1目的
1.1理解冷凍幹燥保藏菌種的原理
1.2掌握冷凍幹燥保藏菌種的方法。
2 原理
冷凍幹燥保藏菌種法可克服簡單保藏方法的不足。利用有利於菌種保藏的—切因素，使微生物始終處於低溫、幹燥、缺氧的條件下，因而它是迄今為止最有效的菌種保藏法之一。
3 材料
3.1 菌株
待保藏的各種菌種。
3.2試劑
2% HCl；牛奶。
3.3器具
安瓿管、標簽、長滴管、脫脂棉、幹冰、離心機、冷凍真空裝置、高頻電火花器。
4 流程
備安瓿管→備脫脂乳→製菌懸液→分裝→預凍→真空幹燥→保藏→活化
5步驟
5.1準備安瓿管
安瓿管先用2%HCl浸泡，再水洗多次，烘幹。將標簽放入安培管內，管口塞上棉花，滅菌備用。
5.2製備脫脂乳
用鮮奶經處理或使用脫脂奶粉配兌脫脂牛奶，滅菌，並做無菌試驗後備用。
5.3製菌懸液
將無菌牛奶直接加到待保藏的菌種斜麵內，用接種環將菌種刮下，輕輕攪亂使其均勻地懸浮在牛奶內成懸浮液。
5.4分裝
用無菌長滴管將懸浮液分裝入安瓿管底部，每支安培管的裝量約為0.9毫升。(一般裝入量為安瓿管球部體積的1／3)
5.5預凍
將分裝好的安瓿管在-25至-40之間的幹冰酒精中進行預凍1小時；或在冰箱冷凍室進行預東。
5.6真空幹燥
預凍以後，將安瓿管放入真空器中，開動真空泵進行幹燥。
5.7封管
封管前將安瓿管裝入歧管；真空度抽至0.01毫米汞拄後，再用火焰熔封，封好後，要用高頻火花器檢查各安瓿管的真空情況。如果管內呈現灰藍色光，證明保持著真空。檢查時高頻電火花器應射向安瓿管的上半部。
5.8保藏
做好的安瓿管應放置在低溫避光處保藏。
5.9活化
如果要從中取出菌種恢複培養，可先用75%酒精將管的外壁消毒，然後將安瓿管上部在火焰上燒熱，再滴幾滴無菌水，使管子破裂。在用接種針直接挑取鬆散的幹燥樣品，在斜麵接種。
6結果
6.1簡述真空冷凍幹燥保藏菌種的原理。
6.2 記錄大腸杆菌斜麵作液體石蠟封藏和枯草杆菌作沙土管保藏的要點。
7思考
7.1菌種保藏中，石蠟油的作用是什麽？
7.2經常使用的細菌菌株，使用那種保藏方法比較好？
7.3沙土管法適合保藏那一類微生物？
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