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禽流感病毒檢驗



錄入時間:2011-5-3 9:34:59 來源:食品夥伴網

禽流感病毒
     (Avian influenza virus,AIV)
自1878年Perroncito首次報道意大利雞群暴發禽流感至今的一百多年曆史中,禽流感呈廣泛性傳播和全球性分布,世界範圍內許多國家和地區均有禽流感暴發和流行的報道,給養禽業造成了很大的經濟損失。更為可怕的是由高致病性禽流感病毒(HPAIV)引起的疫病暴發在上世紀九十年代之前共有9次發生,21世紀初的近幾年又連續爆發,對世界範圍內養雞業及人類健康造成極大危害。禽流感:具有爆發突然、蔓延迅速、波及麵廣等特點,人類、豬、家禽、野禽、水禽等均是受害對象。
人流感:我國每年流感病例數為1.2億至2.4億例,重症流感病例為60萬至100萬例,死亡為5萬至10萬人,因流感而導致的經濟損失十分驚人。
 
一、生物學特性
正粘病毒科/甲型流感病毒屬。病毒粒子一般為球形,直徑為80~120nm,但也常有同樣直徑的絲狀形式,長短不一;外有囊膜,囊膜表麵有許多放射狀排列的纖突(Spikes),纖突分兩類,一類是棒狀,由血凝素(HA)分子的三聚體構成;另一類是蘑菇狀,由神經氨酸酶(NA)分子的四聚體構成,兩種結構在囊膜上的比例約為HA:NA=75:20。
透射電鏡下呈圓形,其表麵有纖突(×60 000)。 核酸型為單股負股RNA,分8節; 8個獨立的RNA片段,分別編碼PB1,PB2,PA,HA,NP,NA,M1,M2,NS1,NS2等10種蛋白。
培養特性:易在雞胚以及雞和猴的腎組織培養中生長;有些毒株也能在家兔、公牛和人的細胞中生長;在組織培養中能引起血球吸附,並常產生病變;大多數毒株能在雞胚成纖維細胞培養中產生蝕斑;有些毒株在雞、鴿或人的細胞培養中培養之後,對雞的毒力減弱。
抵抗力:禽流感病毒對外界因素的抵抗力較弱,56℃ 30min、60℃ 10min、65-70℃ 數min即可滅活病毒。但對低溫抵抗力較強,4℃可存活1個多月,在有甘油保護的情況下可保持活力1年以上流感病毒在直射陽光下40至48小時即可失去活性。
 
二、抗原性
一)根據流感病毒的核蛋白(NP)和膜蛋白(MS)抗原性的不同,將其分為A、B、C三個血清型,三型之間的差異可通過瓊脂擴散試驗或補體結合試驗等進行測定。
二)HA和NA是病毒表麵的主要糖蛋白;具有種(亞型)的特異性和多變性,在病毒感染過程中起著重要作用;HA決定病毒的致病性,能誘發感染宿主產生具有保護作用的中和抗體,NA誘發的抗體無中和作用,但可減少病毒增殖和改變病程。
 
迄今已知有16種HA和10種NA,根據病毒HA和NA抗原性的差異,又可將其分為不同的亞型。據報道現已發現的流感病毒亞型至少有80多種;其中絕大多數屬非致病性或低致病性;高致病性亞型主要是含H5和H7的毒株。基因組極易發生變異:HA的基因的突變率最高,其次為NA基因。
AIV基因組極易發生變異
1、流感病毒基因突變,導致流感病毒發生抗原漂移(antigenic drift) ,因為流感病毒的RNA複製酶缺乏校正閱讀能力,導致不同毒力毒株出現。如1983-1984(美國)H5N2,6個月後成為高致病性,禽類病死率為90%;1999-2001(意大利)H7N1,9個月後成為高致病性。
2、基因重組是流感病毒發生抗原轉變(antigenic shift)的主要原因。目前,多數人認為抗原轉變是以前流行於人和動物流感病毒基因片段重組的結果。(鴨-豬-人-禽)(新亞型出現)
 
三、致病性
引起各種類型的禽流感( Avian influenza ,AI)。高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza, HPAI)又稱:真性雞瘟、歐洲雞瘟。OIE A類傳染病,嚴重危害養禽業。
禽流感的分類:高致病性、低致病性、無致病性。受禽流感病毒感染後的症狀:輕度的呼吸道症狀、消化道症狀,死亡率較低;較重的全身性、出血性、敗血性症狀,死亡率較高
四、AI的診斷
一) 病毒的分離與鑒定
采取病雞的呼吸道或竇內滲出物或器官組織,製成懸液,離心沉澱或過濾以去除組織碎屑;無菌懸液0.1~0.2ml尿囊腔接種10~11日齡雞胚,在35℃中培養48h。取雞胚的尿囊液,作HA試驗和HI試驗,以鑒定病毒。
二)血清學試驗
可用來證實抗體的存在--在感染後7d便可被檢測出來。用於血清學檢查的方法有:① HI試驗——檢測抗HA抗體。② 雙向免疫擴散試驗(AGP)——檢測抗NP抗體。③ 病毒中和試驗④ 神經氨酸酶抑製試驗⑤ ELISA(酶聯免疫吸附試驗).   其他診斷方法:ELISA,PCR等

 

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