微生物實驗中常用藥品試劑配製——固定液和保存液

 

用固定液固定動植物整體或它的一部分組織和氣管等，能保存組織內細胞的形態、結構及其組成，盡量使它近於生活狀態。固定液一般有防腐和保存的作用，分為單純固定液和混合固定液。單純固定液中最重要的有乙醇、福爾馬林、醋酸、苦味酸、鉻酸、重鉻酸鉀、升汞等，前兩種固定液是中學生物實驗室常用的。單純固定液的優點是簡便，缺點是有一定的局限性，不易達到理想的固定要求。混合固定液有幾種不同的藥液按一定的比例混合而成，使各自的優缺點相互補充，成為較完美的固定液。這種固定液的製備雖比較麻煩，但是效果比較好。常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、福爾馬林-醋酸-酒精液、包因氏固定液等。

 

常用的保存液大致跟固定液相同，主要是福爾馬林、酒精、甘油以及由這些藥物按比例配製成的各種混合液。有時按特殊保存的需要，再保存液中增加某些藥品（如原生標本的保存液）。

 

 

福爾馬林在固定組織標本時殺菌能力強，所以防腐性強，滲透力大，固定得快。永福爾馬林固定精細的解剖標本時，要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。

固定液常用的濃度是5～10%（根據材料的大小、性質和數量而定）。

保存液常用的濃度是5～10%。用福爾馬林作保存液，效果好且價格低廉。

在配製福爾馬林溶液（固定液或保存液）時，應將37～40%的甲醛作為整個溶質來配。例如配製5%福爾馬林是取市售37～40%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸餾水混合。實際上甲醛含量隻有1.9～2%，這樣的配法已成為一般實驗室常用的慣例。

 

注意事項：

（1）福爾馬林業在長期貯存中會產生蟻酸，可適量的加入碳酸鈣或碳酸鎂等堿性物質進行中和。

（2）福爾馬林業作為保存液會慢慢揮發而致使濃度降低，並且福爾馬林液再保存中往往形成多聚甲醛，使浸液變濁，影響觀察。所以，根據一定保存期的情況，可適當增加福爾馬林液的濃度或更換新液，以防標本變壞。其中如有白色沉澱物，加熱後可使它溶解。

（3）市售的福爾馬林液常帶有酸性，能腐蝕石灰質，因此，最好不用福爾馬林液浸製有石灰質外殼的動物。

 

 

酒精也是常用的固定液，它有強烈的殺菌作用，對組織材料的滲透力較大，固定的快。但是，它的脫水作用較強，在高濃度的酒精中容易使材料顯著硬化和收縮。一般用於固定浸製標本材料，分一級或二級固定，即70%或50%與70%的酒精。有些小型材料或精細的解剖材料，最好用二級或三級固定，即用50%、70%或50%、60%、70%的酒精，最後再進行保存。從經濟效果來考慮，一般酒精應跟福爾馬林液等固定液混合使用。

市售的工業用酒精濃度是95%左右，因此用時要重新配製。保存液的濃度通常是70%。

 

注意事項：

（1）在固定材料時要注意固定的效果，小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必須先往體內注射一部分固定液，再放入固定液中，防止材料內部腐懷變質。用福爾馬林液固定也是如此。

（2）高濃度的酒精有脫水、脫脂作用。含有多量脂肪或擬脂標本（如腦、脊髓）等都不宜用較高濃度的酒精作保存液。

（3）為了防止酒精使標本硬化，保存一些精細的材料或解剖標本時，因加入少量甘油，因為甘油具有潤軟組織的作用。

（4）忌跟鉻酸、鋨酸和中鉻酸鉀等氧化劑配合。

 

醋酸即乙酸，純醋酸在低於16.7攝氏度時會凝成冰狀固體，所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透組織，因為它不能沉澱細胞質中的蛋白質，組織不會硬化。一般常跟酒精、福爾馬林、鉻酸等容易引起組織變硬和收縮的液體混合，以起到相互抵消的作用。

醋酸固定液的常用濃度是0.3%～5%。

 

苦味酸是一種黃色結晶，能溶於水（溶解度是0.9～1.2%）、酒精（溶解度是4.9%）和苯（溶解度是10%）。苦味酸也能沉澱一切蛋白質，穿透較慢，固定後，組織收縮明顯，但不使組織硬化。

