原理：氧化酶及細胞色素氧化酶。做氧化酶試驗時，此酶並不直接與氧化酶試劑起反應，而是首先使細胞色素C氧化，然後此氧化型細胞色素C再使對苯二胺氧化，產生顏色反應。
試劑，1%鹽酸四甲基苯二胺水溶液，或1%鹽酸二甲基對苯二胺水溶液，配製後盛於棕色瓶中，置冰箱中可保存2周，若冰凍保存可用4～6周。
方法1 如細菌在固體培養基上長出菌落，可將試劑直接滴在細菌的菌落上，菌落呈玫瑰紅色然後到深紫色者為氧化酶陽性。
方法2 取白色潔淨濾紙一角，蘸取試驗菌菌落少許，加試劑一滴，陽性者立即呈粉紅色，以後顏色逐漸加深。
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