實驗——放線菌形態觀察

1 目的                         

 觀察放線菌的基本形態特征

 掌握培養放線菌的幾種方法 

2 原理

放線菌一般由分枝狀菌絲組成，它的菌絲可分為基內菌絲(營養菌絲)、氣生菌絲或有孢子絲三種。放線菌生長到一定階段，大部分氣生菌絲分化成孢子絲，通過橫割分列的方式產生成串的分生孢子。孢子絲形態多樣，有直、波曲、鉤狀、螺旋狀、輪生等多種形態。孢子也有球形、橢圓形、杆狀和瓜子狀等等。它們的形態構造都是放線菌分類鑒定的重要依據。

放線菌的菌落早期絨狀同細菌菌落月牙狀相似，後期形成孢子菌落呈粉狀、幹燥，有各種顏色呈同心圓放射狀。

3 材料

3.1 菌種 

灰色鏈黴菌(Str. griseus),天藍色鏈黴菌(Str. coelicolor),細黃鏈黴菌（Str.microflavus）。

3.2 培養基  

高氏1號培養基。

3.3 器皿  

培養皿，載玻片、蓋玻片、無菌滴管、鑷子、接種環、小刀(或刀片)、水浴鍋，顯微鏡，超淨工作台，恒溫培養箱。

4 流程

4.1插片法: 倒平板→插片→接種→培養→鏡檢→記錄繪圖

4.2壓印法: 倒平板→劃線接種→挑取菌落→加蓋玻片→鏡檢→記錄繪圖

4.3埋片法: 倒瓊脂→切槽→接種→培養→鏡檢→記錄繪圖

5 步驟 

5.1插片法

5.1.1倒平板

將高氏1號培養基熔化後，倒10~12毫升左右於滅菌培養皿內，凝固後使用.   

5.1.2插片

將滅菌的蓋玻片以45度角插入培養皿內的培養基中，插入深約為1/2或1/3(圖5-1)。

5.1.3接種與培養

用接種環將菌種接種在蓋玻片與瓊脂相接的沿線，放置28℃培養3～7天。

5.1.4觀察

培養後菌絲體生長在培養基及蓋玻片上，小心用鑷子將蓋玻片抽出，輕輕擦去生長較差的一麵的菌絲體，將生長良好的菌絲體麵向的載玻片，壓放於載玻片上。直接在顯微鏡下觀察。

5.2壓印法

5.2.1製備放線菌平板 

同5.1.1。在凝固的高氏1號培養基平板上用劃線分離法得到單一的放線菌菌落。

5.2.2挑取菌落

用滅菌的小刀(或刀片)挑取有單一菌落的培養基一小塊，放在潔淨的載玻片上。

5.2.3加蓋玻片

用鑷子取一潔淨蓋玻片，在火餡上稍微加熱（注意：別將蓋玻片烤碎），然後把玻片蓋放在帶菌落的培養基小塊上，再用小鑷子輕輕壓幾下，使菌落的部分菌絲體印壓在蓋玻片上。

5.2.4觀察

將印壓好的蓋玻片放在潔淨的載玻片上(菌體朝向載玻片)，然後放置在顯微鏡下觀察。

5.3埋片法

5.3.1倒瓊脂平板

將已配製、滅菌的高氏l號瓊脂培養基熔化，通過無菌操作倒入滅菌的培養皿底，倒均，將整個培養皿蓋住使凝固。一般f=9cm的培養皿約倒入15mL培養基。

5.3.2接種與培養

在已凝固的瓊脂平板上用滅菌小刀切開兩條小槽，寬度小於1.5cm。把放線菌接種在小槽邊上，？蓋上已滅菌的蓋玻片1-2片(圖5-2)，蓋好培養蓋。將製作好的平板放在28℃恒溫箱培養3-4天。

5.3.3觀察 

取出培養皿，可以打開皿蓋，將培養皿直接置於顯微鏡下觀察；也可以取下蓋玻片，將其放在潔淨載波片上，？放在顯微鏡下觀察。

6 結果

6.1 觀察並繪製放線菌的孢子絲形態，並指明其著生方式。

6.2 繪圖和描述自然生長狀態下觀察到的放線菌形態

6.3 比較不同放線菌形態特征的異同

7 思考

1在高倍鏡或油鏡下如何區分放線菌的基內菌絲和氣生菌絲？