食品衛生微生物檢驗實驗室操作要求（上）

食品微生物實驗室工作人員，必須有嚴格的無菌觀念，許多試驗要求在無菌條件下進行，主要原因：一是防止試驗操作中人為汙染樣品，二是保證工作人員安全，防止檢出的致病菌由於操作不當造成個人汙染。

 

 

    一、無菌操作要求

    1. 接種細菌時必須穿工作服、戴工作帽。

    2. 進行接種食品樣品時，必須穿專用的工作服、帽及拖鞋，應放在無菌室緩衝間，工作前經紫外線消毒後使用。

    3. 接種食品樣品時，應在進無菌室前用肥皂洗手，然後用75％酒精棉球將手擦幹淨。

    4. 進行接種所用的吸管，平皿及培養基等必須經消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不能放置後再使用，金屬用具應高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼三次後使用。

    5. 從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種於試管或平皿時，吸管尖不得觸及試管或平皿邊。

    6. 接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時，吸管從包裝中取出後及打開試管塞都要通過火焰消毒。

    7. 接種環和針在接種細菌前應經火焰燒灼全部金屬絲，必要時還要燒到環和針與杆的連接處，接種結核菌和烈性菌的接種環應在沸水中煮沸5min，再經火焰燒灼。

    8. 吸管吸取菌液或樣品時，應用相應的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。

 

    二、無菌間使用要求

    1. 無菌間通向外麵的窗戶應為雙層玻璃，並要密封，不得隨意打開，並設有與無菌間大小相應的緩衝間及推拉門，另設有0.5-0.7m2的小窗，以備進入無菌間後傳遞物品。

    2. 無菌間內應保持清潔，工作後用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台麵，不得存放與實驗無關的物品。

    3. 無菌間使用前後應將門關緊，打開紫外燈，如采用室內懸吊紫外燈消毒時，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時間不少於30min，使用紫外燈，應注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭，除去上麵灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。

    4. 處理和接種食品標本時，進入無菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過小窗傳遞。

    5. 在無菌間內如需要安裝空調時，則應有過濾裝置

 

    三、消毒滅菌要求

    微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養基、被汙染和接種的培養物等，必須經滅菌後方能使用。

 

   （一）幹熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法

    1．滅菌前準備

   （1）所有需要滅菌的物品首先應清洗晾幹，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密，如用金屬筒應將上麵通氣孔打開。

   （2）裝培養基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。

    2．裝放

   （1）幹熱滅菌器：裝放物品不可過擠，且不能接觸箱的四壁。

   （2）大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品分別包紮好，直接放入消毒筒內，物品之間不能過擠。

    3．設備檢查

   （1）檢查門的開關是否靈活，橡皮圈有無損壞，是否平整。

   （2）檢查壓力表蒸氣排盡時是否停留在零位，關好門和蓋，通蒸氣或加熱後，觀察是否漏氣，壓力表與溫度計所標示的狀況是否吻合，管道有無堵塞。

   （3）對有自動電子程序控製裝置的滅菌器，使用前應檢查規定的程序，是否符合於進行滅菌處理的要求。

    4．滅菌處理

    (1) 幹熱滅菌法：此法適應於在幹熱情況下，不損壞、不變質、不蒸發的物品、較常用於玻璃器皿、金屬製品、陶瓷製品等的滅菌。

      ① 器械器皿應清洗後再幹烤，以防附著在表麵的汙物炭化。

      ② 滅菌時安放物品不能過擠，不要直接接觸底和箱壁，物品之間留有空隙。

      ③ 菌時將箱門關緊，接上電源，先將排氣孔打開約30min，排除滅菌器中的冷空氣，溫度升至160℃調節指示燈，維持1.5 –2h。

      ④ 滅菌完畢後或溫度升溫過程中，須在60℃以下才能打開箱門。

   (2) 手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應按下列步驟進行：

     ① 手提式高壓鍋在主體內加入3L清水，立式高壓鍋加水16L（重複使用時應將水量補足，水變混濁需更換）.

