摘要：以抗寒月季帶腋芽莖段為外植體。結果表明：在MS+6-BA1.0~3.0mg/l+NAA0.10mg/l培養基上進行起始培養，其腋芽生長到2~3cm時轉接到MS+6-BA2.0-3.0mg/l+NAA0.1mg/l的培養基上進行繼代增殖培養,30天其增殖倍數在3~4倍以上,且長成的芽苗比較粗壯;增殖後的芽苗在1/2MS+NAA0.5~1.0mg/l或IBA0.5~0.8mg/l的培養基上培養,根係生長良好,30天小苗發根率達90%以上,經煉苗後移栽在以草碳和珍珠岩(體積比1:1)基質中,成活率達85%以上,當小苗長到10cm左右移植於田間栽培,60~90天後可陸續現蕾開花.
關鍵詞:抗寒月季；組織培養；快速繁殖；帶腋芽莖段
月季是薔薇屬的木本花卉,有“花中皇後”的美譽,深受人們的喜愛.為我國十大名花之一,在我國有30多個城市將其選為市花。抗寒月季是近幾年選育出來的能夠適應北方寒冷氣候特點的新的月季品種,以其花大,色豔、花期長被北方園林綠化彩化中廣泛應用，但由於其繁殖以扡插繁殖為主，繁殖速度慢，滿足不了生產發展的需要，而組織培養可在短期內獲得大量的優良種苗，為此，我們於2003~2006年開展了抗寒月季組培快繁的研究工作。
1材料與方法
1.1材料
試驗所用的材料為長春市園林科學研究所抗寒月季基地抗寒月季新品種。
1.2方法
1．2．1外植體的準備
取生長健壯優良母株上帶有腋芽的嫩莖，摘除葉片和嫩刺，用自來水衝洗幹淨後，用浸有75%的酒精棉球擦拭表麵5~10S，剪成3~5cm左右的莖段，在超淨工作台上，用0.1%升汞溶液消毒10~12分，無菌水衝洗3~5次，再用無菌濾紙吸幹表麵水分，切成帶有1個或2個腋芽的莖段接種到培養基中。
1．2．2腋芽的分化與增殖
把外植體分別接種於添加6-BA和NAA的MS培養基上進行起始培養，誘導腋芽萌發建立無菌快速繁殖無性係，再將無菌小苗剪切成1~2cm左右的小段接種到添加不同6-BA和NAA的MS培養基中進行繼代增殖培養，培養一定時間後對小苗的增殖與生長情況進行觀察統計分析，培養基含30g/l糖、8g/l瓊脂、pH值5.8~6.5、培養溫度（25+-3），每天光照為11~12小時，光照強度1000~1500LX。
1．2．3生根與移栽
將增殖後長勢旺盛、節間紳長適度的無根小苗轉接到1/2MS培養基中誘導生根，30天後觀察生根情況。
生根後的試管苗在常溫下煉苗5~7天，移栽到草碳+珍珠岩（體積比為1∶1）的基質中，待成活後小苗高達10cm左右移到田間種植。
2結果與討論
2．1腋芽分化
將外植體接種到MS+2.0mg/l6-BA+0.1mg/lNAA的培養基上培養7天後，大部分外植體開始萌動，10天腋芽膨大明顯，隨後長出嫩芽形成無根芽從。
為選擇出不同質量濃度6-BA對誘導腋芽分化的影響，以MS為基本培養基配製7種附加不同質量濃度（分別為0.10.51.01.52.03.04.0）的6-BA與0.1mg/lNAA配組的腋芽誘導培養基,每組培養基接種40個外植體,培養40天觀察其腋芽分化情況（見表1）。
表1表明,月季腋芽分化率與培養基中6-BA質量濃度呈拋物線關係,6-BA由0.1增加至3.0時腋芽分化率明顯提高,以3.0為最高,腋芽分化率達77.5%;當6-BA的質量繼續增加時,其腋芽分化率則明顯下降;6-BA質量濃度為0.1時其腋芽分化率最低,僅為7.5%;6-BA質量濃度為5.0時,其腋芽分化率隻為15%,可見,培養基中6-BA質量濃度為1.5~3.0時有利於誘導腋芽分化,尤其以2.0~3.0時為最佳。
2.2繼代增殖培養
取自同一種培養基上長勢、大小一致的繼代培養芽和莖段，同時接種到不同質量濃度的6-BA、NAA的MS培養基中，培養30天後進行觀察並統計結果（見表2）。
由表2可以看出，在NAA質量濃度相同而6-BA質量濃度不同的處理中，隨著6-BA濃度的升高（1.5~3.0）芽苗的增殖倍數也相應提高，NAA為0.05~0.1、6-BA為3.0的處理芽苗增殖倍數高達6.6~6.8倍；可見，培養基中6-BA質量濃度為3.0、NAA質量濃度為0.05時為最佳的誘導腋芽分化的處理組合。
2．3生根培養
無菌芽苗在分化與增殖培養基中隻誘導地上部分，既不斷地分枝增殖，曾多次出現現蕾、開花現象，但均不易生根。因此，將原來培養基中的大量元素減半（既1/2MS），並去除BA進行根的誘導。結果在無菌苗根的誘導過程中，生長素的種類和使用濃度起決定性作用，為此對不同種類的生長素NAA、IBA、A、IAA的根效應作對比試驗，結果表明，NAA、IBA對抗寒月季無菌苗誘根效應明顯優於IAA，但兩者之間差異不明顯，用IAA進行根的誘導，芽苗基部長出較多的愈傷組織，發根率低，且發根量少，移栽成活率下降，這可能是因為生長過多的愈傷組織影響根係維管束的發育所致，為為了解NAA和IBA的適宜質量濃度，進行了NAA和IBA的質量濃度試驗，分別設置0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、1.0、1.5等7種質量濃度進行比較，培養30天後觀察根係生長情況，表3表明，以1/2MS（大量元素用量減半）+NAA和1/2MS（大量元素用量減半）+IBA培養基對月季根的誘導效果均較為理想，而且濃度都在0.3-0.75mg/l範圍內最為適合，但以NAA為最佳。其中NAA生根率最高達92%，移栽成活率高達89%，IBA的生根率也高達90%，移栽成活率達87%。
將小苗接種到上述培養基中10天後其基部傷口基本愈合，18天則長出許多小白根，培養30天發根率均達90%以上，且長有3條以上，長度達2.0cm以上白根的占80%以上。
2．4煉苗移栽
在生根培養基中，無菌苗生長迅速，植株逐漸健壯起來，其根係生長尤為迅速，在多數根係長達1.0cm，其根尖仍保持旺盛生長狀態，此時即可進入過度栽培（煉苗）階段，移栽前先將瓶苗移出恒溫培養室，在常溫下置於較強散射光中煉苗7天，打開瓶蓋後繼續煉苗2~7天，然後小心取出放入清水中清洗幹淨，注意少傷根，移栽到以草碳土+珍珠岩（體積比1∶1）的基質中，澆透水並覆蓋塑料膜，保持相對濕度85~90%，溫度15~25℃，10天後逐漸揭膜煉苗，15~20天可將塑料膜全部揭除，並澆施營養液補充營養，其成活率一般可達70%以上，待小苗長至10~15cm左右時，就可移植到田間定植。
參考文獻
［1］李正平.月季試管繁殖和移栽中幾個因素的研究［J］.園藝學報，1988，15（2）：131
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