乳粉中阪崎腸杆菌的檢測方法（1）

 

摘  要：為乳品企業開展阪崎腸杆菌出廠檢驗尋找更加便捷、準確，且檢測費用低廉的檢測方法。參照SN/T1632.1-2005標準，在定性檢測基礎上有所改進。選擇3 種基礎腸道分離培養基伊紅美藍、麥康凱、山梨醇麥康凱分離培養及生化鑒定阪崎腸杆菌．對兩種修複培養基靈敏度進行比較及阪崎腸杆菌在5種腸道分離培養基上生長情況比較。結果表明, A和B 兩組修複培養對嬰幼兒乳粉中阪崎腸杆菌均能起到修複作用，B組使用BP修複培養比A組蒸餾水修複培養靈敏度 高出1個稀釋度 (10倍)。阪崎腸杆菌在5種腸道分離培養基上均能生長。選擇 上述3種基礎腸道分離培養基分離鑒定阪崎腸杆菌，費用低廉．用於乳品企業對每批次產品進行自檢．有更大的經濟效益和社會效益。

 

0  引  言

2003年1月9日．美國美讚臣公司向美國食品及藥品管理局(FDA)報告要求回收在美國生產的一批罐裝早產兒特殊配方乳粉．回收原因是在該批產品中檢驗出極微量的阪崎腸杆 菌(Enterobacter sakazakii)。此後，“問題乳粉”事件迅速引起世界廣泛關注．汙染源阪崎腸杆菌也成為焦點目標^［3］

 

美國食品及藥品管理局(FDA)於2002年提出在嬰幼兒配方乳粉中檢測阪崎腸菌．隨著 對阪崎腸杆菌檢測的重視．國家質量監督檢驗檢疫總局要求企業生產的每批次嬰幼兒配方乳粉出廠前都要求進行自檢，做到對阪崎腸杆菌檢測工作日常化。本文參照SN／T1632．1 - -20 05標準定性檢測的基礎上有所改進。目的是為進一步推動乳品企業對每批次產品進行阪崎 腸杆菌出廠檢驗而尋求更加便捷、準確，且檢測費用低廉的檢測方法。

 

( 1) 菌種來源。阪崎腸杆菌0624標準菌株，由廣東省臨床檢驗中心提供阪崎腸杆菌0 819- -041、0814- 178由本中心分離 。

( 2 ) 培養基。緩衝蛋白腖水(BP)、腸道菌增菌肉湯 (EE)、伊紅美藍(EMB)、麥康凱( Ma cConKey)、山梨醇麥康凱 (SorbitolMacConKey)，營養瓊脂(NutirentA—gar)為杭州天和微生 物試劑有限公司生產。腸道計數培養基(VRBGA)，顯色培養基(Xa—GicA )由北京陸橋公司 生產

( 3) 微量生化管。杭州天和微生物試劑有限公司生產，部分為自配。所用培養基經實驗室生物學質控考核，符合微生物生長需要。

 

1．2．1 樣品修複培養

無菌稱取100 g乳粉加入500 ml預熱45℃緩衝蛋白腖水中．混勻，經36℃±1℃培養 18～24h。 

1．2．2 腸道增茵肉湯培養

移取10 mL加入90 mL EE肉湯中，於36℃±1℃培養18 - 24 h。 

1．2．3分離培養

取EE肉湯培養物1環．分別劃線接種EMB，MacConKey，SorbitolMacConKey瓊脂平板各1塊．置36℃±1℃ 培養18 ~24h．挑取可疑菌落分純培養。

1．2．4兩種修複培養及培養基

( 1 )取2～8℃冰箱已保存3個月的阪崎腸杆菌斜麵用無菌生理鹽水製備菌懸液．從10^-1～10^-9作連續10倍稀釋．同時取10^-9～10^-10。lmL塗布平板各2塊，36℃±1℃培養過夜， 菌落計數。

(2)取上述菌懸液從10^-9一10^-1分別取0．1mL加入A組：9mL質量分數為10％嬰兒乳粉蒸餾水管中；B組：9 mL質量分數10％嬰兒乳粉BP培養液中：置36℃± 1 ℃培養1 8～24h

( 3) 取上述A和B培養液9 mL移入90 m的EE肉湯中，於36℃±1℃培養18～24 h， 劃線接種EMB，Mac—ConKey．Sorbitol NlacConKey．VRBGA Xa—GicA瓊脂平板，36℃±1℃培養18~24 h，觀察結果並記錄(實驗重複3次)。

1．2．5  在5種分離培養基上情況比較

(1) 取18 - -24 h培養的阪崎腸杆菌新鮮斜麵製備菌懸液。 

(2)用無菌生理鹽水從10^-1 ～10^-9 作連續10倍稀釋，取10^-4，10^-5，10^-6分別取0．1ml塗布2％Nutirent Agar，EM B，MacConKey，SorbitolMacConKey，VRJBGA．Xa—GicA瓊 脂平板．於36℃±1℃培養18 - -24 h，進行比較(實驗重複3次) 。