產氣莢膜梭菌及其檢驗

 產氣莢膜梭菌及其檢驗
Examination of Clostridium perfringens

一、魏氏梭菌Clostridium welchii

魏氏梭菌又稱產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens )，不但是人和動物創傷感染的重要病原菌，而且是一種比較常見的食物中毒致病菌。魏氏梭菌食物中毒多發生在炎熱的夏秋季節，中毒食物以魚、肉及其製品為多見。A型菌引起的中毒，主要表現為急性胃腸炎，有嚴重水樣腹瀉和下腹部痙攣，多無嘔吐、發熱等其它特征。C型魏氏梭菌引起的食物中毒症狀較嚴重，主要表現為嚴重的下腹部疼痛，重度腹瀉，便中帶有血液、粘液甚至粘膜碎片，並伴有嘔吐，嚴重者發生暴發性腸毒血症，可引起死亡。

Clostridium perfringens is an anaerobic, Gram-positive, sporeforming rod (anaerobic means unable to grow in the presence of free oxygen). It is widely distributed in the environment and frequently occurs in the intestines of humans and many domestic and feral animals. Spores of the organism persist in soil, sediments, and areas subject to human or animal fecal pollution. Perfringens food poisoning is the term used to describe the common foodborne illness caused by C. perfringens. A more serious but rare illness is also caused by ingesting food contaminated with Type C strains. The latter illness is known as enteritis necroticans or pig-bel disease.

一)形態染色特性

革蘭氏陽性粗大杆菌，兩端鈍圓，大小為1～2×2～10μm。陳舊培養物中可變為陰性。常單在或成雙，偶有短鏈狀排列。在含活體內或含有體液的培養基中可形成莢膜。很少形成芽孢，芽孢不比菌體大。無鞭毛，無動力。

二)培養特性

厭氧但不嚴格。在葡萄糖血瓊脂上形成勳章樣的大菌落，菌落周圍有溶血，有時為雙溶血環，外層不完全溶血，內層溶血完全，但在馬血平板上表現不典型；菌落顏色略帶灰黃色至淺灰褐色，與空氣接觸30min後，有時可變為灰綠甚至鮮綠色，這是本菌的特征之一；偶爾可見較小的白色菌落。在SPS瓊脂上菌落呈黑色。在普通瓊脂上培養24h後，菌落直徑可達2～4mm，凸起，表麵光滑，半透明，正圓形。本菌的另一個顯著特征是可發酵牛乳並出現“暴烈發酵”現象。生長和繁殖速度很快，適宜條件下增殖1代隻需8min。生長的溫度範圍為15～55℃，最適43～47℃。最適pH為7.0～7.2(範圍4.9～8.3)。

三)生化特性

                   表 魏氏梭菌的主要生化特性                  

 

四)毒素特性

各型魏氏梭菌可產生12外毒素(包括5種酶)：α、β、γ、δ、ε、η、θ、ι、κ、λ、μ和ν，其中4種(α、β、ε、ι)是主要毒素。根據所產毒素種類，可將本菌分為A、B、C、D、E等 5個型(表5－31)。 除此之外，魏氏梭菌還可產生能引起食物中毒的腸毒素(主要是A型菌)。

                   表  魏氏梭菌的菌型與產毒素關係               

 

五)抵抗力   本菌繁殖體抵抗力不強，一般消毒藥即可殺死，但芽孢抵抗力較強，可在土壤中長期存在，耐熱，95℃、2.5h方可將其殺死。

二  檢驗

一)樣品的收集與處理

二)常規檢驗方法，魏氏梭菌的常規檢驗重點包括細菌計數和確證試驗。GB/T 4789.13-2003

1、活菌計數  2、確證試驗

三)其它方法

1、腸毒素檢測：1)反向間接血凝試驗(RPHA)；2)凝膠沉澱試驗(AGP)；3)豚鼠皮膚試驗；4)結腸袢試驗(90分鍾法) 2、動物試驗(用家兔和小白鼠做試驗)：1)“泡沫肝”試驗；2)小白鼠致死試驗；3．中和試驗