醫院感染監控常用的檢測方法(2)

4． 使用中消毒劑和無菌器械保存液的微生物學監測

（1） 采樣時間： 采取更換前使用中的消毒劑與無菌器械保存液。

（2 ） 采樣量及方法： 在無菌條件下，用無菌吸管吸取1ml被檢樣液，加入到9ml稀釋液中混勻。醇類和酚類消毒劑用普通營養肉湯作稀釋液。含氯消毒劑、含碘消毒劑、過氧化物消毒液需在檢驗地帶網肉湯內加入0.1%硫代硫酸鈉作稀釋液。季銨鹽類消毒液需在肉湯中加入3% Tween 80和0.3％卵磷脂作稀釋液。含有表麵活性劑的各種複方消毒劑需在肉湯中加入3％Tween 80作稀釋液。常用消毒劑的中和劑見表6-3-2。

    (3) 細菌菌落總數檢查：分別取1ml采樣液放入2隻滅菌平皿內，用普通營養瓊脂作傾注培養，將其中一隻平板置20℃培養7d,觀察真菌生長情況；另一平板放37℃溫箱內培養72 h計數菌落。 平板上有菌生長，證明被檢樣液有殘存活菌，若每個平板菌落數在10個以下，仍可用於消毒處理（但不能用於滅菌）；若每個平板菌落數超過10個，說明每毫升被檢樣液含菌量已超過100個，不宜再用。

（4）判斷標準：使用中消毒劑，細菌菌落總數≤100 cfu/ ml，病原微生物不得檢出；無菌器械保存液必須無菌。

5． 醫療用品的微生物學監測

（1）采樣時間：在消毒或滅菌處理後，存放有效期內采樣。

（2）采樣量及采樣方法：可用破壞性方法取樣的醫療用品，如輸液（血）器、注射器和注射針等均參照《中華人民共和國藥典》2000年版二部附錄中“無菌檢查法”規定執行。對不能檢驗地帶網用破壞性方法取樣的特殊醫療用品，可用浸有無菌9g/L氯化鈉溶液的棉拭子在被檢物體表麵塗抹采樣，被采表麵<100 cm2，取全部表麵；被采表麵≥100 cm2，取100 cm2。

（3）無菌檢查：參照《中華人民共和國藥典》2000年版二部附錄中“無菌檢查法”。

（4）細菌菌落總數檢查：1ml采樣液放入滅菌平皿內，用普通營養瓊脂作傾注培養，放37℃溫箱內培養24~48 h計數菌落。

物體表麵細菌菌落總數（cfu/ cm2）=   平板上菌落數×采樣液稀釋倍數×采樣麵積（cm2）

（5）判斷標準：進入人體無菌組織、器官或接觸破損皮膚、粘膜的醫療用品必須無菌。接觸粘膜的醫療用品細菌菌落總數≤20 cfu/g或100 cm2, 不得檢出病原微生物。

 

6． 血液和腹膜透析所用的水及透析液的微生物學監測

   （1）采樣點：透析用水出口（ 自來水經過過濾、軟化、活性炭吸附、去離子逆滲透等步驟處理後的出口）、透析液出口 （即透析結束時透析液離開透析器的出口）。如疑有透析液汙染或嚴重感染病例，應增加采樣點，如原水口、透析液配比機、反滲水出口、貯水罐出口、透析液進口等。

（2）細菌菌落總數檢查： 取透析用水或透析液1ml放入滅菌平皿內，用普通營養瓊脂作傾注培養，放37℃溫箱內培養24~48 h計數菌落。

細菌菌落數（cfu/ ml）= 平板上菌落數×采樣液稀釋倍數×所取液體的容積（ml）

（3）判斷標準：透析用水的細菌落菌總數≤100cfu/ml；透析結束時，透析液細菌落菌總數≤2000cfu/ml，並且無致熱原物質存在。

 

7． 紫外線消毒效果監測

（1）紫外線燈管輻射強度值的測定：

開啟紫外線燈5min後，按說明書*作，將測定波長為253.7 nm的紫外線強度測定儀（指定有效期內）探頭置被檢紫外線燈下垂直1m的中央處，儀表穩定後所示數據即為紫外線檢驗地帶網燈管的輻射強度值。其中30W直管型紫外燈新燈管輻射強度值≥100μW/cm2，使用中輻射強度值≥70μW/ cm2； 30W高強度紫外線新燈的輻射強度值≥200μW/cm2。

（2）微生物學檢測方法：開啟紫外線燈5min後，將8片染菌玻片平放入滅菌器皿中，水平放於紫外線燈下適當距離照射，於4個不同間隔時間各取出2片染菌玻片，分別投入2支盛有5ml洗脫液（含1% Tween 80、1%蛋白腖的9g/L氯化鈉溶液）試管中振打80次，經適當稀釋後，取0.5ml洗脫液放入滅菌平皿內，用普通營養瓊脂作傾注培養，放37℃溫箱內培養48 h計數菌落。另取2片未作照射處理的染菌玻片分別投入2支盛有5ml洗脫液試管中振打80次，餘按上述*作。

    計算細菌殺滅率（%）= 未照射染菌玻片回收菌數－紫外線照射染菌玻片回收菌數-   未照射染菌玻片回收菌數

（3）判斷標準： 對指示菌殺滅率≥99.9%為消毒合格；對達到物理學檢測標準時，作為消毒合格的參考標準。