我國厭氧菌檢驗現狀及改進措施（2）

 二、今後開展厭氧菌檢驗工作的建議

 

       (一)實驗室分級[6]：

 

       參照目前國際上臨床厭氧菌檢驗發展的現狀結合我國的實際情況(臨床實驗室人員素質和設備條件)，建議按厭氧菌檢驗內容將實驗室劃分為 I、Ⅱ 、Ⅲ級。

 

       I級實驗室檢驗內容：

       1．設備條件：

 

       (1) 厭氧罐或厭氧袋。

 

       (2) 運送培養基，常用高層半固體培養基、庖肉培養基(也可作為培養厭氧菌的培養基)。

 

       (3) 非選擇性分離培養基：常用含5％羊血布氏瓊脂或心腦浸汁瓊脂平板(BA)，厭氧菌和兼性厭氧菌都能生長，補加氯化血紅素，終濃度為5μg／ml．VITEKll0μg／m1有利於類杆菌和產黑色素杆菌生長；硫乙醇酸鈉肉湯增菌培養基和厭氧菌血液培養瓶等。 (4) 選擇性分離培養基：常用羊血苯乙醇(PEA)瓊脂平板，在厭氧菌基礎培養基中加入O．25g／100m!苯乙醇，可抑製變形杆菌蔓延生長和革蘭陰性兼性厭氧菌生長，革蘭陽性和革蘭陰性的專性厭氧菌生長好，但革蘭陽性兼性厭氧球菌也生長；類杆菌—膽汁－七葉甙（BBE）瓊脂平板，在100ml厭氧菌基礎培養基中含有七葉甙0．1g，牛膽汁2g，氯化血紅素lmg，慶大黴素10mg，枸櫞酸鐵銨0．05g，脆弱擬杆菌群生長良好，形成暗的其周圍有棕色或黑色暈環的菌落；卡那黴素－萬古黴素凍融血瓊脂平板(KVLB)在厭氧菌基礎培養基中補加凍溶血5％一10％，卡那黴素50一l00μg／ml，萬古黴素7．5μg／ml，VITEK l10μg／ml，有利於產黑色素杆菌的生產，以提早24小時出現色素。 

 

       (5) 滅滴靈紙片：5μg／片，有抑菌環即為敏感，絕大多數專性厭氧菌對滅滴靈敏感，兼性厭氧菌耐藥，如果周圍出現抑菌環，表明有專性厭氧菌存在。Ⅰ級水平實驗室可根據本室情況，將標本接種在非選擇和選擇培養基上，貼l張滅滴靈紙片，35℃，培養48小時。滅滴靈紙片周圍出現抑菌環說明有厭氧菌生長(極少數厭氧菌種耐藥)，在其周圍挑取不同的菌落做耐氧試驗，分純細菌做次代培養。

 

       2．鑒定內容：

 

 

       I級實驗室隻要求用簡單的條件做厭氧菌培養，結合革蘭染色、細菌形態和菌落特點做到初步推斷厭氧群或屬。見表l。

 

       表l I級水平實驗室厭氧菌鑒定表

 

 

Ⅱ級實驗室檢驗內容：

 

       Ⅱ級實驗室除使用I級實驗室的設備外，還應進行厭氧菌分群和某些種的鑒定。根據菌落和菌體形態、革蘭染色，對含一定量抗生素紙片的敏感性(包括卡那 黴素紙片 lmg／片，萬古黴素紙片5μg／片，多粘菌素E紙片10μg／片)。厭氧菌純培養抑菌環大於等於10mm為敏感。靛基質、硝酸鹽紙片、觸酶等簡便的試驗推斷厭氧菌群、屬和菌株的種名。見表2。

       表2 Ⅱ級水平實驗室革蘭陰性厭氧菌群、屬、種鑒定