2005年9月，本中心接到報告，有2例因吃蛋糕引起的以嘔吐、腹痛、腹瀉 主要症狀的患者，我們立即 往采樣，並在2例患者吃剩的蛋糕中檢出 株不典型的金黃色葡萄球菌，現將分離鑒定的過程報告如下
1 材料與方法
1.1 材料 檢驗材料為患者吃剩的蛋糕。
1.2 方法
1.2.1 實驗儀器和試劑 實驗儀器：恒溫培養箱、梅裏埃ATB Expression 細菌鑒定儀及VIDAS免疫診斷分析係統，試劑：甘露醇高鹽瓊脂購自廣東環凱微生物科技公司，血平板（使用人血）、卵黃瓊脂平板、1mol/L的鹽酸、3%H2O2為本單位自製，生化鑒定用的ID32 STAPH細菌鑒定卡及VIDAS葡萄球菌腸毒素試劑盒為法國梅裏埃公司生產，其餘均購自北京陸橋技術責任有限公司，試劑均在有效期內使用。
1.2.2 檢驗方法 按GB/T4789.10—2003《食品衛生微生物檢驗》［1］，DNA酶測定按《微生物學和微生物學檢驗》［2］中的方法，細菌鑒定卡、葡萄球菌腸毒素的檢測按法國梅裏埃試劑使用說明書操作。
2 結果
2.1 增菌及分離 剩餘蛋糕經7.5％NaCl肉湯增菌後，同時接 於血平板、甘露醇高鹽瓊脂平板上，37℃培養24h後，取出觀察菌落形態，在血平板上見白色、不透明、圓形、光滑、突起、周圍有透明溶血圈、直徑約1mm的小菌落；在甘露醇高鹽瓊脂平板上見黃色、圓形、光滑、突起、直徑約1mm的優勢菌落。挑起以上兩種形態的單 菌落各3個做革蘭染色鏡檢，均為革蘭陽性球菌、部分呈葡萄狀排列，同時接種於營養瓊脂平板和雙糖管上，置37℃、24h做純培養。取純培養物劃線接種Baird-Parker平板及卵黃瓊脂平板上，置37℃、24h培養，在Baird-Parker平板呈圓形、光滑、突起、黑色、其周圍卻不見渾濁帶和透明圈，且直徑約為0.7～1mm。在卵黃瓊脂平板上呈圓形、光滑、突起、原始區的菌苔呈淡黃色、單個菌落呈白色、直徑約為1～1.3mm、其周圍可見渾濁帶和透明圈。
2.2 生化試驗 取營養瓊脂平板上的純培養菌落做下列生化試驗：氧化酶(-)，觸酶(+)，血漿凝固酶：玻片法(+)，試管法(+)，DNA酶(+)，按要求將菌液接種於ID32 STAPH細菌鑒定卡，置37℃培養24h後用梅裏埃ATB細菌鑒定儀自動讀 ，判斷為非常好的鑒定結果，99.7%符合金黃色葡萄球菌，全部生化反應見表1。將菌株送廈門市CDC做葡萄球菌腸毒素檢測，用自動定量酶聯熒光免疫分析法測定，選用法國梅裏埃公司生產VIDAS葡萄球菌腸毒素(SET2)試劑盒，產品編號：30705，結果判斷：TV值小於0.13為陰性、 於或等於0.13為陽性，在此試驗中陰性質控樣TV值為0.00、陽性質控樣TV值為1.00、菌株的TV值為2.32，即該菌株葡萄球菌腸毒素為陽性。表1 生化反應結果
3 討論
典型的金黃色葡萄球菌在血平板上的菌落形態為金黃色、圓形、光滑、大而突起、周圍有溶血圈；在Baird-Parker平板上為圓形、光滑、突起、直徑約2～3mm、菌落中心呈灰黑色、周圍有一渾濁帶，在其外層有一透明圈。而此次分離到的金黃色葡萄球菌在血平板上雖為圓形、光滑、周圍有溶血圈，但因其不產生色素而呈白色，且菌落較小直徑約1mm；在Baird-Parker平板上雖呈黑色、其周圍卻不見渾濁帶和透明圈（可能是凍幹的卵黃較難溶解之故），直徑約為0.7～1mm，很容易導致漏檢，又因此菌株為能引起食物中毒的腸毒素陽性的金黃色葡萄球菌，所以提醒各位同仁在金黃色葡萄球菌的檢驗中，不僅要注意典型菌落，對 種在血平板上呈白色、有透明溶血圈、較小的菌落也要重視，建議先做革蘭染色鏡檢及血漿凝固酶試驗篩檢，若符合，再繼續做各項試驗鑒定，以提高金黃色葡萄球菌的檢出率，防止漏檢。
【參考文獻】
1 中華人民共和國衛生部/中國國家標準化管理委員會．GB/T4789.1～4789.31-2003，67-69.食品衛生微生物檢驗.
2 俞樹榮.微生物學和微生物學檢驗，第2版．北京：人民衛生出版社，114.
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