     ② 手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內壁的方管中（無軟管或軟管鏽蝕破裂的滅菌器不得使用）。

     ③ 蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器於火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，並打開頂蓋上的排氣閥放了冷氣（水沸騰後排氣10-15min）。

     ④ 關閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規定要求，並維持規定時間（按滅菌物品性質與有關情況而定）。

     ⑤ 達到規定時間後，對需幹燥的物品，立即打開排氣閥排出蒸氣，待壓力恢複到零時，自然冷卻至60℃後開蓋取物，如為液體物品，不要打開排氣閥，而應立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢複至零，溫度降到60℃以下 再開蓋取物，以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。

   (3) 臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進行：

    ① 關緊鍋門，打開進氣閥，將蒸氣引入夾層進行預熱，夾層內冷空氣經阻氣器自動排出。

    ② 夾層達到預定溫度後，打開鍋室進氣閥，將蒸氣引入鍋室，鍋室內冷空氣經鍋室阻氣器自動排出。

    ③ 待鍋室達到規定的壓力與溫度時，調節進氣閥，使保持恒定至

    ④ 自然或人工降溫至60℃再開門取物，不得使用快速排出蒸氣法，以防突然降壓，液體劇烈沸騰或容器爆破。

    ⑤ 使用自動程序控製式壓力蒸氣滅菌器，在放好物品關緊門後，應根據物品類別按動相應開關，以便按要求程序自動進行滅菌，滅菌時必須利用附設儀表記錄溫度與時間以備查，操作要求應嚴格按照廠家說明書進行。

    5．滅菌溫度與時間(1) 幹熱滅菌器滅菌溫度160℃，1.5-2h。(2) 壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時間

 

   （二）間歇滅菌方法

    1.滅菌方法係利用不加壓力的蒸氣滅菌，某些物質經高壓蒸氣滅菌容易破壞，可用此法滅菌。

    （1）將欲滅菌物品置於鍋內，蓋上頂蓋，打開排水口，使器內餘水排盡。

    （2）關閉排水口，打開進氣門，根據需要消毒10～20min。

    （3）滅菌完畢關閉進氣門，取出物品待冷至室溫溫度，放入37℃溫箱過夜，次日仍按上述方法消毒，如此三次，即可達到滅菌目的。

    2．血清凝固器使用方法，培養基中含有血清或雞蛋特殊成份時，因高熱會破壞其營養成份，故用低溫，可使血清凝固，又可達到滅菌目的。

    (1) 在使用該法滅菌的血清等分裝時，需嚴格遵守無菌操作，試管、平皿也經滅菌後使用。

    (2)將培養基按要求使成斜麵或高層，加足水後，接上電源，升溫75～90℃1h滅菌，放37℃溫箱過夜，再如此滅菌三次。

    3．煮沸消毒：可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰後再煮5～15 min，也可在水中加入2﹪石炭酸煮沸5 min，加入0.02﹪甲醛, 80℃煮60 min均可達到滅菌目的, 但選用煮沸消毒的增消劑時, 應注意對物品的腐蝕性.

    4．滅菌處理:滅菌後物品,按正常情況已屬無菌,從滅菌器中取出應仔細檢查放置,以免再度汙染。

    (1) 物品取出,隨即檢查包裝的完整性,若有破壞或棉塞脫掉,不可作為無菌物品使用。

    (2) 取出的物品,如為包裝有明顯的水浸者,不可作為無菌物品使用。

    (3) 培養基或試劑等,應檢查是否符合達到滅菌後的色澤或狀態,未達到者應廢棄。

    (4) 啟閉式容器,在取出時應將篩孔關閉。

    (5) 取出的物品掉落在地或誤放不潔這處,或沾有水液,均視為受到汙染,不可作為無菌物品使用。

    (6) 取出的合格滅菌物品,應存放於貯藏室或防塵櫃內,嚴禁與未滅菌物品混放。

    (7) 凡屬合格物品,應標有滅菌日期及有效期限。

    (8) 每批滅菌處理完成後,記錄滅菌品名、數量、溫度、時間、操作者。