消毒艙消毒、或類似的消毒手段，使得不能在高壓鍋中消毒的物料和設備，能安全地從三級生物安全櫃和生物安全櫃室中轉出。
13、汙染的內更衣間(包括廁所)和生物安全櫃室中的洗手池、地麵排水管(若使用)、高壓艙、其他來源的液流，通過可行的方法消毒(最好是熱處理)後，才能排入汙水管中。來自淋浴室、無汙染廁所的液流，可不經過處理而排入汙水管中。用於廢液消毒的程序，必須在物理上和生物上均有效。
14、設有明確的非循環的通風係統，平衡係統的供風和排風裝置，保證氣流方向從小危險區到潛在的大危險區。能對相鄰區之間各自的氣壓／氣流方向監視並報警，以指明係統故障。在無汙染的更衣間入口處設有適當的氣壓可視監視裝置，表明、證實各生物安全櫃室的氣壓。監視供氣和排氣裝置氣流，HVAC控製係統可避免實驗室持續正向增壓。三級生物安全櫃應直接接入排氣係統。若三級安全櫃和供氣係統相連，應避免安全櫃正向增壓。
15、生物安全櫃室、內更衣間、通氣間的供氣和排氣通過HEPA過濾器。在空氣入口處進氣，從所用空間排氣。HEPA過濾器離供應源應盡可能近，以減少可能汙染的管道長度。所有HEPA過濾器需要每年測試和確證。HEPA過濾器裝置，應適於過濾器取下前就地消毒，或可將過濾器轉入密封、不漏氣的一級容器中，然後消毒和／或焚毀。HEPA過濾器裝置的設計應適於過濾器的安裝、起作用。使用預先確證的HEPA過濾器是有利的。排氣HEPA過濾器的使用壽命，可以因對供氣適當預過濾而延長。
16、BSL—4設施的設計和操作程序必須文件化。設施必須經過測試以確證設計和操作參數在係統運轉前已達到要求。因操作經驗，會修改操作程序，所以設施必須每年確證。
17、實驗室和外部應有適當的通訊係統(如，傳聲器、傳真、計算機)。
(二)、防護服實驗室
1、BSL—4實驗室為獨立的建築物或建築物內有明確界線的獨立區。設施內的房間作如下安排，通過更農區和消毒區，進入開展有關BSL—4病源工作的房間(防護服實驗室)。供進出防護服實驗室用的外內更衣間通過淋浴室隔開。在設施內保持一個特殊設計的防護服區，為實驗人員提供類似於三級生物安全櫃的保護。進入該區的人員，穿一體正壓防護服，防護服裝備生命支持係統，通過HEPA過濾供應空氣。生命支持係統包括充足的呼吸空氣壓縮罐、報警器、緊急備用呼吸空氣罐。通過裝於空氣密封門上的氣塞進入該區。工作人員離開該區前，用消毒劑淋浴對防護服表麵消毒。可自動啟動應急供電，至少保證排氣係統、生命支持係統、報警、燈光、進出控製、和生物安全櫃運轉。對於周圍實驗室；防護服內的氣壓是正的。相對於相鄰區域，防護服區內的氣壓是負的。備有應急光源和通訊係統。防護服實驗區、消毒劑淋浴區、氣塞的內殼的所有縫隙都密封。
2、實驗開始前，每天檢查所有的控製參數(如，氣流方向、
消毒劑淋浴)和生命支持係統，保證實驗室按照其運轉參數運轉。
3、對於傳遞出防護服實驗室的需要消毒的廢料，可使用遏製屏障上的雙門高壓鍋。向防護服實驗區外麵開的高壓鍋門，必須密封在防護服實驗區的外牆上，門自動控製，使得外麵的門隻有在高壓滅菌過程完成後，才能打開。配備用於消毒的浸泡缸、煙熏消毒艙、或通氣氣塞，以傳入不能通過更衣間進入防護服區的物料、用品、設備。這些裝置也可用於不能高壓消毒的物料、用品、設備從實驗室安全傳出。