苦味酸固定液可以在100毫升蒸餾水中加入苦味酸約1.5克，製成飽和水溶液。固體苦味酸易爆，長製成飽和水溶液保存。

 

升汞又叫氯化汞，是白色粉末，以針狀結晶為最純。通常固定時用飽和水溶液，有時也用70%酒精作溶劑，不單獨用作固定劑。升汞的穿透力較弱，通常用於小型材料，對蛋白質有強烈的沉澱作用，硬化程度中等。

固定液用飽和溶液，濃度約為7%。

 

配方

95%酒精 170毫升 蒸餾水 280毫升

福爾馬林 60毫升 冰醋酸 20毫升

冰醋酸要在臨用前加入。

這時極好的昆蟲保存液，常用來殺死和保存小型、身體柔軟的種類入蟎、蜈蚣、馬陸等。在這溶液裏加入少量甘油，能防止蟲體變脆。

 

配方

純酒精 6份 冰醋酸 1份

氯仿 3份

這種固定液能固定細胞質和細胞核，尤其適宜於固定染色體，所以多用於細胞學的質片，還用來固定腺體、淋巴組織以及原生動物的胞殼等。這種固定液穿透得快，因此一般小塊組織固定20～40分鍾，大型材料不超過3～4小時。固定後用95%或純酒精洗滌，換液兩次，移到石蠟中或用80%酒精保存。

 

配方

60%酒精 50毫升 冰醋酸 2毫升

80%硝酸 7.5毫升 升汞 10克

蒸餾水 440毫升

這是常用的固定液，適用於肉質菌類，特別是柔軟膠質狀的材料如木耳等，也廣泛用於無脊椎動物和一般組織和蛙胚的固定。固定時間18～20小時，然後用50%酒精衝洗材料，除去升汞。如果用水衝洗，會使材料膨脹。混合液保存24小時後失效。

 

配方

50%酒精 85毫升 福爾馬林 10毫升

冰醋酸 5毫升

這種固定液適用於固定一般植物莖、葉組織，昆蟲和甲殼類動物。液組織在這溶液裏固定12小時，木質化組織要固定1周，材料也可在此液中長期保存。固定後的材料放在50%酒精中衝洗1～2次。

 

配方

在20%硫酸水溶液內加入苦味酸，直到飽和。

這種固定液適用於雞胚的固定，也用於許多小型海洋生物的固定。

 

配方

苦味酸飽和水溶液 75毫升 冰醋酸 5毫升

福爾馬林 25毫升

這是常用的良好固定劑，滲透迅速，固定均勻，組織收縮少，染色後能顯示一般的微細結構。一般動物組織、無脊椎動物的卵和幼蟲以及一般組織學、胚胎學的材料，如植物組織的根尖和胚囊都可用它來固定。一般組織固定24～48小時，小塊組織固定4～16小時，動物材料能在這種固定液中長期保存。固定後，動物材料用70%酒精衝洗淨苦味酸，到無黃色為止（用酒精衝洗時，加幾滴氨水，可加快除去黃色）；植物材料用20%酒精衝洗幾次。

 

配方

甲液 升汞飽和水溶液 66毫升

95%酒精 33毫升

乙液 冰醋酸 1毫升

甲、乙液要在臨用前混合。

這種固定液適用於固定有鞭毛的原生動物、植物的精子和遊動孢子等。材料如製作塗布裝片，可在40攝氏度下固定10～20分鍾。

 

配方

丙酮 40毫升 冰醋酸 1.5毫升

升汞 2克 甲醛 10毫升

蒸餾水 40毫升

這種固定液適用於眼球的固定，並可在固定液中長期保存。

 

配方

甲液 鉻酸 1.5克 冰醋酸 10毫升

蒸餾水 90毫升

乙液 福爾馬林 40毫升 蒸餾水 60毫升

臨用前將等量甲、乙液混合。

高等植物有絲分裂材料適宜在這種固定液裏固定或長期保存。

 

