小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗(3)

 

　　（一）改良磷酸緩衝液

成分：磷酸氫二鈉（Na2HpO4）	8.23g
磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O）	1.20g
氯化鈉	5g
蒸餾水	1000mL
山梨醇	20g
三號膽鹽	15g

 

製法：將磷酸鹽及氯化鈉溶於蒸餾水中，再加山梨醇及膽鹽，溶解後校正pH為7.6，分裝試管，於121℃高壓滅菌15min備用。

 

（二）CIN-I培養基

成分：胰腖	20g
酵母浸膏	2g
甘露醇	20g
氯化鈉	1g
丙酮酸鈉	2g
去氧膽酸鈉	2g
硫酸鎂（MgSO4·7H2O）	0.01g
瓊脂	12g
蒸餾水	950mL
pH7.4±0.1

 

製法：上述成分溶於蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min，待冷至80℃時加入二苯醚（用95％的乙醇配成0.4％的溶液）1mL，混勻，冷至50℃左右時加入中性紅（3mg/mL）10mL，結晶紫（0.1mg/mL）10mL，頭孢黴素（1.5mg/mL）10mL，新生黴素（0.25mg/mL）10mL，最後不斷攪拌，加入10％的氯化鍶10mL，倒平皿。

 

（三）改良y培養基

成分：蛋白腖	15g
氯化鈉	10g
乳糖	2g
草酸鈉	2g
去氧膽酸鈉	6g
三號膽鹽	5g
丙酮酸鈉	2g
孟加拉紅	40mg
水解酪蛋白	5g
瓊脂	17g
蒸餾水	1000ml
ph7.4±0.1

 

製法：將上述成分溶解於蒸餾水，121℃ 15min高壓滅菌。

 

 

（四）改良克氏雙糖鐵瓊脂

成分：蛋白腖	20g
牛肉膏	3g
酵母浸膏	3g
甘露醇	20g
葡萄糖	1g
氯化鈉	5g
檸檬酸鐵銨	0.5g
硫代硫酸鈉	0.5g
瓊脂	12g
酚紅	0.025g
蒸餾水	1000mL
pH7.4

 

製法：除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解於蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂，加熱煮沸以溶化瓊脂，加入0.2％酚紅水溶液12.5mL搖勻，分裝試管，121℃高壓滅菌15min，放置高層斜麵備用。

 

 

（五）糖發酵培養基

成分：牛肉膏	5g
蛋白腖	10g
氯化鈉	3g
磷酸氫二鈉	2g
0.2％溴麝草酚藍溶液	12mL
蒸餾水	1000mL

 

製法：將上述成分配好後，分裝每瓶100mL，121℃高壓15min滅菌，另將蔗糖、棉子糧、山梨醇、甘露醇、鼠李糖等分別配成10％溶液，同時高壓滅菌，將5mL糖液加入100mL培養基內，以無菌操作分裝小試管。

 

 

（六）氨基酸脫羧酶試驗培養基

成分：蛋白腖	5g
酵母浸膏	3g
葡萄糖	1g
蒸餾水	1000mL
1.6％溴甲酚紫乙醇溶液	1mL
L-氨基酸或DL氨基酸	0.5或1g/100mL
pH6.8

 

製法：除氨基酸以外，將其他成分加熱溶解，分裝每瓶100mL，分別加入各種氨基酸，校正pH，對照培養基不加氨基酸，分裝試管，每管0.5mL，上麵滴加一層液體石蠟，115℃高壓滅菌10min。

試驗方法：接種培養物後於37℃培養24h觀察結果，陽性者產堿，培養其呈紫色，陰性者無堿性產物，但因葡萄糖產酸而使培養基變為黃色，對照管應為黃色。

 

 

（七）緩衝葡萄糖蛋白腖水（V-P試驗用）

成分：磷酸氫二鉀	5g
多腖	7g
葡萄糖	5g
蒸餾水	1000mL
pH7.0

 

製法：將上述成分溶化後校正pH，分裝小試管，每管1mL，121℃高壓滅菌15min。

試驗方法：接種培養物於37℃培養2~4d，加入6％α-萘酚酒精溶液0.5mL和40％氫氧化鉀溶液0.2mL，充分振搖試管，觀察結果，立刻或數分鍾內出現紅色者為陽性反應。

 

 

（八）堿處理液

氫氧化鉀0.5g，氯化鈉0.5g，加入蒸餾水100mL配成0.5％氫氧化鉀-氯化鈉溶液。

 

 

（九）動力試驗培養基

成分：蛋白腖	1g
牛肉膏	0.3g
氯化鈉	0.5g
瓊脂	0.35~0.4g
蒸餾水	100mL

 

製法：按以上成分配好，煮沸使溶解，校正pH為7.4，分裝小管，121℃高壓滅菌15min，起立凝固備用。

 

 

（十）尿素培養基

成分：尿素	20g
酵母浸膏	0.1g
磷酸二氫鉀（KH2PO4）	9.1g
磷酸氫二鈉（Na2HPO4）	9.5g
酚紅	0.01g
蒸餾水	1000mL

 

製法：將上述成分於蒸餾水中溶解，校正pH為6.8±0.2，不要加熱，過濾除菌，無菌分裝於滅菌小試管中，每管2~3mL。