4、防護服區的牆麵、地麵、天花板建成密封的內殼，以便於煙熏、防止動物和昆蟲(見附G)。內殼的內表麵耐液體和化學試劑，便於該區域清潔和消毒。有關結構及表麵的所有的裂縫均密封。防護服區地板上的排水管設有存水彎，內有對目標病源顯效的化學消毒劑，並和廢液消毒係統直接相連。下水道開口和其他管道合有HEPA過濾器。
5、防護服區的內部設施配件，如燈固定器、通氣管道、公用管道的安裝，應盡量減少水平表麵積。
6、實驗台表麵；體，防水、耐熱、耐有機溶劑、耐酸堿和用於工作台麵及設備消毒的化學物質。
7、實驗室的操作台開口結構簡單，能承受預期的重量並符合使用要求。實驗台、安全櫃以及設備之間的空間應便於清潔、消毒。實驗室使用的椅子及其它器具，應覆蓋易於消毒的非織物。
8、防護服區設有免接觸式或全自動操作的洗手池。應風險評估要求，外內更衣間應有洗手池。
9、若有中央真空係統，防護服區外的區域不需要抽真空。在線的HEPA過濾器應安裝在離使用點和供應閥盡可能近的地方。過濾器的安裝要便於就地消毒和更換。防護服區其他液體和氣體供應係統，應有防回流裝置。
10、進入實驗室的門可自動關閉，並且可鎖。消毒劑淋浴室的內外門和氣塞的內外門互鎖，防止兩房間的門同時打開。
11、任何窗戶不會打破，並密封。
12、洗手池、地麵排水管(若使用)、高壓艙、和遏製屏障內其他來源的液流，通過可行的方法消毒(最好是熱處理)後，才能排入汙水管中。來自淋浴室、廁所的液流，可不經過處理而排入汙水管中。用於廢液消毒的程序，必須在物理上和生物上均有效。
13、設有明確的非循環的通風係統，平衡係統的供風和排風裝置，保證氣流方向從小危險區到潛在的大危險區。建議有備用供氣扇，要求有備用排氣扇。能對相鄰區之間各自的氣壓／氣流方向監視並報警，以指明係統故障。在無汙染的更衣間入口處設有適當的氣壓可視監視裝置，表明、證實各防護服區的氣壓。監視供氣和排氣裝置氣流，HVAC控製係統可以避免實驗室持續正向增壓。
14、防護服區、消毒淋浴間、消毒氣塞的供氣通過HEPA過濾器。來自防護服區、消毒淋浴間、消毒氣塞的普通房間排氣，通過兩個排列的HEPA過濾器處理，然後向外釋放。在空氣入口處進氣，從所用空間排氣。HEPA過濾器離供應源應盡可能近，以減少可能汙染的管道長度。所有HEPA過濾器需要每年測試和確證。HEPA過濾器裝置，應適於過濾器取下前就地消毒，或可將過濾器轉入密封、不漏氣的一級容器中，然後消毒和／或焚毀。HEPA過濾器裝置的設計應適於過濾器的安裝、起作用。使用預先確證的HEPA過濾器是有利的。排氣HEPA過濾器的使用壽命，可以因對供氣適當預過濾而延長。
15、供氣和排氣點的布置，應當以減少防護服房間內通氣空間死角為原則。
16、在穿正壓防護服工作人員工作的設施內，經過處理的、來自二級生物安全櫃的空氣，可以釋放到房間中或通過設施的排氣係統向外排放。若通過設施排氣係統向外排放處理後的空氣，在和排氣係統連接時，應考慮避免幹擾生物安全櫃或設施排氣係統的空氣平衡。
17、BSL—4設施的設計和操作程序必須文件化。設施必須經過測試以確證設計和操作參數在係統運轉前已達到要求。因操作經驗，會修改操作程序，所以設施必須每年確證。
18、實驗室和外部應有適當的通訊係統。
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