實驗——酵母菌的形態觀察

1目的

1.1 觀察啤酒酵母的個體形態及其無性繁殖。

1.2 觀察假絲酵母的菌體結構、假菌絲以及繁殖特點。

2 原理

真菌是具有真正細胞核的真核生物，包括酵母菌、黴菌和大型？真菌三大類型。本部分主要介紹如何觀察酵母菌的顯微形態結構。

酵母菌是單細胞的真核微生物，細胞核和細胞質有明且分化，個體比細菌大得多。酵母菌的形態通常有球狀、卵園狀、橢圓狀、柱狀或香腸狀等多種。酵母菌的無性繁殖有芽殖、裂殖和產生擲孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。酵母菌母細胞在一係列的芽殖後，如果長大的子細胞與母細胞並不分離，就會形成藕節狀的假菌絲。

3 材料

3.1器械

接種針、接種環、酒精燈、載玻片、蓋玻片、吸管、顯微鏡、鑷子、恒溫培養箱。

3.2培養基與染液

配製麥芽汁培養基、肉湯蛋白腖培養基、孔雀綠染液、0.1？美藍液、           

3.3菌種

啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），假絲酵母（Candida.spp.）的試管斜麵菌種。

4 流程

啤酒酵母鏡檢→假絲酵母鏡檢→酵母菌死活細胞鏡檢→子囊孢子鏡檢

5 步驟  

5.1 啤酒酵母形態觀察

取一潔淨載玻片，在載玻片上滴一滴無菌水，用接種環挑取少許啤酒酵母菌苔置於無菌水中，用接種環輕輕劃動，使其分散成雲霧狀薄層；另取一蓋玻片，小心覆蓋菌液。在顯微鏡下觀察酵母細胞的形狀、大小及出芽方式。

5.2 假絲酵母觀察

用劃線法將假絲酵母接種在麥芽汁平板上，在劃線部分加無菌蓋玻片，於28—30℃培養3天，取下蓋玻片，放到潔淨載波片上，在顯微鏡下觀察呈樹枝狀分枝的假菌絲細胞的形狀，或打開皿蓋，在顯微鏡下直接觀察。

5.3 酵母菌死活細胞的檢查

載片上加一滴0.1％的美藍，用接種環挑取少許酵母菌苔置於美蘭液滴中，用接種環劃動，使其分散均勻，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察，死細胞為蘭色，活細胞無色。

5.4 子囊孢子的觀察

將啤酒酵母接種於麥芽汁液體培養基中，於28～30℃恒溫箱中培養24小時，連續轉接培養3～4次；再轉接到肉汁蛋白腖培養基中，在25～28℃的恒溫箱中培養3天左右，最後經過塗片染色後(按芽孢染色法)，觀察子囊孢子形狀和特點，以及每個子囊內的孢子數等。

6 結果

把觀察到的各種酵母繪圖，並注明各部分名稱。

7 思考

7.1 在酵母菌死活細胞的觀察中，使用美蘭液有何作用？

7.2 比較假絲酵母與啤酒酵母形態的異同。