中華人民共和國輕工行業標準——皺紋紙(節選)之二

　　於同一批號的三個大包裝中至少隨機抽取15包小包裝樣品，三分之一用於測試，三分之一留樣，三分之一必要時複測用。樣品最小包裝不應有破裂，檢驗前不得啟開。

　　在100級淨化條件下或超淨工作台中用無菌方法至少打開5個小包裝，從中隨機準確稱取10 g樣品，剪碎後加入到100 mL滅菌生理鹽水中，振打80次或用混勻器充分混勻。每一種樣品共取30 g，分別接種3管生理鹽水樣液。

A3.1操作步驟

待上述樣液自然沉降後取上清液作菌落計數。共接種6個平皿，每個平皿中加入1 mL樣液，然後用冷卻至45℃左右的熔化的營養瓊脂15 mL倒入平皿內，混合均勻。待瓊脂凝固後翻轉平皿置37℃ 培養24 h後，計算平板上的菌落數。當平板上菌落數超過300時應稀釋後再計數。

A3.2 菌落計數及結果報告

菌落呈片狀生長的平板不宜采用；計數符合要求的平板上的菌落，按式(A1)計算結果：

　　每克樣品細菌菌落總數(cfu/g)＝平板上菌落平均數×10 (A1)

　　所得結果超過標準值的10％，必須重複檢測一次，以兩次結果的平均數為最終結果。

　　當菌落數在100以內時，按實有數報告，大於100時采用二位有效數字。

A4.1 操作步驟

取樣液的上清液接種乳糖膽鹽發酵管。共接種3管，每管接種1 mL樣液，置37℃ 培養24 h，如不產酸也不產氣，則報告為大腸菌群陰性。

　　如產酸產氣，則劃線接種伊紅美藍瓊脂平板，置37℃ 培養18～24 h，觀察平板上菌落形態。典型的大腸菌落為黑紫色或紅紫色，圓形，邊緣整齊，表麵光滑濕潤，常具有金屬光澤，也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紫色，中心較深的菌落。

　　挑取可疑大腸菌落1～2個進行革蘭氏染色鏡檢，同時接種乳糖發酵管於37℃培養24 h，觀察產氣情況。

A4.2 結果報告

凡乳糖膽鹽發酵管產酸產氣，乳糖發酵管產氣，在伊紅美藍平板上有典型大腸菌落，革蘭氏染色為陰性無芽胞杆菌，可報告被檢樣品檢出大腸菌群。

A5.1 操作步驟

取樣液5 mL，加入到50 mL SCDLP培養液中，充分混勻，置37℃培養24 h。

　　自上述增菌液中取1～2接種環，劃線接種在血瓊脂培養基上，置37℃培養24～48 h。在血瓊脂平板上該菌菌落呈金黃色，大而突起，圓形，不透明，表麵光滑，周圍有溶血圈。

　　挑取典型菌落，塗片作革蘭氏染色鏡檢。金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄狀，無芽胞與莢膜。鏡檢符合上述情況，應進行下列試驗：

　　甘露醇發酵試驗：取上述菌落接種到甘露醇培養液中，置37℃培養24 h，發酵甘露醇產酸者為陽性。

　　血漿凝固酶試驗

玻片法：取清潔幹燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔血漿，挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混合，5 min如血漿內出現團塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固則為陽性，如兩者均無凝固則為陰性。凡鹽水滴與血漿滴均有凝固現象，再進行試管凝固酶試驗。

試管法：吸取1∶4新鮮血漿0.5 mL，放滅菌小試管中，加入等量待檢菌24 h肉湯培養物0.5 mL。混勻，放37℃溫箱或水浴中，每半小時觀察一次，24 h之內呈現凝塊即為陽性。同時以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養物各0.5 mL作陽性與陰性對照。

A5.2 結果報告：凡在瓊脂平板上有可疑菌落生長，鏡檢為革蘭氏陽性葡萄球菌，並能發酵甘露醇產酸，血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。

A6.1 操作步驟

取樣液5 mL加入到50 mL匹克氏肉湯（A1.9）中，37℃培養24 h。

　　將培養物劃線接種血瓊脂平板，37℃培養24 h觀察菌落特征。溶血性鏈球菌在血平板上為灰白色，半透明或不透明，針尖狀突起，表麵光滑，邊緣整齊，周圍有無色透明溶血圈。

　　挑取典型菌落作塗片革蘭氏染色鏡檢，應為革蘭氏陽性，呈鏈球狀排列的球菌。鏡檢符合上述情況，應進行下列試驗：

鏈激酶試驗：吸取草酸鉀血漿0.2 mL(0.01 g草酸鉀加5 mL兔血漿混勻，經離心沉澱，吸取上清液)，加入0.8 mL滅菌生理鹽水，混勻後再加入待檢菌24 h肉湯培養物0.5 mL和0.25％氯化鈣0.25 mL，混勻，放37℃水浴中，2 min觀察一次(一般10 min內可凝固)，待血漿凝固後繼續觀察並記錄溶化時間。如2 h內不溶化，繼續放置24 h後觀察，如凝塊全部溶化為陽性，24 h仍不溶化為陰性。

　　杆菌肽敏感試驗：將被檢菌菌液塗於血平板上，用滅菌鑷子取每片含0.04單位杆菌肽的紙片放在平板表麵上，同時以已知陽性菌株作對照，在37℃下放置18～24 h，有抑菌帶者為陽性。

A6.2 結果報告：鏡檢革蘭氏陽性鏈狀排列球菌，血平板上呈現溶血圈，鏈激酶和杆菌肽試驗陽性，可報告被檢樣品檢出溶血性鏈球菌。