原理：某些細菌能產生尿素酶。尿素酶可分解尿素，產生大量的氨，使培養基的pH值升高。
培養基：應用Christenrsen氏培養基
蛋白腖 1g
葡萄糖 1g
氯化鈉 5g
KH2PO4 2g
0.2％酚紅溶液 6ml
瓊脂 20g
蒸餾水加至 1000ml
調整pH至6.9。需生長因子的細菌，可加入酵母浸膏0.1％。
121℃高壓滅菌15分鍾，冷卻到55℃時加入十分之一的20％尿素液（經濾過法除菌）使尿素含量為2％（即每1000ml中有20g），製成短斜麵。接種細菌時，同時作劃線及穿刺，置37℃培養24小時後觀察，培養基從黃色變紅色時為陽性。接種量多，反應快的細菌，數小時即可使培養基變紅。陰性者應繼續觀察4天。
可以省去瓊脂，將各物（包括20g尿素）溶解後，過濾除菌，無菌分裝，培養2日，無菌者應用。
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