配方一

硫酸銅 5克 水 95毫升

這種保存液適用於綠色植物和一切植物綠色部分的保存。植物放入硫酸銅液後，由綠變黃，再由黃變綠。這時取出材料，用清水漂洗幹淨，浸在5%福爾馬林液內長期保存。

配方二

硫酸銅 0.2克 95%酒精 50毫升

福爾馬林 10毫升 冰醋酸 5毫升

水 35毫升

先把硫酸銅溶於水中，然後加入配方中的其他組分。綠色標本能長期的貯存在該液中。

配方三

醋酸銅 15～30克 50%醋酸 100毫升

在50%醋酸中逐漸加入醋酸銅，直到飽和。適用時取原液1份，加水4份，即成稀釋的硫酸銅溶液。

這種保存液適用於表麵有蠟質、蛙質、質地較硬的綠色植物保色。加熱稀釋到醋酸銅溶液，放入植物，輕輕翻動，到植物由綠轉黃再轉綠色時取出植物，用清水漂洗後，浸入5%福爾馬林液內保存。

 

配方一

甲液 硼酸 3克 福爾馬林 4毫升

水 400毫升

乙液 亞硫酸 2毫升 硼酸 10克

水 488毫升

把紅色的果實浸在甲液裏1～3天，等果實由紅色轉深棕色時取出，移到乙液裏保存，同時在果實內注入少量乙液。

配方二

氯化鋅 2份 福爾馬林 1份

甘油 1份 水 40份

先把氯化鋅溶解在水裏，然後加入配方中其他組分。溶液如果渾濁而有沉澱，應過濾後使用。紅色果實能在此液中保存。

 

配方一

甲液 硫酸銅 5克 水 95毫升

乙液 6%亞硫酸 30毫升甘油 30毫升

95%酒精 30毫升 水 900毫升

先把植物標本在甲液中浸1～2天，取出洗淨後，浸入乙液中保存，同時在果實內注入少量乙液。

配方二

6%亞硫酸 568毫升 80%酒精 568毫升

水 450毫升

植物材料能在這種保存液中長期保存。

 

配方一

95%酒精 20毫升 福爾馬林 20毫升

水 60毫升

使用時，取1份原液加9份水稀釋，植物材料能在這溶液中保存。

配方二

食鹽飽和水溶液 30毫升 水 175毫升

福爾馬林 20毫升 甘油 少量

植物材料能在這溶液中保存。

 

配方一

甲液 5%硫酸銅溶液

乙液 1～4%亞硫酸溶液

全白色植物材料能浸在乙液中保存。雜有綠色的白色植物材料先浸在5%硫酸銅溶液內1～3天，用清水漂洗後浸在乙液中保存。

配方二

氯化鋅 32克 95%酒精 125毫升

水 1000毫升

把氯化鋅溶於水中，再加入酒精。植物材料能在這溶液中保存。

 

甲液 福爾馬林 4毫升 醋酸銅 1克

硝酸鉀 1克 水 100毫升

乙液 甘油 20毫升 醋酸鉀 10克

福爾馬林 1毫升 水 100毫升

先把昆蟲幼蟲放在80攝氏度熱水中燙死，曬幹後放在甲液中固定1星期左右，最後放入稀釋一倍的乙液中保存。

配方二

甲液 95%酒精 90毫升甘油 2.5毫升

福爾馬林 2.5毫升 冰醋酸 2.5毫升

氯化銅 3克

乙液 冰醋酸 5毫升 福爾馬林 4毫升

水 100毫升

將絕食1～2天的幼蟲，用注射器從肛門向體內注射甲液，12小時後轉入乙液內保存，約20天更換1次乙液。

 

甲液 苦味酸飽和液 10毫升 冰醋酸 5毫升

福爾馬林 2.5毫升

乙液 與綠色幼蟲保存液配方二乙液相同

用注射器從幼蟲肛門內注入甲液，12小時後轉入乙液內保存。

 

硼砂 2克 50%酒精 100毫升

昆蟲幼蟲能在這溶液中保存。

 

甲液 福爾馬林 200毫升 硝酸鉀 15克

醋酸鉀 30克 水 1000毫升

乙液 甘油 200毫升 醋酸鉀 100克

麝香草酚 2.5克 水 1000毫升

先把材料放在甲液內固定，固定時間根據材料的大小而定，一般需1～5天。當材料失去自然色澤而呈暗褐色時，用手輕輕擠壓，直到沒有淡紅色血水流出時，取出材料，用清水衝洗，在浸在85%酒精中3～24小時（不能太久，否則易破壞色素），到血色恢複後，浸在乙液中保存。