沙門菌顯色培養基與普通培養基SS、HE的比對實驗

 

 

　[摘要]  目的  比對沙門菌顯色培養基與普通培養基在檢測腹瀉便時的敏感性差異。方法  將1000份腹瀉便標本增菌後接種沙門菌顯色培養基簡稱(CAS)和SS、HE沙門菌普通培養基做比對試驗。結果  沙門菌在CAS平板上呈現特定型的紅色菌落，非沙門菌呈現藍色或無色菌落。1000份腹瀉便標本中CAS陽性檢出檢驗地帶網率為1.6%,高於SS陽性檢出率1.5%和HE陽性檢出率1.4%。結論  采用CAS選擇性平板分離沙門菌較易鑒別且直觀，同時也可以克服因肉眼挑選帶來的主觀誤差，本次試驗CAS沙門菌的檢出率優於SS、HE普通選擇性培養基，適於腹瀉標本中沙門菌的檢測。

　　[關鍵詞]  沙門菌；沙門菌顯色培養基；沙門菌普通培養基

　　沙門菌是引起食物中毒和腸道腹瀉的病原菌之一。在食物中毒等突發公共衛生事件中，在我國內陸地區沙門菌占首位[1]。因此，尋找一種快速準確的鑒定沙門菌的試驗方法尤顯重要。沙門菌顯色培養基(CHROM Agar Salmonella, CAS)是一種新型培養基，由於添加了特異的顯色底物組合可以更精確的反映出樣品中含有的沙門菌[2]。為了了解其在實際工作中的優勢特做如下比對試驗。

　　1  材料和方法

　　1.1  材料

   　1.1.1  樣本來源  選擇2008年7～9月(東北腹瀉流行季節)由吉林大學臨床二院、吉林市醫院腸道門診送檢的符合監測病例標準的腹瀉病人的糞便或肛拭標本共1000份。

　　1.1.2  培養基  亞硒酸鹽增菌液(SF)、沙門-誌賀菌瓊脂(SS、HE)和腸道綜合雙糖管及其腸杆菌科鑒定編碼等培養基均購置北京陸橋生物技術公司；腸道菌生化鑒定卡API20E購置法國梅裏埃公司；沙門菌顯色培養基CAS產自法國科瑪嘉，鄭州博賽生物技術研究所分裝；沙門菌診斷血清購置衛生部蘭州生物製品研究所。以上試劑均在有效期內使用。

　　1.2  方法

　　1.2.1  標本的檢測方法  肛拭樣品檢測按照GB／T17012-1997中相應操作規程進行。

　  1.2.2  菌株的篩選和鑒定  在CAS和SS、HE分離平板上挑取相應的疑似菌落接種腸道雙糖鑒別生化管，經初篩符合者(甘露醇＋、葡萄糖＋、尿素－、蔗糖－、動力＋、電基質-、硫化氫＋)做沙門菌檢驗地帶網血清玻片凝集試驗和係統生化鑒別試驗，如果生化符合、血清多價“O”、凝集的菌株再做單價凝集，按Kuffman white抗原表用“O”、“H”、因子血清或“H”位相誘導鑒定出完整抗原式，初篩排出的疑似菌株經氧化酶試驗陰性後係統生化編碼鑒定到種。

 

　　1.2.3  菌株接種培養  將鑒定出的16株沙門菌和非16株沙門菌接種在CAS培養基和SS、HE培養基上，經37℃24小時培養後觀察菌落顏色。

2  結果

2.1  菌落培養情況

16株沙門菌和16株非沙門菌在CAS培養基上的菌落顏色見表1。在CAS平板上，沙門菌落顯紫紅色、大腸杆菌、陰溝杆菌、枸櫞酸杆菌和宋內誌賀氏菌菌落顯藍色，痢疾杆菌和變形杆菌顯無色或灰白色。

 

　　2.2  標本的檢測結果

 

　　1000份腹瀉便CAS檢出16株沙門菌檢出率為1.6%；SS檢出15株沙門菌檢出率為1.5%；HE檢出14株沙門菌檢出率為1.4%。三種培養基檢出結果類似，CAS培養基與SS比較(x2=0.082，P＞0.05)無顯著性差異；CAS培養基與HE比較(x2=0.13，P＞0.05)無顯著性差異。

 

　　3  討論

 

　　在腸道門診中由於糞便采樣不規範、病人廣泛服用抗生素及培養基的特異性有限等因素影響，傳統分離方法的靈敏度有所降低。沙門菌在CSA顯色平板上菌落都表現為檢驗地帶網較易辨認的紫紅色，而其他非沙門菌呈現藍色或灰白色。說明該顯色培養基對沙門菌有較高的特異性，易於辨認兩種或兩種以上混合的病原菌，可針對性的挑選沙門菌可疑菌落，避免因檢測可疑菌菌落數量少或檢測不夠熟練而導致漏檢的可能性。雖然CAS平板與SS、HE平板的檢測結果無統計學差異，但CAS平板的沙門菌檢出率高於SS、HE平板。

 

　　本次試驗SS和HE平板對沙門菌檢測的敏感性低於CAS平板的原因主要是標本中大量枸櫞酸杆菌和複雜的腸杆菌所表現出的假陽性菌落的影響。由於沙門菌在CAS培養基上顯示紫紅色的菌落，那麽在做食品檢樣時，就可以比較容易的區分沙門菌落和食物形成的類菌落似的殘渣。

　　4  結論

 

綜上所述，SS、HE平板仍是國內實驗室普遍采用的沙門菌選擇性平板之一，CAS平板與SS、HE平板適用於沙門菌的分離。但沙門菌在CAS平板上有易於鑒別、選擇性好的特點，其優勢還是遠遠大於普通培養基的選擇性。特別是在混有沙門菌的混合菌和突發公共衛生事件的處理中，首選CAS平板還是會取得較好的分離效果。

　作者:吉林省吉林市船營區疾病預防控製中心 (張穎)  130000  吉林省吉林大學第二臨床醫院 (潘春枝)

　　參考文獻

　　[1]何曉青.衛生防疫細菌檢驗.北京:新華出版社,1989.

　　[2]Olivir G,Patrick DIC Patrick B,et aI.Comparison of CHROMagar salmonella midium and hektoen entnric agar for isolation of salmonellae from stool samples.J Clin Microbiol,1999,37:762-765.