原理：當細菌利用銨鹽作為唯一氮源，並利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源時，可在枸櫞酸鹽培養基上生長，生成碳酸鈉，並同時利用銨鹽生成氫，使培養基呈堿性。
方法1：
Simmons氏培養基：
檸檬酸鈉 lg
K2HPO4 lg
硫酸鎂 0.2g
氯化鈉 5g
瓊脂（洗過） 20g
NH4H2PO4 1g
1％溴麝香草酚藍酒精溶液 10ml
蒸餾水 加至1，000ml
調整pH至6.8，15磅15分鍾高壓滅菌後製成斜麵。
將上述培養基中的瓊脂省去，製成液體培養基，同樣可以應用。將被檢細菌少量接種到培養基中， 37℃培養2～4日，培養基變藍色者為陽性，不變者為陰性。
方法2：
Christenten氏培養基：
檸檬酸鈉 5g
KH2PO4 1g
葡萄糖 0.2g
氯化鈉 5g
酚紅 0.012g
半胱氨酸 0.1g
瓊脂 15g
酵母浸膏 0.5g
蒸餾水加至 1000ml
有的配方尚加檸檬酸鐵銨0.4g，硫代硫酸鈉0.08g。
PH不必調整。高壓滅菌後做成短厚的斜麵。接種時先劃線後穿刺，孵育於37℃觀察七天。陽性者培養基變紅色，陰性者培養基仍為黃色。
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